王明乐,刘俊芳,崔 淇

葛根素注射液能改善微循环、扩张冠状动脉、增加脑部供血量、减缓心率、降低心肌耗氧指数、抗血管痉挛等。根据中国药典2005年版家兔法,操作复杂、耗时长,本文对鲎试验法与家兔法进行了比较试验,结果如下。

1 主要材料

①鲎试剂:湛江安度斯生物有限公司(批号0711112, 0.25 EU/m L), 湛江博康海洋生物有限公司(批号 0708250, 0.25 EU/m L)。 ②细菌内毒素工作标准品:中国药品生物制品检定所(2007 -6, 100 EU/支)。③细菌内毒素检查用水:湛江安度斯生物制品有限公司(批号0708220,内毒素含量<0.003 EU/mL)。 ④家兔:购于中国人民解放军第150医院实验动物中心。 ⑤样品:葛根素注射液 070908(热原阳性), 070101, 070803,规格:2 m L/支。

2 方法与结果

2.1 鲎试剂灵敏度试验按《中国药典》规定方法进行试验,鲎试剂灵敏度均在0.5 ～2.0 λ,结果符合规定。

2.2 限值(L)的确定根据《中国药典》2005年版附录细菌内毒素检查法指导原则,按公式L=K/M计算, K=5 EU/kg/h), M=20 m L/60 kg,求得L=15 EU/m L,本品为联合用药,规定20 m L在 4 h内使用,除安全系数2,确定限值为7.5 EU/m L。

2.3 干扰试验在进行干扰试验前,需进行预实验。即将供试品溶液进行一系列倍数的稀释,使用鲎试剂对每一稀释倍数进行检验,每一稀释倍数下做两支供试品管(NPC)和两支供试品阳性对照(PPC)(即含2.0 λ浓度标准内毒素的该浓度的供试品稀释液),另做两支阴性对照(NC)和两支阳性对照(PC)。当阴性对照为阴性,阳性对照为阳性,实验有效。系列浓度中出现供试品溶液两管为阴性,供试品阳性对照两管为阳性时,认为供试品在该浓度下不干扰试验,此稀释度30倍即为最小不干扰稀释倍数,正式干扰试验中,选择该稀释倍数供试品溶液及检验用水将细菌内毒素工作标准品稀释成2.0,1.0, 0.5, 0.25 λ。各浓度内毒素溶液分别与两种不同厂家鲎试剂(0.25 EU/mL)混合进行干扰试验,结果表明用BET水制的内毒素标准溶液的反应终点浓度的几何平均值(Es)在0.5 ～2.0 λ之间,并且用供试品稀释液稀释的内毒素标准溶液的反应终点浓度的几何平均值(Et)在0.5 ～2.0 Es之间,证明供试品在该浓度下对细菌内毒素检查无干扰作用,结果见表1、表2。

表1 葛根素注射液干扰试验预试验结果

表2 葛根素注射液(1∶30稀释液)细菌内毒素干扰试验

2.4 比较试验将两批供试品分别进行家兔法和鲎试验法比较实验。对家兔法检查阳性样品(批号070908)的细菌内毒素检查笔者做过两次重复试验均为阴性,结果见表3。

表3 葛根素注射液家兔法、鲎试验法试验结果

3 讨论

葛根素注射液是从野葛根中提取的单体异黄酮类化合物,具有扩张脑血管,降低脑血管阻力,增加脑血流量,抑制血小板聚集,降低血黏度,改善脑循环,提高脑组织对氧的摄取能力,并改善正常或缺血的脑组织代谢,挽救缺血暗带区,缩小梗死范围[1]。葛根素注射液含有皂苷类化合物,对肝组织免疫损害具有保护作用,可有效逆转化学诱导的肝纤维化,增强心肌收缩力,保护心肌细胞作用,能扩张血管、降低血压、改善微循环,保护红细胞的变形能力,增强造血系统功能,具有抗血小板聚集,增加纤溶活性,降低血黏度作用,对肾炎、肾病肾衰模型均有保护作用,对非特异性免疫、体液免疫、细胞免疫有明显的调节作用,可促进正常人和肿瘤病人的淋巴细胞转化率,对干扰系统有明显的刺激和诱生作用,在临床上应用广泛[2]。临床上可用于辅助治疗冠心病、心绞痛、心肌梗死、视网膜动、静脉阻塞、突发性耳聋及缺血性脑血管病、小儿病毒性心肌炎、糖尿病等[3]。葛根素注射液在该试验条件下,对鲎试剂与内毒素的反应无干扰。试验发现家兔法、鲎试验法试验结果一致。由于中药注射剂的复杂性,在未弄清楚中药注射剂的许多未知成分之前尽管此样品可能不干扰内毒素与鲎试剂的反应,也建议尽量不采用鲎试验法检测。中药注射剂是我国特有的剂型,多为卫生部部颁标准收载,均采用家兔法。按最新规定,原卫生部颁标准收载的品种,如条件成熟的品种要转为国家标准,取消部颁和地方标准,这样中国药典(2005年版)就肯定收载和增加更多的中药品种。

中药注射剂一般采用家兔法进行检查,但是家兔法操作复杂,鲎试剂法是重要经典方法,与传统的家兔法相比,具有灵敏度高、重现性好、成本低、操作简便、易于掌握等特点。通过试验可以证明葛根素注射液用鲎试剂法和家兔法检测都是可行的。

[1] 孙泽铃,李以菊,闫玉芹.葛根素的临床应用[J].实用医技杂志, 2006, 13(16):2830-2832.

[2] 陶志华.新药葛根素的研究[J].中国新药杂志, 1993, 2(2):32.

[3] 孙倩.葛根素治疗急性脑梗死的疗效及机制探讨[J].新医学, 1999, 30(9):521-522.