杨昭庆，黄永坤，刘馨

人轮状病毒肠炎是世界范围内的一个重要的健康问题，也是引起儿童腹泻并导致死亡的主要原因之一[1]。快速有效地分离、鉴定临床粪便样中的轮状病毒，不仅可以确证轮状病毒的感染，还可以准确监控轮状病毒流行株的变化，积累轮状病毒的流行病学数据。轮状病毒的基因组为双链RNA，分为 11 个节段，不同株型轮状病毒的 RNA 电泳图谱存在差异，可由此初步判定轮状病毒株型别[2]。本文以猴轮状病毒 SA11 株的 RNA 基因组作为模版，对 PAGE电泳和银染的检测条件进行优化，并使用优化后的条件对临床粪便样品进行检测。

1 材料与方法

1.1 主要材料和仪器

猴轮状病毒 SA11 株为本所保存；12 份临床样品来自云南昆明医学院附属第一医院，为儿科急性腹泻小儿粪便样本，收集的时间为 2009 年 11 月，随机编号 1～12 号；A 群轮状病毒胶体金诊断试纸购自北京万泰生物药业有限公司；小量液体样品 RNA 抽提试剂盒购自上海华舜生物技术有限公司；小型垂直电泳槽购自 Bio-Rad 公司。

1.2 方法

在不改变电泳设备的前提下，以猴轮状病毒 SA11 株为模版，对其 RAN 基因组的电泳条件进行了比较和优化，包括不同丙烯酰胺和N，N’-甲叉丙烯酰胺配比、分离胶、积层胶浓度、电压、电泳时间，银染的染色和显色时间。并以优化后条件对细胞培养的不同代次的轮状病毒 RNA 基因组进行检测和重复实验，确定其稳定性。

PAGE 电泳的缓冲液为 TBE，电泳结束后，使用 10%无水乙醇和0.5% 的冰乙酸洗涤凝胶 2 次，每次 5 min，然后使用 0.2% 的硝酸银溶液染色，显色液为 NaOH 和甲醛溶液。……