王 慧，白 莉

（山西医科大学第一医院皮肤科，山西太原 030001）

扁平苔藓（lichen planus）是一种病因不明的慢性或亚急性炎症性皮肤病，其组织学特征显示为上皮基底细胞的液化变性、基底膜带损伤。目前关于其基底膜带损伤机制的研究甚少。本文旨在检测扁平苔藓中MIF、MMP-9的表达，进一步探讨两者与扁平苔藓基底膜带损坏的关系。

1 材料与方法

1.1 材料

病例组30例均系2008～2009年在我院皮肤科就诊，经临床和病理确诊的扁平苔藓患者。其中，男17例，女13例；年龄20～64岁，平均41.9岁。所有患者在半年内均未使用过激素和免疫抑制剂治疗。于患者典型皮损处取材。对照组30例为同期在我院整形科、普外科所取的正常皮肤组织，其中，男20例，女10例；年龄 18～60岁，平均37.6岁。两组患者年龄、性别差异无统计学意义，具有可比性。各标本取材后分两份，一份经中性福尔马林液固定，石蜡包埋后用于免疫组化染色；另一份予以液氮迅速冷冻后置于-80℃冰箱保存，用作RT-PCR实验。

1.2 试剂

兔抗人MIF多克隆抗体为美国Santa Cruz公司产品，兔抗人MMP-9多克隆抗体购自北京博奥森生物技术有限公司。二步法PV-6000免疫组织化学检测试剂盒由北京中杉金桥生物技术有限公司提供。MIF、MMP-9引物由上海生工生物工程技术有限公司合成。

1.3 方法

1.3.1 免疫组化法 采用PV-6000二步法：备用标本进行4 μm厚连续切片后脱蜡，3%H2O2去离子水阻断内源性过氧化物酶； 滴加一抗 （MIF浓缩液1∶150稀释，MMP-9浓缩液1∶100稀释），37℃孵育 1 h； 滴加二抗 PV-6000，37℃孵育 20 min；二氨基联苯胺（DAB）显色，苏木素复染、脱水、封片。

1.3.2 RT-PCR法 采用Trizol一步法提取各标本总RNA，并用分光光度法检测其浓度及纯度。……