董建勋，朱朝军，路广林，李 健，张美吉，王乐平，罗 玲

(1.首都医科大学附属北京中医医院，北京 100010;2.北京中医药大学，北京 100029)

本文采用免疫组织化学法分析了经穴注射BMMSCs治疗21 d后大鼠后肢缺血骨骼肌VEGF标记的毛细血管密度、平滑肌肌动蛋白(α-SMA)标记的小动脉密度以及TNF-α和TGF-β1蛋白的表达量，尝试探索VEGF、TNF-α和TGF-β1在血管新生和动脉生成之间的关系。

1 材料与方法

1.1 材料

(1)大鼠BM-MSC:SD大鼠BM-MSCs、SD大鼠BM-MSCs完全培养液均购自 Cyagen Biosciences(Guangzhou)Inc。实验动物:SD大鼠24只，体质量200g±20g，雌雄不限，购自北京市维通利华公司，动物许可证号SCXK(京)2007-0001;(2)主要实验设备:MC0175CO:细胞培养箱(SANYO公司)，OLYMPUSix-71倒置显微镜，Nikon C-SHG1图像分析系统;(3)主要试剂:血管内皮生长因子(VEGF)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、转移生长因子-β(TGF-β1)一抗及兔SP Kit一抗为兔来源的免疫组化试剂盒，均购于北京博奥森生物技术有限公司。α-SMA一抗购于美国Abcam公司。

1.2 动物及分组

选择健康SD大鼠24只，适应性喂养3d，称重后随机分对照组、模型组、经穴注射BM-MSC治疗组(经穴组)和肌肉注射BM-MSC治疗组(肌注组)4组。于造模前、后自由进食、饮水，同等条件下饲养。

1.3 动物模型制备

［1］的方法，在无菌操作下麻醉大鼠后(腹腔注射10%水合氯醛，3.5 ml/kg)仰卧固定于鼠板上。自其左腹股沟韧带至膝关节上行一纵行切口，分离股动脉及分支。然后用5-0丝线在近左髂总动脉、腘动脉两处结扎股动脉及分支，从两处结扎的丝线中间离断股动脉及其分支，造成下肢缺血模型，随后缝合皮下组织及皮肤。术后不做抗感染处理。

1.4 治疗方法

经穴组在手术左侧后肢选取“三阴交”、“后三里”、“照海”、“环跳”、“阳陵泉”5个穴位注射 BMMSCs。……