犬流感病毒RT-LAMP快速检测方法的建立

2010-08-06高晓宇曹荣峰张桂红李守军

中国预防兽医学报 2010年1期

高晓宇，曹荣峰，张桂红*，李守军*

(1.华南农业大学兽医学院，广东广州510642；2.青岛农业大学动物科技学院，山东青岛266109)

犬流感是由犬流感病毒(Canine influenza virus，CIV)引起犬以体温升高、咳嗽、流鼻液、食欲减退、呼吸困难为主要特征的疾病。2004年，在佛罗里达首次从犬体内分离到流感病毒，该病毒是由甲型H3N8流感病毒引起，而且其遗传性和抗原性与当时的H3N8马流感病毒非常相似[1]。2007年，在韩国出现了犬流感H3N2病毒，该病毒源于禽类，而且犬之间通过接触可以传播[2]。近几年，本实验室在我国华南地区也分离到了CIV。鉴于CIV可以跨种和种内传播，以及危害犬类的健康，因此，建立CIV快速检测技术，将对犬流感的监测与防控发挥重要作用。

目前，实验室确诊CIV常用2种方法，病毒分离鉴定和RT-PCR检测方法。这2种方法费时费力且需要一定的实验室条件。Notomi等开发了一种新颖的恒温核酸扩增方法，即环介导等温扩增法(Loopmediated isothermal amplification， LAMP)[3]。该方法具有特异性强、灵敏度高、扩增高效、快速、步骤简单、鉴定简便等优点。迄今已建立了针对多种病原性细菌、病毒、真菌、寄生虫等的LAMP检测方法[4-7]，在耐药性基因检测[8]、家畜早期胚胎性别判定[9]等方面也有相关报道。本研究依据CIV的膜蛋白(M)基因序列保守区域设计了LAMP引物，建立了一种CIV的RT-LAMP早期快速检测方法。