谢艳华 贺中民 杨 倩 王四旺 第四军医大学药学系药物研究所(西安 710032)

α-亚麻酸作为人体必需的不饱和脂肪酸,具有重要生理活性。国际医学和营养学界的大量基础研究、流行病学调查、动物试验及临床观察表明,α-亚麻酸具有以下多方面的生理功效,即预防心脑血管病、抑制癌症的发生和转移、抑制过敏反应和抗炎作用、抑制衰老、增强智力和保护视力等功能[1]。所以,α-亚麻酸是重要的生物营养原料。本实验拟研究椒目中提取的高纯度α-亚麻酸的一般药理作用,在神经系统,呼吸系统,心血管系统实验方面加以探讨,为进一步开发利用α-亚麻酸资源及开发新药提供一定的实验基础。

1 实验材料 1.1 药品 α-亚麻酸,由第四军医大学药物研究所从椒目中提取,含量≥90%,批号20081206;临用前用食用调和油配成不同浓度备用。

1.2 阳性对照药 安定片,批号:20080401,规格:2.5mg/片,山东平原制药厂生产,批准文号:国药准字 H37023039;盐酸氯丙嗪注射液,批号:20080301,规格:2mL:50mg,上海禾丰制药有限公司,批准文号:国药准字 H31021061。

1.3 试剂 戊巴比妥钠,国药集团化学试剂有限公司,批号 WS20060401;肝素钠,批号:20070429,北京奥博星生物技术责任有限公司;钠石灰,批号:20071229,上海五四化学试剂有限公司。

1.4 仪器 IVC(独立换气笼盒 )饲养系统(上海绍丰实验动物设备有限公司);RM-6280型智能八道生理记录及分析处理系统(成都仪器厂);JZ100型肌张力换能器(量程 30g);YP100型压力换能器(量程40kpa);旷野箱为自制,55cm×40cm×30cm(长宽高 )无盖木箱,底部划分 20等格;DT-2000型电子天平(常熟市衡器厂)。

1.5 动物 BALB/c小鼠,雌雄各半,18～22g,6周龄;SD大鼠,雌雄各半,180～220g,6周龄,均由中国人民解放军第四军医大学实验动物中心提供,生产合格证号:scxk(军)字 第 2002-005号。

2 实验方法和结果 2.1 自主活动

2.1.1 抖笼法[2]:小鼠 60只,体重 18～ 22g,随机分为 5组:正常组(给予等量食用调和油 20mL/kg)、戊巴比妥钠组(皮下注射 20mg/kg)、α-亚麻酸大剂量组(4g/kg)、中剂量组(2g/kg)、小剂量组(1g/kg)。每组 12只,雌雄各半。实验前各组分别给食用调和油、戊巴比妥钠、α-亚麻酸。将吊笼与张力换能器相连结,再与 RM-6280型八道生理记录分析仪联结,形成记录分析系统。灌胃给药后立即观察小鼠的精神、行为活动,在给药后 30min和 60min分别将小鼠置于吊笼,观察记录小鼠放入吊笼中 15s内活动振动波的个数,所得数据用 t检验做统计学处理[3]。结果显示α-亚麻酸大、中、小不同剂量与正常组比较无明显差异(见表 1)。

表1 α-亚麻酸对小鼠自发活动的影响(抖笼法)(±s)

表1 α-亚麻酸对小鼠自发活动的影响(抖笼法)(±s)

注:△P＜0.05,与正常组比较。

组 别 n 30min波数 60min波数正常组 12 24.41± 4.63 23.80± 3.74大剂量组 12 23.86± 4.30 27.10±4.09中剂量组 12 26.36± 3.75 25.49±2.89小剂量组 12 25.50± 5.60 24.72±5.39戊巴比妥钠组 12 18.03± 4.08△ 20.10±4.90

2.1.2 旷野法[2]:小鼠 60只,体重 18～ 22g,随机分为 5组:正常组(给予等量食用调和油 20mL/kg)、戊巴比妥钠组(皮下注射 20mg/kg)、α-亚麻酸大剂量组、中剂量组、小剂量组。每组 12只,雌雄各半。灌胃给药 30 min后,观察、记录小鼠放入旷野箱后 2 min内在箱里活动的格数。一只小鼠四肢走到同一格内才算走动了一格,比较对照组和给药组组间平均活动格数。所得数据用 t检验做统计学处理。结果显示用α-亚麻酸大、中、小不同剂量给药 30min后小鼠与正常组比较无明显差异 (见表 2)。

