牛文斌 王春玲 曹会峰 魏 巍

(佳木斯大学附属第一医院泌尿外科,黑龙江 佳木斯 154003)

5α还原酶抑制剂非那雄胺广泛用于治疗良性前列腺增生(BPH),能抑制增生前列腺组织的血管形成。初步观察表明,非那雄胺降低双氢睾酮(DHT)和前列腺特异抗原(PSA)水平,对控制前列腺生长和前列腺癌(PCa)的发生发展起重要作用〔1,2〕,但其作用机制尚不明确。本研究回顾性调查我院 429例 BPH患者的药物治疗史、PCa发病情况及病理Gleason评分,评估非那雄胺对 PCa发生率及病理分级的影响,并探讨非那雄胺对 PCa血管形成的影响。

1 对象与方法

1.1 对象 收集 2004至 2008年在我院确诊的 429例 BPH患者,年龄 68～87〔平均(77.6±7.8)〕岁,整理其 BPH药物治疗史。根据 BPH患者使用的治疗药物不同,将研究对象分为非那雄胺组(n=214)和对照组(n=215)。非那雄胺组病例持续用药时间均在 6～14个月,两组病例中非那雄胺组 20例、对照组 32例(共有 52例)经 B超引导行穿刺活检或前列腺电切术后病理确诊为 PCa。

1.2 方法

1.2.1 非那雄胺对PCa发生率及病理分级的影响 对两组病例中所有确诊为 PCa的病理资料进行分析,根据Gleason分级系统进行分级:高分化腺癌(Gleason 2～6分)、中分化腺癌(Gleason 7分)、低分化腺癌(Gleasons 8～10分)。分析各组 PCa的发生率及病理 Gleason评分。

1.2.2 免疫组织化学染色检测各组肿瘤组织中微血管密度(MVD)、低氧诱导因子 1α(HIF-1α)及血管内皮生长因子(VEGF)表达情况 肿瘤组织标本来自前列腺穿刺或经尿道前列腺电切,10%甲醛固定,常规石蜡包埋、组织切片,苏木素-伊红(HE)染色。采用过氧化氢标记的链霉卵白素进行组织染色(S-P法),一抗鼠抗人 VEGF、CD34单抗、二抗 S-P试剂盒购自福建迈新公司。一抗鼠抗人HIF-1α单抗购自美国NeoMarkers公司。按说明书操作。组织切片中先后加入一抗、二抗孵育后用联苯二胺(DAB)显色,HE复染。阴性对照以磷酸盐缓冲液代替一抗。

1.3 结果判定 VEGF及 HIF-1α染色结果:细胞质出现棕黄色反应物即为阳性表达。根据切片中细胞阳性数的有无及阳性细胞的百分率,将结果分为:无表达(-):切片中无阳性细胞;低度表达(+):阳性细胞数 ＜25%;中度表达(⧺):阳性细胞数为 25%～50%;高度表达(⧺):阳性细胞数 ＞50%。CD34染色阳性的单个内皮细胞或一簇内皮细胞作为一个微血管,在200倍视野下计数 3个血管密度最高区域(热点)的微血管数目,其平均值即为肿瘤的 MVD。

1.4 统计学方法 应用SPSS11.5统计软件包。计量资料用x±s表示,采用配对 t检验,计数资料比较采用 χ2检验。

2 结 果

2.1 两组病例 PCa发生率比较 入选本研究的 429例 BPH有 52例发生前列腺癌,总发生率为 12.14%;其中非那雄胺组214例中有 20例(9.34%)发生 PCa;对照组 215例中有 32例(15.39%)发生 PCa(χ2=120.134,P=0.042)。组间比较差异显著。

2.2 两组病例 PCa病理分级比较 本研究 52例发生PCa的患者中病理分级为中高级(Gleason≥7分)的有 28例(56%),其中非那雄胺组 15例(75%),对照组 13例(36.87%),两组中高级 PCa构成比差异显著(P＜0.05)。

2.3 免疫组化结果 对照组癌组织中 MVD为 66.8±17.7,非那雄胺组为 48.4±10.8,两者差异有统计学意义(P＜0.05)。VEGF定位于细胞质;HIF-1α定位于细胞质,部分也表达于细胞核,两组比较有统计学意义(P＜0.05)。见表 1。

表1 两组 PCa VEGF及 HIF-1α表达情况(n)

