马忠伟,王秋玲，魏培玉（山东昌邑市人民医院，昌邑市 261300）

急性肺损伤（ALI）是以肺血管内皮细胞及肺泡上皮细胞广泛损伤为病理特征的一种严重的炎症反应[1]。该病具有起病急、死亡率高的特点，流行病学调查显示其病死率达35%～40%，是重症监护室病患死亡的主要原因之一[2]。ALI发病机制复杂，其中过度失调的炎性反应被认为是最重要的因素之一，炎性介质与抗炎因子间的平衡决定了ALI的发展与转归。

关龙胆是龙胆科多年生草本植物，包括龙胆（Gentiana scabra B.）、三花龙胆（Gentiana triflora P.）及条叶龙胆（Gentiana manshurica K.），主产于我国东北和内蒙古。其味苦、性寒，具有泻肝实火、清下焦湿热的功效，主治黄疸、胆囊炎、高血压、耳鸣等症[3]。研究发现，关龙胆乙醇提取物能显著抑制二甲苯和巴豆油引起的小鼠耳廓肿胀，减少冰醋酸致小鼠扭体次数[4]，提示关龙胆乙醇提取物具有较强的抗炎作用。关龙胆乙醇提取物能否有效改善ALI中的炎症反应，目前尚未见相关报道。本研究拟采用ALI小鼠模型，初步探讨关龙胆乙醇提取物在ALI炎症反应中的作用。

1 材料

1.1 仪器

R-1002型旋转蒸发器（上海申胜生物技术有限公司）；DZF系列真空干燥箱（上海华连医疗器械有限公司）；3K30型超低温离心机（德国Sigma公司）；550型酶标仪（美国Bio-Rad公司）。

1.2 试药

关龙胆（产地吉林，经山东昌邑市人民医院中药房鉴定为真品）；醋酸地塞米松片（天津天药药业股份有限公司，批号：0905016）；脂多糖（LPS，美国 Sigma公司）；前列腺素 E2（PGE2）、白介素-10（IL-10）酶联免疫法（ELISA）试剂盒（美国Cayman公司）；环氧化酶-2（COX-2）ELISA检测试剂盒（上海西唐生物科技有限公司）。

1.3 动物

Ⅰ级纯种NIH小鼠，♂，体质量24～28 g，由重庆医科大学实验动物中心提供（动物合格证号：SCXK20020001）。

2 方法

2.1 关龙胆乙醇提取物的制备

称取关龙胆700 g，切碎，用95%乙醇回流浸提3次（分别为3、2、2 h），合并滤液，减压浓缩至无醇味，得浸膏，备用。

2.2 分组及给药

实验分为6组，即空白（等量生理盐水）、模型（等量生理盐水）、醋酸地塞米松（0.005 g·kg-1）及关龙胆乙醇提取物高、中、低剂量（10、5、2.5 g·kg-1）组。ig给药，每天1次，连续5 d。。

2.3 ALI模型的复制[5，6]

ip 3%水合氯醛（0.3 g·kg-1）麻醉小鼠，颈部正中切口5 mm，分离气管，微量注射器由气管向肺方向滴注LPS溶液（2.5 mg·kg-1），1 min内滴注完毕，消毒缝合切口，小鼠保温护理。

2.4 ELISA法检测PGE2、IL-10、COX-2

ALI模型复制24 h后处死小鼠，眼球取血，l 500 r·min-1离心10 min，保留血浆于－80℃贮藏。按照ELISA试剂盒说明书测定血浆PGE2、IL-10、COX-2水平。

2.5 统计学方法

3 结果

3.1 关龙胆乙醇提取物对模型小鼠PGE2的影响

与空白组比较，模型组小鼠血浆PGE2水平显著升高（P＜0.01）；与模型组比较，关龙胆乙醇提取物高、中、低剂量组小鼠血浆PGE2水平显著降低（P＜0.01或P＜0.05）。关龙胆乙醇提取物对模型小鼠血浆PGE2的影响见表1。

表1 关龙胆乙醇提取物对模型小鼠血浆PGE2的影响（，n＝8）Tab 1 Effect of ethanol extract of Radix et Rhizoma Gentianae on PGE2 in mic（e，n＝8）

表1 关龙胆乙醇提取物对模型小鼠血浆PGE2的影响（，n＝8）Tab 1 Effect of ethanol extract of Radix et Rhizoma Gentianae on PGE2 in mic（e，n＝8）

与空白组比较：＊P＜0.01；与模型组比较：#P＜0.05，##P＜0.01vs.blank group：＊P＜0.01；vs.model group：#P＜0.05，##P＜0.01

组别空白组模型组醋酸地塞米松组关龙胆乙醇提取物低剂量组关龙胆乙醇提取物中剂量组关龙胆乙醇提取物高剂量组PGE2/pg·mL-1 744.24±21.301468.89±71.82＊1016.67±43.61#1158.92±39.08#1099.83±33.53#959.02±37.18##剂量/g·kg-1--0.0052.5510

3.2 关龙胆乙醇提取物对模型小鼠IL-10的影响

与空白组比较，模型组小鼠血浆IL-10水平显著升高（P＜0.01）；与模型组比较，关龙胆乙醇提取物高、中、低剂量组小鼠血浆IL-10水平显著降低（P＜0.01或P＜0.05）。关龙胆乙醇提取物对模型小鼠血浆IL-10的影响见表2。

