郭 淼,张 超,芦二永,赵 晓

hMLH 1 与 hMSH 2 是人类错配修复基因(humanemismatch repair gene, hMMR)家族中非常重要的两个基因,维持着DNA复制的高保真性及起着控制基因突变的作用,它们的功能缺陷被认为是肿瘤发病的重要机制之一,并成为近年来研究的热点。有研究表明, hMMR与食管癌、胃癌、宫颈癌等肿瘤[1]关系密切,但在下咽癌中的表达状况国内尚未见报道。本实验通过免疫组化方法检测下咽癌和正常喉组织中的hMLH1 和hMSH2 蛋白的表达状况,探讨它与下咽癌临床病理特征的关系。

1 材料与方法

1.1 材料来源下咽癌包括梨状窝癌、环后癌、咽后壁癌,因后两种类型较少见,且以放化疗为主,故本研究主要讨论梨状窝癌。所检测组织选自河南科技大学第一附属医院2008 ～2010年耳鼻喉科、头颈外科手术切除存档的下咽癌石蜡标本50例,标本均为第1次住院的原发下咽癌(梨状窝癌),术前未进行放疗和化疗;另选正常喉组织20例作对照。50例下咽癌病例中, T1期16例, T2期24例, T3期10例,T4期0例;高分化鳞癌25例,中分化鳞癌15例,低分化鳞癌10例;有淋巴结转移12例,无淋巴结转移38例。

1.2 试剂鼠抗人MLH1、MSH2单克隆抗体试剂,广谱SP试剂盒, PBS磷酸盐缓冲液等,均采购于北京中杉金桥生物技术公司。

1.3 实验方法采用免疫组化SP法,试验中染色过程按照北京中杉金桥生物技术公司提供的SP试剂盒说明书进行。用北京中杉金桥生物技术公司提供的阳性照片作阳性对照,以PBS缓冲液代替一抗作阴性对照。

1.4 结果判定hMLH1、hMSH2蛋白表达主要位于细胞核和(或)胞浆,胞核和(或)胞浆有棕黄色颗粒为阳性细胞。……