3 讨 论

非那雄胺抑制睾酮在前列腺组织中转化为作用更强的DHT,从而达到抑制BPH进而使腺体缩小的目的,广泛应用于BPH的治疗;在缩小前列腺体积、减少急性尿潴留和手术的风险、提高尿流率等方面取得公认的疗效,并且对 PCa有一定治疗作用〔3〕。一项为期 7年的非那雄胺预防 PCa的研究结果显示,非那雄胺可使 PCa发生率减少 24.8%〔2〕。 PCa的发生、发展与雄激素密切相关,因此理论上影响雄激素合成、代谢和活性的因素(包括基因)均有可能影响PCa的发生。本研究结果显示,长期服用非那雄胺的PCa患者癌组织中 MVD明显少于对照组。由于肿瘤生长、转移有血管形成依赖性,抑制PCa的血管形成,就可能延缓PCa的进程。这可能是长期服用非那雄胺防治 PCa的机制之一。

目前的研究表明,5-α还原酶是影响 BPH的一种十分重要的酶,长期服用非那雄胺使 PCa病理分级提高〔2〕。 Shirakawa〔4〕等用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法也发现,人前列腺标本中同时有 5-α还原酶 1和 2的表达,两者对前列腺内 DHT的生成可能都起到一定的作用。国内叶烈夫等通过RT-PCR的方法证实在正常前列腺、BPH、PCa组织中,两型 5-α还原酶表达上皮均强于间质。在 PCa上皮组织中 5-α还原酶 1的表达强于 5-α还原酶 2,后者的表达与正常组织相近,且 5-α还原酶1与肿瘤的分级、分期正相关〔5〕。而在 BPH上皮组织中,两型5-α还原酶的表达正相反,5-α还原酶 2的表达高于 5-α还原酶1,5-α还原酶 1的表达与正常组织相近〔6〕。雄激素依赖和非依赖性 PCa细胞株均可表达 5-α还原酶活性,较高浓度的非那雄胺能够抑制雄激素依赖和非依赖性PCa细胞的增殖,这为非那雄胺治疗 PCa提供了理论依据。近期研究表明非那雄胺能够提高 PCa病人直肠指检的阳性率〔7〕。本研究结果显示非那雄胺组发病率与对照组相比有显著差异,证实在 PCa的发展过程中 5-α还原酶起着重要作用,5-α还原酶抑制剂非那雄胺能有效降低 PCa的发病率。同时本研究显示在应用非那雄胺治疗的病理分级中,诊断为中高级 PCa者明显增多,认为主要因为非那雄胺是 5-α还原酶 2抑制剂,引起 PCa组织中 5-α还原酶2通路被抑制,5-α还原酶 1通路反馈性增强,诱导 PCa细胞分化并使 PCa病理分级提高有关。

肿瘤的生长发展离不开肿瘤血管的生成〔8〕,PCa血管生成是多因素激活 VEGF的结果〔9〕。HIF-1能激活编码葡萄糖转运、糖酵解酶及VEGF的基因转录,在肿瘤对缺氧的适应性及侵袭转移中起重要作用。HIF-1α是 HIF-1主要的异二聚体亚单位,通过与一种特异的VEGF DNA低氧性应答物质连接,诱导 VEGF表达,从而促进肿瘤血管形成〔10〕。 HIF-1α在肺癌、结肠癌、乳腺癌等多种实体肿瘤中有高表达〔11〕,与 PCa关系也很密切。Zhong等〔12〕发现,在 PCa旁组织及高分级前列腺上皮肉瘤中,HIF-1α表达明显增加,提示 HIF-1α与 PCa的发生密切相关。Gao等〔13,14〕通过体外细胞培养观察到铬、矾酸盐两种致癌物质可引起人 PCa DU145细胞株 HIF-1α表达增加,其细胞培养液中 VEGF蛋白含量增多,认为 HIF-1α、VEGF表达增加可能是铬、矾酸盐诱发 PCa的一个重要途径。体外实验发现,DHT可刺激雄激素依赖性 PCa LNCaP细胞株内 HIF-1α及VEGF表达,而非那雄胺可抑制其刺激作用〔15〕。本实验结果显示,长期服用非那雄胺后,PCa组织中 HIF-1α及 VEGF表达均显著减少,提示非那雄胺可能通过抑制 HIF-1α,下调 VEGF表达,从而抑制PCa血管形成,延缓 PCa的发展进程,有效降低PCa的发病率。

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