徐玲，曲秀娟，刘云鹏，刘静，张晔，侯科佐

（中国医科大学 附属第一医院肿瘤内科，沈阳 110001）

胃癌是世界范围内最常发生的恶性肿瘤之一，多数患者在诊断时已经是晚期，5年生存率只有10%～15%［1］。肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）是肿瘤坏死因子家族的成员之一。在体外研究中，TRAIL诱导许多肿瘤细胞的凋亡，对正常细胞毒性很小。但胃癌细胞对TRAIL不敏感［2］。TRAIL 与死亡受体 4（DR4）和死亡受体 5（DR5）结合后使受体三聚化，接着募集其他效应分子形成死亡诱导信号复合体（DISC），随后caspase活化，诱导凋亡发生。奥沙利铂作为第三代含铂药物，在胃癌治疗中已经取得一定疗效［3］。为提高胃癌对TRAIL的敏感性，本研究将奥沙利铂和TRAIL联合作用胃癌BGC823细胞，探讨联合用药的机制，以及对PI3K/Akt通路的影响。

1 材料与方法

1.1 材料

重组人TRAIL购于美国Cytolab/Peprotech Asia公司。奥沙利铂购自Sanofi-Aventis公司。RPMI1640培养基购于Gibco公司。胎牛血清购于天津血液病研究所。RNase A购于AMRESCO公司。碘化丙啶（PI）、甲基偶氮唑蓝（MTT）和 LY294002购于Sigma-Aldrich公司。抗p-Akt，Akt及actin抗体购自Santa Cruz公司。

1.2 方法

1.2.1 细胞培养及分组：人胃癌细胞株BGC823常规传代培养，生长于含有10%灭活胎牛血清，青霉素（100 U/ml）和链霉素（100 mg/ml）的 RPMI 1640 培养基中，于37°C 5%CO2，饱和湿度的培养箱内培养。

1.2.2 流式细胞术检测细胞凋亡：取对数生长期细胞接种于96孔板，培养12 h后分别加入既定浓度的处理因素。16 h后分别收集对照组及处理组细胞，70%乙醇固定 4 h 后，加入 10 μl的 PI（20 μg/ml），避光孵育15 min，用FACScan流式细胞仪进行检测，WinMDI软件进行分析。

1.2.3 Western blot检测蛋白变化：收集细胞，冷PBS洗2次后加入1%Triton裂解液［1%Triton X-100，50 mmol/L Tris-Cl （pH 7.4），150 mmol/L NaCl，10 mmol/L EDTA，100 mmol/L NaF，1 mmol/L Na3VO4，1 mmol/L PMSF，2 μg/ml aprotinin］，冰上裂解 30 min，之后高速离心（15 000 r/m）30 min，取上清，Lowry法进行蛋白定量。……