陈瑞林， 陶 怡， 黄文辉

(广州医学院第二附属医院风湿免疫科，广东 广州 510260)

类风湿关节炎(rheumatoid arthritis，RA)是一种常见的以关节滑膜炎为特征的全身性自身免疫性疾病，呈慢性侵蚀性的炎症过程［1］。RA的发病机制复杂，至今仍未完全阐明，其中T细胞介导的自身免疫反应及凋亡异常被认为是RA发病的重要机制。本研究通过检测汉族人群RA患者外周血CD4+T细胞亚群情况，明确RA患者是否存在异常T细胞亚群的扩增及其与外周血淋巴细胞凋亡的相关性，以探讨T淋巴细胞亚群异常增殖在RA发病机制中的作用。

材料和方法

1 材料

1.1 主要试剂和仪器 Ficoll淋巴细胞分离液;PE－Cy5标记的CD3单抗，PE标记的CD4单抗及其同型对照;FITC标记的CD28单抗及其同型对照(Beckman Coulter);磷脂酰丝氨酸结合蛋白(Annexin V)－FITC;碘化丙啶(PI)(深圳晶美生物公司);流式细胞仪(Beckman Coulter)。

1.2 病人资料 2005年12月－2007年12月在本院风湿免疫科就诊的RA患者50例，其中37例女性和13例男性，平均年龄(50.12±13.8)岁(24－82岁)，均符合美国风湿病学会(ACR)1982年修订的诊断标准。所有RA患者均为新近诊断或在进入研究前1个月无服用缓解病情抗风湿药(DMARD)药物或激素;如患者服用非甾体抗炎药(NSAID)，在进入研究前1个月剂量已稳定。健康对照组50名，(女性30名，男性20名)，平均年龄(45.25±14.24)岁(22－65岁)，经问诊和体检排除自身免疫性疾病史。2组间年龄无显著差异。

2 方法

2.1 外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells，PBMC)的制备 抽取清晨空腹静脉血20 mL，肝素抗凝，在收集标本后1 h内进行淋巴细胞的分离、培养;采用Ficoll Hypaque密度梯度离心法，在淋巴细胞分离液和血浆层间收集淋巴细胞后，用PBS洗涤，一部分直接检测细胞表型及凋亡，一部分在RPMI－1640完全培养基培养24 h。……