佟苗苗，翟延君*，王添敏

（辽宁中医药大学，辽宁大连116600）

急性子为凤仙花科植物凤仙花Impatiens balsamina L.的干燥成熟种子，始载于《救荒本草》。具有破血软坚、消积的功效，用于癥瘕痞块、经闭、噎膈［1］。《中国药典》仅有性状鉴别内容，缺少内在质量控制方法。急性子中含黄酮类化合物［2］，且黄酮类成分化学性质稳定、药理作用明确。因此本研究以槲皮素和山奈酚为含量测定指标，对10个不同地区的商品药材进行含量测定，为急性子的内在质量控制提供参考。

1 材料

Agilent 1100高效液相色谱仪（安捷伦科技），紫外检测器G2170BA（安捷伦科技），KH-300B型超声波清洗器（昆山禾创超声仪器有限公司），ALC-110.4万分之一分析天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司），CP225D十万分之一分析天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司），DZKW-D-2型水浴锅（北京市永光明医疗仪器厂）。甲醇为色谱纯，水为重蒸水，其他试剂均为分析纯。槲皮素 （批号 00081-200406），山奈酚（批号110861-200808）对照品均由中国药品生物制品检定所提供。急性子商品来源于吉林通化、辽宁丹东、大连、鞍山、新民、河北保定、邯郸、天津、山东烟台、四川成都。经本校中药鉴定教研室翟延君教授鉴定。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱为 Agilent C18（150 mm×4.6 mm，5μm）；流动相甲醇（A）-0.3%磷酸水（B），梯度洗脱，0～12 min，从45%A线性变化至50%A。检测波长为360 nm；流速为1.0 mL／min；柱温为25℃。理论塔板数按槲皮素计算应不低于3000。采用此色谱条件，供试品及对照品色谱分离度良好。

2.2 对照品溶液的制备 精密称定槲皮素和山奈酚对照品适量，加甲醇制成每1 mL含槲皮素0.046 mg，山奈酚 0.001 3 mg。

2.3 供试品溶液的制备 取急性子药材粉末1 g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入甲醇-40%盐酸（5：1）20 mL，超声提取40 min，放冷，称重，加甲醇补足重量，滤过，续滤液经0.45μm微孔滤膜滤过，即得。

2.4 线性关系考察 分别吸取槲皮素、山奈酚混合对照品溶液 7，9，11，13，15，17，19μL 注入高效液相色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积，槲皮素、山奈酚样量为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线，回归方程：槲皮素：Y ＝ 2 187.7X+106.64，r＝0.999 9，线性范围：0.322～ 0.874μg 山奈酚：Y ＝ 168.47X-45.532，r＝0.999 6，线性范围：0.009～0.025μg。

2.5 精密度试验 精密称取河北邯郸急性子药材粉末1 g，依2.3项所述方法制备供试品溶液，按上述色谱条件进行测定，重复进样5次，测定槲皮素、山奈酚的峰面积，计算RSD分别为0.31%和1.53%，结果表明仪器精密度良好。

2.6 稳定性试验 精密称取河北邯郸急性子药材粉末1 g，依2.3项所述方法制备供试品溶液，按上述色谱条件进行测定，按 0，2，4，6，8 h间隔进行测定，结果槲皮素峰面积的RSD为0.86%，山柰酚峰面积的RSD为2.66%，结果表明供试品溶液在8 h内稳定。

2.7 重复性试验 取河北邯郸急性子药材粉末6份，依2.3项所述方法制备供试品溶液，按上述色谱条件进行测定，结果槲皮素和山奈酚平均含量分别为0.051 8%，0.001 0%；RSD 分别为 1.05%，2.17%，结果表明方法重复性良好。

2.8 加样回收率试验 精密称取已知含量的河北邯郸急性子药材粉末（0.0322%）1 g，精密加入1 mL的槲皮素、山奈酚混合对照品溶液（0.5060 mg／mL、0.0105 mg／mL），按 2.3 项所述方法制备供试品溶液，依上述色谱条件进行含量测定并计算回收率，槲皮素平均回收率为99.6%，RSD为1.65%，山奈酚平均回收率为 99.0%，RSD为 1.45%。

2.9 样品含量测定 精密称取10个地区商品急性子药材粉末各1 g，按2.3项所述方法制备供试品溶液，精密吸取供试品溶液与对照品溶液各20μL，按上述色谱条件进行含量测定，测定峰面积，结果见表1。

表1不同地区商品中槲皮素、山奈酚含量测定结果

3 讨论

本研究首先考察了甲醇-30%盐酸（5：1）、甲醇-40%盐酸（5：1）、甲醇-50%盐酸（5：1）3 种水解溶剂。结果表明以甲醇-40%盐酸（5：1）混合液作为水解溶剂时，所得样品含量最高，故确定采用甲醇-40%盐酸（5：1）混合液作为水解溶剂。又以甲醇-40%盐酸（5：1）混合液为溶剂，比较了回流和超声方法对提取率的影响，结果超声提取率明显高于回流。同时，还进一步比较了不同水解时间对提取效果的影响，结果显示40 min即水解完全。

实验结果表明，不同产地急性子被测组分中槲皮素的含量相对较高，山奈酚含量普遍偏低。而不同产地药材中槲皮素含量差异较大。这可能与地理位置、生长环境等因素有关。本实验采用HPLC法以槲皮素与山奈酚双指标为对照，对全国10个不同地区的商品急性子进行了含量测定，建立了内在质量评价方法，实验方法简便、测定结果准确，且重复性好，可为急性子的品质评价提供依据。

［1］中华人民共和国药典委员会.中国药典（一部）［S］.北京：人民卫生出版社，2010：247.

［2］鞠培俊，孔德云，李小波.凤仙花化学成分及药理作用研究进展［J］.沈阳药科大学学报 2007，24（5）：320.