韭葱黄条病毒黑龙江分离物外壳蛋白基因克隆与序列分析
2010-08-09白艳菊张匀华高艳玲耿宏伟范国权孟宪欣
张 威,白艳菊*,张匀华,申 宇,高艳玲,耿宏伟,范国权,孟宪欣
(1.黑龙江省农业科学院植物脱毒苗木研究所,哈尔滨 150086;2.黑龙江省农业科学院植物保护研究所,哈尔滨 150086;3.黑龙江省农业科学院作物育种研究所,哈尔滨 150086)
韭葱黄条病毒(Leek yellow stripe virus,LYSV)是马铃薯Y病毒属Potyvirus的典型成员,病毒粒子为弯曲线状,无包膜,长度为680~900 nm,直径11~12 nm,是侵染大蒜的主要病毒。LYSV是单链正义RNA病毒,基因组全长10 142 bp,5′端具有病毒基因组结合蛋白VPg,3′端具有Poly(A),基因组含一个开放阅读框(ORF),翻译成一个具有蛋白酶功能的多聚蛋白,再自身酶解成包括外壳蛋白在内的10个多肽[1-2]。LYSV由蚜虫以非持久方式传播,广泛分布于世界各大蒜种植区[3],严重影响大蒜的产量和品质。
黑龙江省发展大蒜产业具有得天独厚的地理、气候优势,在哈尔滨市阿城区、宁安市、富锦县、讷河县、绥陵县等地均大面积种植大蒜,是我国大蒜重要产区之一。由于大蒜为无性繁殖作物[4-6],随着种植年限的增加病毒病危害愈加严重,给黑龙江省大蒜产业的发展造成了严重影响。因此,建立快速、准确的分子检测技术对于研究LYSV发生、分布与危害具有科学意义和实用价值。国外应用RTPCR方法进行大蒜病毒检测较多,Takaki等从大蒜花叶病毒病叶上分离了LYSV的弱毒株系和强毒株系,克隆了基因组全序列,并比较其序列之间的差异[7]。目前,国内仅限于有关RT-PCR技术检测大蒜病毒的报道[2,8],但缺乏对病毒基因序列的分析。
本研究利用病毒特异性引物扩增了LYSV黑龙江分析物的CP基因,并与其他LYSV分离物进行了同源性比较和系统进化树分析,从基因水平上明确不同病原小种的进化关系,为LYSV黑龙江分离物的分子鉴定及其同种病毒不同分离物的遗传进化研究提供了理论依据。……
