关孚时，林朝洪，申咏红，肖朝云，李 翠，戴志红，张秀英，陆连寿，王在时

(1.中国兽医药品监察所，北京100081；2.中牧实业股份有限公司成都药械厂，四川成都610100)

1 材料和方法

1.1 实验材料 已标化的牛型PPD国家标准品(批号：2000，规格：3 mL/瓶)由本实验室制备，保存于中国兽医药品监察所；国际标准品(规格：58500 IU/1.8 mg)购自英国NIBSC；体质量约400 g白色健康豚鼠由中牧实业股份有限公司成都药械厂提供；2岁龄健康西门塔尔肉牛由四川省成都市双流县鑫山牧业公司牛场提供。

1.2 候选物的制备 制备待检牛PPD国家标准品样品4批[4]，每批约2000 mL(浓缩原液)，无菌检验合格后分装于500 mL瓶中，置2℃～8℃备用。

1.3 候选物的检定筛选 待检样品的检定包括纯度测定和氮含量测定，根据检定结果筛选适宜批次制备为待检国家标准品。

1.3.1 纯度测定 首先进行多糖含量测定[5]，采用蒽酮法，用日立UV-3010紫外分光光度计于620 nm波长处分别测定葡萄糖标准品和各个样品的OD值，根据标准葡萄糖浓度与对应OD值求回归公式，计算样品多糖含量；用紫外分光光度计于260nm波长处分别测定核酸标准品和各个样品的OD值[5]，根据标准核酸浓度与对应OD值求回归公式计算样品核酸含量。

1.3.2 氮含量测定 按文献[4]的方法，采用凯氏定氮法[6]，使用福斯凯氏定氮仪2300型对候选物进行氮含量测定，氮含量乘以6.25换算成蛋白质含量。

1.4 待检国家标准品的稀释、分装、冻干

1.4.1 稀 释 每支安瓿分装蛋白质含量1.8 mg，取待检国家标准品浓缩原液730 mL、pH7.4 PBS 470 mL、苯酚6 g混合均匀，得到待检国家标准品1200 mL。

同理，由典则反交换关系(2.5)可知， s=I-s也是L2(Γ,η)上的正交投影算子，且s与s相互正交。……