发酵沼液对黄瓜灰霉病抑制机理研究

2010-06-19王芳何永栋何小莉

长江蔬菜 2010年12期

王芳，何永栋，何小莉

（1．宁夏农林科学院植物保护研究所，宁夏银川，750002；2.红寺堡开发区农牧局农技中心；3.宁夏石嘴山市草原工作站）

发酵沼液是由人、畜粪便及农作物秸秆等各种有机物经厌氧发酵后的残留物，是一种优质的有机物，它不仅含有极其丰富的植物所需的多种营养元素和大量的微生物代谢产物，而且含有抑菌和提高植物抗逆性的激素、抗生素等有益物质，可用于防治植物病虫害和提高植物抗逆性[1]，其作为一种废渣废水再利用、易获取的有机农药在防病抗虫方面有绝对的研究开发和推广使用价值[2]。本试验通过室内毒力测定，研究了发酵沼液对致病菌孢子萌发、菌丝生长的影响，及田间防治试验等系统抑制机理，明确发酵沼液对灰霉病菌的抑菌机理和防治效果，以期变废为宝，为发酵沼液在作物病虫害防治开发利用提供可靠的理论依据。

1 材料与方法

1.1 病原菌制备

黄瓜灰霉病菌（Botrytis cinereaPers.），从田间采集病样，采用真菌分离法[3]，分离纯化获得菌种，保存在4℃恒温培养箱中备用。

1.2 发酵沼液对黄瓜灰霉病菌的室内毒力测定

采用含毒介质法测定[4]。在无菌条件下，将发酵沼液或50%腐霉利WP按一定比例加入培养皿（直径＝90 mm）后，迅速倒入经灭菌后冷却至45℃左右的PDA培养基，混匀，制成含药平板待用，以空白PDA培养基平板和加50%腐霉利WP的为对照，每处理重复3次。待平板凝固后接入生长一致的菌饼（直径＝6.0 mm），置于25℃恒温培养箱中培养，每隔24 h，用十字交叉法测1次菌落直径，直至对照长满培养皿。用下列公式计算抑菌率：

菌落直径（mm）＝测量菌落平均值－6.0；抑菌率（%）＝（对照菌落直径－处理菌落直径）/处理菌落直径×100%。

1.3 对孢子形成的影响

将上述培养72 h的各处理和对照菌落上的孢子洗下，用血球计数板直接计孢子数，每处理重复计数3次。用下列公式计算形成孢子的数量及对孢子形成的抑制率[3]：

孢子数＝孢子平均数×4 000 000；孢子形成抑制率（%）＝（对照孢子数－处理孢子数）/对照孢子数×100%。

1.4 对孢子萌发的影响

采用载玻片萌发法[5]测定发酵沼液对黄瓜灰霉病菌分生孢子萌发的抑制作用，在适宜的温度（20℃）下保湿（湿度95%）培养，观察孢子萌发情况，以灭菌水作对照，重复3次。分别于第2，4，6，8，10 h在显微镜下检查孢子萌发情况，当对照孢子萌发率达60%以上时，每处理观察100个孢子，以可见芽管为萌发标准，统计各处理萌发率。

表1 发酵沼液对黄瓜灰霉病菌的室内毒力测定结果

孢子萌发率（%）＝萌发孢子数/检查孢子总数×100%；孢子萌发抑制率（%）＝（对照孢子萌发率－处理孢子萌发率）/对照孢子萌发率×100%。

1.5 对分生孢子及菌丝的影响

将抑菌试验培养的各处理和对照菌落，在恒温（25℃）下培养72 h后，用挑针挑取病原菌菌落边缘的菌丝体和正常菌丝体制成玻片标本，在显微数码摄像系统下观察不同浓度的发酵沼液对黄瓜灰霉病菌分生孢子及菌丝形态的影响[6]。

2 结果与分析

2.1 发酵沼液对黄瓜灰霉病室内毒力测定结果

室内毒力测定结果表明（表1），发酵沼液对黄瓜灰霉病菌有显著的抑制作用，尤其是原液，在施药后72 h时抑菌率达86.94%，随施药时间的延长，抑制作用不断增强。稀释1倍的沼液随施药时间的延长其抑菌作用亦在增加，72 h时抑菌率为84.82%。稀释2倍、4倍、8倍的沼液在施药后48 h表现出最强抑制作用，72 h时抑制作用下降。稀释16倍的沼液在72 h时表现出最强抑制作用，抑菌率为61.48%。发酵沼液原液、稀释1倍、2倍在施药后48 h内对病原菌的抑制作用与对照药剂50%腐霉利可湿性粉剂相当。从表1可以看出，随着发酵沼液稀释倍数的增加，其对黄瓜灰霉病菌的抑制作用在降低。

2.2 对孢子形成的影响

发酵沼液对黄瓜灰霉病菌孢子的形成具有明显的抑制作用（图1、图3），其对灰霉病菌孢子形成的抑制率随稀释倍数的增加而降低。发酵沼液稀释到16倍时，处理组产生的孢子数为对照（280 000）的78.57%，原液处理过的灰霉菌产生的孢子数仅为对照的10.71%，抑制率高达89.29%，表现出极强的抑制作用。

2.3 对孢子萌发的影响

载玻片萌发法测定结果表明（图2、图4），发酵沼液原液对黄瓜灰霉病菌孢子萌发抑制作用最强，抑制率达78.57%，随发酵沼液稀释倍数的增加，其对孢子萌发的抑制作用降低，发酵沼液稀释到16倍时对灰霉菌的抑制率仅为7.74%。

2.4 对分生孢子及菌丝的影响

通过显微可视摄像系统观察发现（图5、图6），经发酵沼液处理的黄瓜灰霉病菌菌丝与对照存在差异。处理组菌丝发生断裂、扭曲、分枝增多，而对照菌丝生长正常，未见断裂、扭曲现象。处理组产生的分生孢子数量明显少于对照。

图1 发酵沼液对黄瓜灰霉病菌孢子形成的影响

图2 发酵沼液对黄瓜灰霉病菌孢子萌发的影响

图3 发酵沼液对黄瓜灰霉病菌孢子形成的抑制作用

图5 未经发酵沼液处理的灰霉菌孢子

图6 经过发酵沼液处理的灰霉菌孢子

表2 发酵沼液对黄瓜灰霉病田间药效试验

2.5 对黄瓜灰霉病的田间防治效果

通过田间试验（表2）可以看出，发酵沼液在大田中对黄瓜灰霉病防治效果较差。发酵沼液选用的稀释1倍、2倍、4倍在第1次施药后4 d对灰霉病的防效分别为47.23%，38.25%，35.17%，在第2次施药后4 d防效分别为25.07%，19.08%，11.44%，防治效果均下降，且试验区药前平均病情指数为1.29，第1次药后4 d时病情指数上升到1.57，第2次药后4 d病情指数上升到2.95。说明发酵沼液只减缓了灰霉病的发病进程，并未起到控制作用。对照药剂50%腐霉利可湿性粉剂对黄瓜灰霉病有一定的控制作用，在第2次药后4 d防效达69.92%。经显著性分析，各个处理在0.05和0.01水平上均差异显著。