马 妍，田俊梅，张 丁

1)郑州大学公共卫生学院营养与食品卫生学教研室郑州450001 2)河南省疾病预防控制中心郑州450016

1957年，我国学者［1］首先提出克山病与机体缺硒有关，并证实硒是人体必需的微量元素之一，是谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase，GSH-Px)的主要组成成分，具有广泛的生物学作用。我国70%以上地区缺硒，日常饮食中的硒不能满足人体需要，因此补充适量的硒对人体健康非常重要。硒蛋白是从富硒植物中提取得到的富硒蛋白质，在有机硒食品中占有重要地位。近年来有研究［2-3］报道了有机硒和无机硒在动物药理、毒理、免疫调节以及抗肿瘤活性等方面的作用。作者观察了硒强化剂硒蛋白和亚硒酸钠对低硒大鼠的补硒效果，为硒的营养强化提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料 低硒饲料:饲料中的粮食均购自河南省灵宝市朱阳镇后河村(克山病区)，其饲料组成质量百分比为:玉米33%、小麦15%、麸皮15.4%、大豆32%、混合盐 2%、磷酸氢钙 0.5%、复合维生素2%，另外每100 kg饲料中加赖氨酸80 g、蛋氨酸40 g。饲料配方由河南省实验动物中心指导配制。将上述成分按比例混匀加工成颗粒饲料，经测定硒含量为2.9%。动物:清洁级雄性SD大鼠72只，体质量140～160 g，购自北京维通利华实验动物技术有限公司，合格证号0143435。主要试剂:亚硒酸钠由黄骅市津华添加剂有限公司生产，硒蛋白由湖北希力公司提供。GSH-Px检测试剂盒购自南京建成生物工程研究所。大鼠硫氧还蛋白还原酶(TrxR)检测试剂盒由美国R＆D公司生产。

1.2 动物分组 大鼠适应性喂养3 d，单笼饲养，按体质量随机分为9组，每组8只，自由进食低硒饲料和水。每周从各组中抽取1只采尾血检测血硒值，6周后大鼠血硒平均值降为(0.27±0.04)g/L时，开始对低硒大鼠补硒。参照人推荐摄入量(RNI)和可耐受最高摄入量(UL)设计补硒剂量，分别为2、4、8、16 g/kg，亚硒酸钠和硒蛋白各4个剂量组，每日灌胃相应的硒强化剂，对照组每日灌胃纯水，连续灌胃4周，每周称体质量1次。

1.3 观察指标 末次灌胃24 h后处死。取大鼠血2 mL，2 500 r/min离心15 min，取上层血清于4℃保存备用。肝脏和肾脏组织以冰生理盐水漂洗后用滤纸吸干，称取部分肝、肾组织加生理盐水在冰浴中制备成组织匀浆，3 500 r/min离心15 min，取上清－20℃保存备用，其余组织－70℃冰箱保存。采用氢化物原子荧光光谱法［4-5］测定血清及肝、肾组织匀浆和饲料中的硒含量。肝、肾组织匀浆中GSH-Px活性采用酶促比色法测定，TrxR活性采用双抗体夹心法测定。

1.4 统计学处理 采用SPSS 13.0处理数据。不同剂量组大鼠血清及肝、肾组织中以上指标的比较进行单因素方差分析，对同剂量亚硒酸钠组和硒蛋白组以上各指标的比较行成组设计资料的t检验，检验水准 α=0.05。

2 结果

2.1 一般情况 低硒饲料喂养4周后，部分大鼠的皮毛开始显得杂乱，少数大鼠出现脱毛现象，活动减少，体质量增长减缓。补硒后脱毛现象减轻，体质量明显增加。至实验结束时各组动物无死亡。

2.2 各组大鼠血清、肝脏与肾脏组织中硒含量比较见表1。

表1 各组大鼠血清、肝脏及肾脏组织中的硒含量(n=8)

