刘慧慧，薛超波

(1.浙江海洋学院海科学院，浙江舟山316002；2.舟山市质量技术监督检测院，浙江舟山316021)

副溶血性弧菌是我国一种重要的食源性病原菌，可引起急性胃肠炎，少数情况还能引发败血病，危及生命。该菌引发的疾病居微生物性食源性疾病暴发之首，而且发病人数呈显著上升趋势[1-5]。舟山作为沿海城市，由于水产品的消费量较大且某些居民有生食海鲜的习惯，副溶血性弧菌成为主要的食源性致病菌。本研究以副溶血性弧菌具有种特异性的不耐热溶血素(tlh)基因为靶基因，建立了副溶血性弧菌的实时荧光定量PCR检测方法，并利用该方法结合常规培养方法对舟山地区的海产贝类中的副溶血性弧菌进行检测，同时对分离的副溶血性弧菌进行了血清分型和毒力基因分析。

1 材料和方法

1.1 菌株和抗血清 副溶血性弧菌实时荧光定量PCR检测方法建立所需菌株购自中国药品生物制品检定所，包括副溶血性弧菌标准菌株1株(菌种号：ATCC 17802)；阴性对照菌株7株，即大肠埃希氏菌(菌种号：ATCC 44113)、宋内氏志贺菌(菌种号：ATCC 51592)、鸭沙门氏菌(菌种号：ATCC 51002)、溶藻弧菌(菌种号：ATCC 17749)、霍乱弧菌(菌种号：ATCC 25872)、嗜水气单胞菌(菌种号：ATCC 7966)、弗氏柠檬酸杆菌(菌种号：ATCC 13316)各1株。耐热溶血素(tdh)基因阳性、阴性参考菌株为浙江省疾病预防控制中心(CDC)收集的临床菌株。VP诊断血清购自日本生研株式会社。

1.2 样品来源及处理 2008年选择舟山市3个较大的具有代表性的农贸市场，共采样3次，采样时间分别为4月、8月和10月份，每次分别随机采集鲜活贝类20份。……