孙 莹,吴 荒,王 波,张 灵*,赵雪俭

(1.吉林大学前列腺疾病防治研究中心白求恩医学院病理生理教研室,吉林长春130021;2.吉林大学第一医院;3.吉林大学第二医院)

胃癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一,每年新增病例90多万[1]。信号转导子和转录激活子(Signal Transducer and Activator of Transcription,STAT)是一类DNA结合蛋白,Stat3是STAT家族的重要成员,其信号传导通路与细胞的增殖、分化及凋亡密切相关,该通路持续激活可导致细胞异常增殖和恶性转化,目前定义为癌基因[2]。Survivin是凋亡抑制蛋白(inhibitor of apoptosis protein,IAP)家族成员之一。该基因在完成分化的组织中是沉默的,在大多数癌症组织中都有很强的表达。Bcl-2(B cell lymphoma leukemia-2)基因是一类重要的原癌基因,可以使染色体受损的细胞免于凋亡,此类细胞的积累在增殖基因和生长抑制基因的共同调控下可发展为肿瘤[3]。Stat3、Survivin和Bcl-2三者的高表达都可能与肿瘤的发生相关,本研究对 42例胃癌组中的Stat3、Survivin和Bcl-2表达进行检测,为揭示肿瘤发生、发展、预后规律的研究做前期工作。

1 对象和方法

1.1 实验对象

随机抽取2005年1月-2008年1月间吉林大学第一医院诊断并术后病理检查证实的胃癌患者病理切片42例作为实验组,19例正常胃组织切片作为对照组。手术切除标本均经中性福尔马林固定。自动脱水,浸蜡,包埋,切片。

1.2 实验方法

脱蜡:二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ各 30 min;100%酒精Ⅰ 、100%酒精 Ⅱ各 5 min、95%酒精 Ⅰ、95%酒精 Ⅱ各5 min;80%酒精5 min;蒸馏水、PBS各洗 5 min×3。阻断:3%H2O2孵育25 min,阻断内源性过氧化物酶,PBS洗 5 min×3。封闭:正常羊血清50 μ l/片滴于组织片上,室温下孵育20 min,封闭非特异位点。一抗:倒去多余血清,分别滴加Stat3,Survivin及Bcl-2兔抗人多克隆抗体(1∶50稀释浓缩型抗体),50 μ l/片,室温1 h,PBS 5 min×3。二抗:滴加生物素化羊抗兔IgG于组织切片,50 μ l/片,37℃30 min,PBS洗5 min×3。滴加辣根过氧化物酶(HRP)标记的亲和素,50 μ l/片,37℃30 min,PBS洗 5 min×3。DAB 显色。用蒸馏水终止反应。苏木素复染核。弱氨水中分化/盐酸返兰;酒精逐级脱水,二甲苯透明,树胶封片。显微镜下观察组织中Stat3、Survivin和Bcl-2表达情况,照相。

1.3 统计学方法

利用SPSS 13.0统计软件包处理。采用两独立样本非参数检验分析组间差异,具体采用Mann-Whitney U法。

2 结果

采用免疫组织化学染色,结果:

2.1 42例胃癌样本中,有31例Stat3表达阳性(74%),19例正常组织中,有2例Stat3表达阳性(11%)。Mann-Whitney U法检验组间差异,Z=-4.555,P ＜0.01。

2.2 42例胃癌样本中,有29例Survivin表达阳性(69%),19例正常组织中,未见survivin阳性表达。Mann-Whitney U法检验组间差异,Z=-4.960,P＜0.01。

2.3 42例胃癌样本中,有 25例Bcl-2表达阳性(60%),19例正常组织中,有3例Bcl-2表达阳性(16%),Mann-Whitney U法检验组间差异,Z=-3.148,P＜0.01。

图1 胃正常组织及胃癌组织中Stat3、Survivin和 Bcl-2的表达

3 讨论

胃癌在恶性肿瘤中患病率位居第四,死亡率位居第二(仅次于肺癌)[1],胃癌除了肿瘤本身的生长,癌细胞还会通过肌肉粘膜浸润,通过血管、淋巴管转移[4],治疗方案的选择、预后的判断对于医患双方均有非常现实的意义。研究开发新的治疗方法则有赖于基础医学领域的突破。在恶性肿瘤研究中,一些基因的表达产物与肿瘤的发生、发展等环节存在一定的相关性。

信号转导子和转录激活子(STAT)是一类DNA结合蛋白,由750-850个氨基酸组成,分子量为84-113 kDa[5]。Stat3是STAT家族的重要成员,1994年作为白细胞介素-6信号传递中的急性期反应因子被纯化。Stat3信号传导通路与细胞的增殖、分化及凋亡密切相关,该通路持续激活可导致细胞异常增殖和恶性转化,目前定义为癌基因。在前列腺癌、白血病、多发性骨髓瘤、黑色素瘤、头颈部肿瘤、乳腺癌、肺癌、脑星形细胞瘤等诸多肿瘤中,均可发现其持续性过度激活与表达。如抑制Stat3的过度表达,许多癌细胞系出现细胞凋亡;Survivin是凋亡抑制蛋白家族成员之一。Survivin蛋白的分子量为16.3kD,由142个氨基酸构成。Survivin在胚胎发育时期大量表达,对维持内环境稳定和组织分化起着重要的作用。该基因在完成分化的组织中是沉默的。在IAP家族成员中,Survivin在成人组织中的表达限制性是最强的。Survivin在大多数癌症组织中都有很强的表达[6]。在癌细胞中,Survivin的表达量增加与细胞增殖指数增加、凋亡水平下降、抵抗化疗药物能力增强、肿瘤复发率增加相关[7]。回顾性研究显示Survivin表达量增加与恶性肿瘤临床病理进展密切相关,可缩短无病存活时间。对于大部分肿瘤而言,Survivin可以作为一个预测指标,协助判断预后[8]。Bcl-2基因是一类重要的原癌基因,可以使染色体受损的细胞免于凋亡,此类细胞的积累在增殖基因和生长抑制基因的共同调控下可发展为肿瘤。在白血病、骨髓瘤、结肠癌及前列腺癌等多种组织与细胞系中均可见其异常表达[9]。

本研究结果显示,与其他恶性肿瘤一样,Stat3、Survivin和Bcl-2在人胃癌组织中表达上调,与正常胃组织相比存在明显差异,三者的高表达都可能与肿瘤的发生、发展相关。Stat3、Survivin和Bcl-2间存在交互作用,但具体通路如何尚待更为深入研究。如果能找到关键环节,采用特异分子拮抗剂,抑制肿瘤组织中相关因子的表达,就有可能在肿瘤治疗方面取得突破。

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