王志生 郭海燕

冰冻切片是将组织直接冰冻进行切片,是一种简便快速的方法,常常用于配合临床手术等在短时间内制出切片的病理急诊[1]。由于冰冻切片组织不需经过酒精脱水、二甲苯透明和包埋等过程,脂肪、类脂质、抗原等化学物质成分不受影响,因此是临床上常用的制片方法。我们通过实践摸索出对一些特定的标本:如乳腺组织、卵巢肿瘤、甲状腺组织、肺癌标本以及喉的切缘标本等在切片过程中总结了一些方法,防止了这些组织在冰冻切片染色过程中常常由于各种原因导致组织易于脱落的难题。

1 材料与方法

1.1 仪器 选用leica CM 1900冷冻切片机首选温度冷冻室-20℃,冷冻头-22℃。

1.2 固定液 AAF固定液(70%或无水酒精 85m l冰醋酸 5 m l甲醛 10m l)。

1.3 烤箱 202-OAB型 电热恒温干燥箱,设定在 70℃。

1.4 方法 接到标本后(标本以乳腺组织、卵巢肿瘤组织、甲状腺组织、肺叶切除标本以及喉的切缘标本为例,含有脂肪组织的要尽量剔除脂肪组织)用冷冻头冷冻标本 1min左右开始切片,掌握冷冻的程度和适宜的切片时机是个较难的问题,因为不同组织所需冷冻切片的时间不同。要在实践中取得经验。组织冷冻至变白变硬时即可进行切削,新鲜组织冰冻切片时因组织本身的组织液等粘性物质就能粘贴牢固,但在某些特殊情况下如冷冻过度时的组织酥脆,切出的片子易碎有裂隙甚至呈粉末状。此时应停止冷冻稍等片刻也可以带上一次性手套,用手掌或大拇指腹紧贴组织切片面 3～5 s,利用手掌的温度使组织迅速升温,并且观察组织切面变化掌握好时机便能快捷切出完整的切片。此时冰冻切片机转轮要用另只手固定或锁死,以防转轮转动手被切片刀刮伤。有些组织如乳腺组织、卵巢囊肿的囊壁组织在切片后放入 AAF固定液中,在固定至染色过程中常有因室内温度过低或载玻片不干净含有油腻或混入尘污等脏东西等原因使组织从载玻片上脱落现象,此时应换用经防脱胶APES处理后的载玻片进行粘片。若无防脱胶玻片时,用普通载玻片进行粘附后,可以将玻片放入恒温干燥箱内底板上,此时要使粘有组织的一面朝上,烤片 10 s后拿出在室温中稍加冷却后放入AAF固定液中进行固定及染色,此时组织便可以牢牢地粘在载玻片上。

2 结果

用以上方法对组织进行快速冰冻切片,结果显示此方法简单,制片时间短,切片质量较好 ,外观平整,镜下无皱折,细胞核染色鲜蓝色,细胞核内染色质清晰,细胞核与细胞质对比清楚,透明度好。术后诊断符合率达 96%以上,与常规 HE切片染色无明显差别。

3 讨论

3.1 要做好准备工作,刀要锋利,若用一次性切片刀要定时更换切片。要保证冰冻切片机 24 h处于备用状态,预定好除霜时间,除霜时间应设在半夜 12点左右。切片刀锋利组织取材大小要适度,尤其是取材厚度要适当以 3～5mm为宜,取材过厚,冷冻时间要延长,待组织全层冻硬了,则表层过硬则切片易碎或呈粉末状,如甲状腺等疏松组织。此时用手掌或指腹贴近组织使组织迅速升温到适宜温度,此法方便、快捷,在遇到连续送检不同质地的组织时避免不断调整冰冻切片机的温度,延误诊断时间。如果组织厚度在 2mm以下经冷冻头一压组织变薄,在锁片过程中容易切到组织冷冻托头,损坏切片刀。

3.2 在用恒温干燥箱烤粘切片,时间不能过长以不超过 10 s为宜,否则会使组织干燥影响染色。

3.3 切片手法要熟练 技术员要熟练掌握机器性能和冰冻切片方法,熟悉和掌握不同组织的适宜温度和其他有关条件,只有在实践中不断积累经验。如含水分较多的疏松组织就容易冻结而含脂肪较多的组织就难以冻结。在同样条件下前者冷冻快,后者冷冻慢。切片时要适当延长冷冻时间,当观察组织全部变白即可切片。切片刀的温度在-20℃左右就能切出比较满意的切片。冰冻切片在允许的时间内都可以完成,保证质量是前提,并不是越快越好。

3.4 冰冻切片通常比石蜡切片厚,细胞由于未固定往往偏大。在制片过程中要根据不同的组织调节不同的温度。有时温度过低会使组织过脆、切片撕裂;带有脂肪的组织往往难切而引起折叠,有时染色不佳影响观察或冰冻过度细胞内出现空泡冰晶而误诊。

3.5 术中冰冻切片快速诊断,首先要求临床医师尽量提供完整病史和手术所见,准确取材,提出初步诊断意见。病理医师也要准确取材,不要仅限 1块,应取 2～3块为最佳,并要求技术员要认真仔细观察不断总结经验才能制作良好切片,保证冰冻诊断质量。

4 小结

总之,冰冻切片是较难掌握的病理实验技术之一,要做好一张冰冻切片绝不能只求速度,否则常适得其反[2,3]。为了不漏诊、误诊,及时准确地作出诊断,确保结果科学性、正确性、真实性,这就需要医护人员在进行冰冻切片时应有严格的责任心、严谨的工作态度、密切联系临床、丰富的工作实践经验,不断提高切片质量,总结经验和教训,这样才能更好的为临床和科研服务。近几年随着科学技术的现代化实现,病理学科也引进了许多自动化装置,如病理标本的自动脱水机,自动包埋机、自动切片机、自动染色机、自动免疫组化机等。并随着互联网技术的发展,开展了远程病理图文会诊,为临床提供了更便捷、可靠、有效的诊断治疗建议。

[1] 于洪藻,李成库.病理标本制作技术.白求恩医科大学出版社,1980:72.

[2] 王伯云,李玉松,黄高昇,等.病理学技术.人民卫生出版社,2000:230.

[3] 陈敬彬,杨成斌,刘红霞.肺部肿物术中冰冻切片误诊原因分析实用医药杂志,2010,27(4).