刘瑞霞， 郭 兵， 肖 瑛， 石明隽， 王圆圆， 桂华珍， 张国忠

(贵阳医学院病理生理学教研室，贵州 贵阳 550004)

近年来，转化生长因子－β1(transforming growth factor－β1，TGF－β1)/Smad信号在组织纤维化调控机制中的重要作用逐渐被认识［1］。在肿瘤研究中发现，核转录共抑制因子SnoN(Ski－related novel protein N)是该信号通路的重要负性调控因子，可严格调控TGF－β1/Smad信号的活性。我们前期的研究发现在糖尿病肾病(diabetic nephropathy，DN)发病的前8周SnoN蛋白表达减少［2］，但有关SnoN蛋白和mRNA随DN病程延长的动态表达情况及SnoN蛋白表达的调控机制目前尚不清楚。Smad泛素化调节因子2(Smad ubiquitin regulatory factor 2，Smurf 2)是一种E3泛素连接酶，它通过介导Smad信号通路的负调节因子SnoN和Smad7蛋白的降解，在TGF－β1/Smad信号的调节中起着重要作用。已有研究发现，在梗阻性(unilateral ureteral obstruction，UUO)肾纤维化模型中Smurf 2的表达与SnoN蛋白降解之间存在着密切的相关性［3］。但有关DN肾纤维化发生发展中Smurf 2的表达情况及其是否参与了SnoN蛋白的泛素化降解过程，尚未见报道。因此，本研究动态观察了DN发生发展过程中Smurf 2蛋白和mRNA的表达情况，并初步探讨其与SnoN蛋白降解的关系。

材料和方法

1 材料

链脲佐菌素(streptozotocin，STZ)(Sigma);SnoN和Smurf 2兔多克隆抗体(Santa Cruz Biotechnology);磷酸化Smad2(p－Smad2)Ⅰ抗(Cell Signaling Technology);TGF－β1兔多克隆抗体和β－actin小鼠单克隆抗体，SABC－FITC试剂盒及生物素标记的鼠抗IgG、兔抗IgG(博士德公司);胰岛素兔多克隆抗体(博奥森生物技术有限公司);ECL显色剂(Pierce Biotechnology);总RNA提取试剂盒(Trizol法)、2×Taq PCR MasterMix及DNA MarkerⅠ(天根生化科技有限公司);RevertAidTMFirst Strand cDNA Synthesis Kit(MBI Fermentas);Smurf 2、SnoN及 β－actin引物(上海生工合成)。

2 方法

2.1 动物模型及分组 健康清洁级雄性Sprague－Dawley(SD)大鼠［上海西普尔－比凯实验动物有限公司提供，许可证号为 SCXY(沪)2003－0002］，体重(180±20)g。按55 mg/kg STZ尾静脉注射复制DM大鼠模型，48 h后测空腹血糖，血糖值≥16.7 mmol/L且尿糖阳性者作为糖尿病(diabetes mellitus，DM)大鼠，随机分成 DM 2、4、8、12、16 和 24 周组，每一时点均设鼠龄匹配的正常对照组(n=6)。……