2.3 各组大鼠肝、肾组织中GSH-Px活性比较见 表2。

表2 各组大鼠肝、肾组织中GSH-Px活性(n=8)U/g

2.4 各组大鼠肝、肾组织中TrxR活性比较见表3。

表3 各组大鼠肝、肾组织中TrxR活性(n=8)U/g

3 讨论

实验所用低硒饲料中的原粮均取材于河南省克山病区，粮食经实验室检测硒含量较低，经喂养低硒饲料后，部分大鼠出现皮毛杂乱、脱毛、生长迟缓等缺硒症状。给予补硒后上述症状减轻，说明补充亚硒酸钠和硒蛋白均能有效改善动物的缺硒症状。

该研究在安全剂量范围内补充两种硒强化剂，结果表明，与对照组相比，各组大鼠血清及肝、肾组织中的硒含量均随补硒剂量的增加而增加。在同一补硒水平上，亚硒酸钠能更明显地提高肾组织中的硒含量。

该研究结果还显示，两种硒强化剂均可增加低硒大鼠肝、肾组织中的GSH-Px和TrxR活性，但其影响程度略有不同，硒蛋白对两种含硒酶活性的影响强于亚硒酸钠。硒是 GSH-Px的重要组成成分，硒代半胱氨酸是该酶提供活性中心的必需基团，可见硒蛋白可能比亚硒酸钠中的硒更易参与 GSH-Px合成而构成酶的活性中心，从而增强GSH-Px的活性。李改平等［6］的实验也证实了有机硒可使 GSHPx活性增强。TrxR是含硒的嘧啶核苷-二硫化物氧化还原酶家族的成员，长期低硒喂养的大鼠肝、肾组织中TrxR活性明显下降［7］。该实验结果也表明，对照组大鼠肝、肾组织中的TrxR均较补硒组低，补硒可以有效提高低硒大鼠肝、肾组织中TrxR的活性。硒在体内的生物功能主要是通过各种含硒酶和硒蛋白来实现的［8］，含硒酶代表了体内硒的活性形式，更能反映硒在体内的吸收利用效果。

刘琼等［9］的研究表明大剂量补硒降低鼠肝GSH-Px和TrxR基因表达和酶活性，并造成肝组织损伤。该实验是在1/2 UL的安全剂量范围内补硒，虽然在16 g/kg亚硒酸钠剂量下TrxR活性稍有降低，但剂量组间并无明显差异，整个实验结果未观察到硒过量的有害影响。在硒剂量为2 g/kg时，肝、肾组织中TrxR活性的增加与对照组相比差异无统计学意义，说明2 g/kg的补硒剂量可能对低硒大鼠来说偏低。

综上所述，与硒蛋白相比，亚硒酸钠可增加低硒大鼠肾组织中的硒含量，但硒蛋白能更好地被大鼠吸收利用。

［1］Sieja K，Talerczyk M.Selenium as an element in the treatment of ovarian cancer in women receiving chemotherapy［J］.Gynecol Oncol，2004，93(2):320

［2］向天勇，吴永尧，陈建英.大豆硒蛋白的生物学功能初探［J］.营养学报，2004，26(6):460

［3］牟维鹏，田园，朴建华，等.亚硒酸钠和硒蛋氨酸的毒性比较［J］.卫生研究，2004，33(6):700

［4］中华人民共和国卫生部，中国国家标准化管理委员会.GB/T 5009.93-2003:食品中硒的测定［S］.北京:中国标准出版社，2003.

［5］中华人民共和国卫生部.WS/T 109-1999:血清中硒的氢化物发生-原子吸收光谱测定方法［S］.北京:中国标准出版社，1999.

［6］李改平，刘子川，王梦亮.有机硒和无机硒对小鼠抗氧作用比较研究［J］.山西中医学院学报，2001，2(3):19

［7］Hill KE，Mcllollum GW，Boeglin ME，et al.Thioredoxin reductase activity is decreased by selenium deficiency［J］.Biochem Biophys Res Commun，1997，234(2):293

［8］Sun Qa，Zappacosta F，Factor VM，et al.Heterogeneity within animal thioredoxin reductases［J］.J Biol Chem，2001，276(5):3 106

［9］刘琼，甘璐，Abdella Ali，等.大剂量硒降低硒酶基因表达并致大鼠肝组织损伤［J］.营养学报，2003，25(4):378