赵荣国，真国辉，王贺双



10-羟基喜树碱的提取方法及工艺优化研究

赵荣国，真国辉，王贺双

116023 大连国人生物科技有限公司（赵荣国、真国辉）；116024 大连理工大学环境与生命学院（王贺双）

10-羟基喜树碱是从我国特有植物喜树（）中分离得到的 20 多个单体中抗肿瘤作用最强的生物碱，它不仅是临床效果较好的抗肿瘤药物，而且还是制备其他喜树碱类衍生物药品的重要中间体。由于喜树中 10-羟基喜树碱含量甚微，其制备方法的研究已成为当前热点，其中利用现代生物工程技术的方法尤为引人注目[1]。但至今鲜有报道从喜树细胞培养物中提取天然 10-羟基喜树碱的生产工艺[2-5]，本文就经次生代谢调控和微生物转化后的喜树细胞培养物中提取天然 10-羟基喜树碱的方法及工艺进行了研究，以期为规模化生产提供依据。

1 材料与方法

1.1 主要材料

1.1.1 试剂 甲醇、乙醇，分析纯，购自天津东丽化学试剂厂；二氯甲烷，分析纯，购自天津瑞金化学试剂厂；氢氧化钠、石油醚、环己烷，分析纯，购自北京化工厂；10-羟基喜树碱标准品由中国药品生物制品检定所提供。

1.1.2 仪器 高效液相色谱仪为美国 Waters 公司产品；Techsphere ODS 色谱柱和 KQ2250DB 超声波清洗仪均为大连依利特分析仪器有限公司产品；RS-20III冰冻高速离心机为日本Tokyo 公司产品；H.H.S21.6 恒温水浴锅为上海医疗器械五厂产品。

1.2 方法

1.2.1 细胞培养物样品 将收获的细胞培养物于 60℃烘箱中烘干后粉碎，过 60 目筛备用。

1.2.2 乙醇回流提取 称取细胞培养物样品 10 g，按表 1 设计因素水平，选 L9（34）正交设计表，进行乙醇回流提取，收集提取液，浓缩后进行测定。……