李伟杰,赵 耘,杜昕波,康 凯,陈 敏

(中国兽医药品监察所,北京 100086)

多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,Pm)是具有异质性特征的病原菌亚种群,常引起牛、猪、鸡、兔等家养动物和野生动物以败血症及呼吸系统疾患为主的疾病[1-2]。目前认为不同菌株之间在宿主亲嗜性、致病力、碳水化合物发酵、菌落形态和抗原特异性等方面具有明显差异[1,3]。由于荚膜血清型决定病原菌的免疫原性,各血清型之间交叉免疫保护性较低,对该致病菌进行荚膜分型就显得尤为重要[1]。1984年Carter G R等[2]提出多杀性巴氏杆菌血清型的标准定名,分为A、B、D、E和F 5个荚膜血清型。T ownsend K M等[4]研究表明,KMT1基因是Pm种特异性的片段。而荚膜生物合成位点hyaD-hyaC 、bcbD 、dcbF 、ecbJ 、fcbD 分别是 A 、B、D 、E、F血清型高度特异性的基因[3]。本试验拟对上述特定的基因序列选择不同引物进行扩增,研究多杀性巴氏杆菌种的鉴定和荚膜分型,以及与Biolog鉴定和传统血凝抑制试验的符合率。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 菌株 多杀性巴氏杆菌参考菌株CVCC390(A 型)、CVCC391(B 型)、CVCC392(D 型)、CVCC393(E型)、CVCC395(F型)和多杀性巴氏杆菌 C44-2 、C44-10、C44-18、C44-44 、C44-49、C45-11、C46-11、C47-5、C48-3均由中国兽医药品监察所菌种室提供;支气管败血波氏杆菌CVCC2999、胸膜肺炎放线杆菌CVCC266、大肠埃希菌CVCC244、猪链球菌CVCC606、粪肠球菌A20由中国兽医药品监察所菌种保藏中心提供。

1.1.2 主要仪器及试剂 三洋CO2培养箱,Biolog细菌鉴定仪,Eppendorf PCR仪,北京六一电泳槽,Wealtec Dolphin-chemi凝胶成像系统,上海精宏隔水式培养箱;Taq DNA聚合酶,10×PCR buffer,dNTP,DNA Marker DL 2 000和琼脂糖购自宝生物工程(大连)有限公司;染料Goodview购自北京赛百盛基因技术有限公司。

1.2 方法

1.2.1 菌株培养 将冻干保存的多杀性巴氏杆菌用马丁汤溶解后……