付世新，齐长学，罗春海，张 丽，王 瑶

(黑龙江八一农垦大学动物科技学院，黑龙江大庆163319)

溶菌酶(lysozyme)作为天然非特异性抗菌物质，广泛分布于植物、动物和微生物中[1]。普遍存在于哺乳动物的泪液、唾液、血浆、乳汁、体液、组织细胞内以及胎盘中。不仅具有杀菌作用，还具有增强免疫力、减缓炎症[2]、促进组织修复[3]等多种功能。溶菌酶在细菌性疾病的防治过程中取得了较好的预防和治疗效果，与抗生素相比显示出疗效高、无毒副作用、不产生耐药性等优势，成为研发抗生素替代制剂的热点。

牛乳溶菌酶(LYZ1)作为c型溶菌酶中的一种，在治疗奶牛子宫内膜炎、乳房炎等细菌性疾病中不仅具有相似的生物学作用，还具有同源性的优势。因此，本研究通过毕赤酵母GS115分泌表达系统获得了重组牛乳溶菌酶，与溶菌酶天然提取方法相比，克服其产量低、质量不稳定和成本高等缺点，为溶菌酶的规模化生产奠定了基础。

1 材料和方法

1.1 菌株与质粒 质粒pPICZα-A与毕赤酵母菌株GS115购自Invitrogen公司；实验用金黄色葡萄球菌ATCC6538、大肠埃希菌ATCC8099等标准菌株购自中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；无乳链球菌C55901、停乳链球菌C55935等标准菌株购自中国兽医药品监察所；乳房链球菌021-51082219购于北京早稻田生物科技发展有限公司；溶壁微球菌ATCC 4698购于Sigma公司。

1.2 主要试剂 T4 DNA连接酶、EcoRⅠ、XbaⅠ、蛋白Marker购自TaKaRa公司；牛乳溶菌酶重组蛋白的单因子血清；山羊抗小鼠二抗为Promega公司产品；Zeocin为Invitrogen公司产品；人溶菌酶标品购自Merck公司；溶壁微球菌购于Sigma公司；……