钱春 何桥 翟军鹏 宋波 夏蓓蓓 张兴国 梁国鲁

（西南大学园艺园林学院，重庆 400715）

草莓（Fragaria ananassa Duch.）果实色泽鲜红、柔软多汁，营养丰富，老少皆宜。防止草莓果实成熟软化，延长草莓果实货架寿命，是草莓生产中亟需解决的问题。草莓属典型的非跃变型果实（Knee et al.，1977；Perkins-Veazie et al.，1988），许多研究表明这类果实成熟软化与细胞壁结构的变化及多糖（果胶、纤维素、半纤维素）的降解密切相关，软化主要是由于皮层薄壁组织细胞壁胞间层的降解增加果胶释放所致（Neal，1965；Knee et al.，1977；Abeles & Takeda，1990），果胶裂解酶（pectate lyase，PL）是新发现的一种降解果胶物质从而导致果实软化的酶，被认为是通过分子改良果实硬度、阻止草莓果实软化的优秀候选基因（Yoder et al.，1993）。目前国内外对草莓硬度改良多采用传统的杂交育种，基因工程主要是利用反义 RNA技术（Wooley &James，2001；Jimenez-Bermudez et al.，2002；Palomer et al.，2006），国内外尚没有利用双链 RNA干扰（RNA interference，RNAi）技术改良草莓硬度方面的报道。

本试验构建了草莓PL基因的RNAi表达载体，并通过农杆菌介导成功转入到草莓植株中，为基因工程手段培育硬肉型草莓提供新种质和育种材料开辟了新途径。

1 材料与方法

1.1 材料

试验于2008年12月～2009年7月在重庆市蔬菜学重点实验室进行。供试材料为本实验室保存的丰香草莓无菌苗；大肠杆菌菌株DH5α、植物表达载体p2024（抗Kan，GFP标记基因）、农杆菌菌株LBA4404由本实验室保存。 pMD18-T载体及所有内切酶均购自TaKaRa公司，琼脂糖凝胶回收试剂盒、植物基因组DNA提取试剂盒、质粒小量制备试剂盒均购自北京索莱宝科技有限公司；卡那霉素（Kan）、氨苄青霉素（Amp）、羧卞青霉素（Cb）、链霉素（Str）、利福平（Rfp）购自北京天根生化科技有限公司。……