表2 关龙胆乙醇提取物对模型小鼠血浆IL-10的影响（，n＝8）Tab 2 Effect of ethanol extract of Radix et Rhizoma Gentianae on IL-10 in mic（e，n＝8）

表2 关龙胆乙醇提取物对模型小鼠血浆IL-10的影响（，n＝8）Tab 2 Effect of ethanol extract of Radix et Rhizoma Gentianae on IL-10 in mic（e，n＝8）

与空白组比较：＊P＜0.01；与模型组比较：#P＜0.05，##P＜0.01vs.blank group：＊P＜0.01；vs.model group：#P＜0.05，##P＜0.01

IL-10/pg·mL-1 30.19±1.1799.35±8.98＊47.67±4.05#181.25±10.82#212.01±10.42#219.11±14.25##组别空白组模型组醋酸地塞米松组关龙胆乙醇提取物低剂量组关龙胆乙醇提取物中剂量组关龙胆乙醇提取物高剂量组剂量/g·kg-1--0.0052.5510

3.3 关龙胆乙醇提取物对模型小鼠COX-2的影响

与空白组比较，模型组小鼠血浆COX-2水平显著升高（P＜0.01）；与模型组比较，关龙胆乙醇提取物高、中、低剂量组小鼠血浆COX-2水平显著降低（P＜0.01或P＜0.05）。关龙胆乙醇提取物对模型小鼠血浆COX-2的影响见表3。

4 讨论

ALI是由心源性以外的多种致病因素导致的急性、进行性缺氧性呼吸衰竭，多由严重感染、创伤等原因引起，其病理表现以肺部炎性细胞、炎性介质浸润和毛细血管通透性增加为主。LPS是细菌细胞壁的主要成分，是细菌内毒素的重要成分，也是导致ALI的常见因素。

表3 关龙胆乙醇提取物对模型小鼠血浆COX-2的影响（，n＝8）Tab 3 Effect of ethanol extract of Radix et Rhizoma Gentianae on COX-2 in mic（e，n＝8）

表3 关龙胆乙醇提取物对模型小鼠血浆COX-2的影响（，n＝8）Tab 3 Effect of ethanol extract of Radix et Rhizoma Gentianae on COX-2 in mic（e，n＝8）

与空白组比较：＊P＜0.01；与模型组比较：#P＜0.05，##P＜0.01vs.blank group：＊P＜0.01；vs.model group：#P＜0.05，##P＜0.01

组别空白组模型组醋酸地塞米松组关龙胆乙醇提取物低剂量组关龙胆乙醇提取物中剂量组关龙胆乙醇提取物高剂量组COX-2/ng·mL-1 0.75±0.073.25±0.42＊1.77±0.65#2.11±0.29#1.62±0.31#1.27±0.28##剂量/g·kg-1--0.0052.5510

PGE2主要由COX催化花生四烯酸代谢生成，具有较强的扩张血管、增加血管壁通透性、促进炎性渗出的作用，是介导局部炎症应答的主要介质之一，炎症的发展与局部PGE2含量关系密切。COX-2为COX诱导型同工酶，易被各种因素诱导，是催化花生四烯酸生成PGE2的限速酶，其表达水平与炎症反应中PGE2含量密切相关。抗炎因子IL-10主要是由单核/巨噬细胞、T细胞、B细胞产生，具有降低肺泡-毛细血管膜通透性、减少肺内巨噬细胞聚集的作用[7]。此外，研究表明IL-10对抗炎反应具有双重调节作用：IL-10可抑制炎性介质IL-6和TNF-α，同时上调IL-1受体拮抗剂、可溶性肿瘤坏死因子受体等抗炎介质，使体内炎性介质/抗炎介质趋于平衡[8]。临床资料也证实，ALI病死率与 IL-10 呈负相关[9]。PGE2、COX-2 和IL-10的变化可以反映机体内急性炎症反应与抗炎介质的变化。因此，本研究测定了这些指标，用以评估关龙胆乙醇提取物在ALI炎症反应中的作用。

研究结果表明，LPS气管灌注可诱导COX-2表达增加，加速PGE2生成，促进ALI中炎症的发展。关龙胆乙醇提取物可有效抑制COX-2的表达，减少PGE2生成，其效能与地塞米松相似。关龙胆乙醇提取物和地塞米松对血浆IL-10的作用则完全不同：关龙胆组血浆IL-10显著高于模型组，地塞米松组则显著低于模型组。这提示地塞米松作为一种免疫抑制剂在抑制促炎介质生成、发挥抗炎作用的同时，也抑制了合成抗炎介质的信号通路，在一定程度上对炎症的继续发展起到了推动作用。关龙胆乙醇提取物在有效抑制促炎介质生成的同时，对抗炎介质不仅无抑制作用，而且可诱导其大量生成，有利于损伤修复。

本研究通过动物实验初步证实，关龙胆乙醇提取物可能通过诱导IL-10产生、抑制COX-2表达，进而抑制PGE2的生成等机制在脂多糖致ALI中发挥抗炎作用，这可望为ALI提供新的治疗药物。

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