表2 α-亚麻酸对小鼠自发活动的影响 (旷野法)(±s)

表2 α-亚麻酸对小鼠自发活动的影响 (旷野法)(±s)

注:△P＜0.05,与正常组比较。

组 别 n 30min内格数正常组 12 50.17±20.02大剂量组 12 55.33±15.84中剂量组 12 40.25±22.36小剂量组 12 44.92±17.45戊巴比妥钠组 12 29.25± 18.43△

2.1.3 机能协调实验:斜板法[2]:将禁食不禁水 4h的小鼠置于与水平面呈 70°角的光滑板上,每次 0.5min,共放三次,对小鼠进行筛选,取三次均不跌落小鼠 60只,体重 18～22g,随机分成 5组分别为:正常组 (给予等量食用调和油 20mL/kg)、α-亚麻酸大剂量组、中剂量组、小剂量组、阳性对照组(盐酸氯丙嗪注射液,2.5mg/kg)。每组 12只,雌雄各半。各组按体重每天灌胃给药一次。记录给药一周后不同时间点连续放三次跌落两次者为阳性,与对照组进行比较。结果显示给药一周后对小鼠机能协调功能无显著影响,而阳性对照组氯丙嗪则有显著影响(见表 3)。

表3 α-亚麻酸对小鼠机能协调的影响(n=12)

2.1.4 镇静催眠实验 2.1.4.1入睡率:对阈下剂量戊巴比妥钠小鼠的催眠作用选取小鼠 60只,体重 18～ 22g,随机分为 5组,正常组 (给予等量食用调和油 20mL/kg)、阳性对照组 (安定 ,2.5mg/kg)、α-亚麻酸大剂量组、中剂量组、小剂量组,每组 12只,雌雄各半。各组按体重灌胃给药一次,给药 1h后,每组小鼠注射戊巴比妥钠 12.5mg/kg(催眠阈下剂量),观察30min小鼠翻正反射消失达 1min以上者计为睡眠发生,计算各组睡眠发生百分率。结果(见表 4)。

表4 α-亚麻酸对阈下剂量戊巴比妥钠小鼠的催眠作用 (%;n=12)

2.1.4.2 睡眠时间:选取小鼠 60只,体重 18～ 22g,随机分为 5组,正常组(给予等量食用调和油 20mL/kg)、阳性对照组 (安定 ,2.5mg/kg)、α-亚麻酸大剂量组、中剂量组、小剂量组,每组 12只,雌雄各半。各组按体重灌胃给药一次,给药 1h后,每组小鼠给予催眠剂量戊巴比妥钠 25mg/kg,观察和记录睡眠持续时间[4](翻正反射消失至恢复的时间)。结果显示分别用α-亚麻酸大、中、小剂量给药后小鼠与正常组比较无明显差异 ,见表 5。

表5 α-亚麻酸对戊巴比妥钠催眠剂量小鼠睡眠时间的影响(±s)

表5 α-亚麻酸对戊巴比妥钠催眠剂量小鼠睡眠时间的影响(±s)

注:▲P＜0.01,与正常组比较。

组 别 n 睡眠时间(min)正常组 12 61.75±11.89大剂量组 12 69.33±12.90中剂量组 12 68.92±11.87小剂量组 12 68.25±10.68安定组 12 128.17± 13.89▲

2.2 呼吸系统及心血管系统的实验 取大鼠 32只,体重 200-250g,随机分为 4组正常组(给予等量食用调和油 20mL/kg)、α-亚麻酸大剂量组、中剂量组、小剂量组,每组 8只,雌雄各半。给药后用戊巴比妥钠30mg/kg麻醉,10min后仰卧位固定于鼠台上,手术分离气管及一侧颈总动脉,插气管插管、动脉插管及标准二导联心电电极,将张力传感器连接于剑突处用于记录呼吸,联接调试好 RM-6280型智能八道生理记录及分析处理系统,准备记录呼吸、血压、心电图。记录用药后 30、60、90、120min呼吸、血压、心电等变化。 所测数据均以±s表示,用 SPLM软件以 t检验法进行统计学处理。结果显示分别用α-亚麻酸大、中、小不同剂量给小鼠后 30、 60、90、120min对心率、血压 (SP、DP)、呼吸频率(RR)、与对照组比较无明显影响见表 6。

表6 α-亚麻酸对大鼠的呼吸、血压等影响(±s;n=8)

表6 α-亚麻酸对大鼠的呼吸、血压等影响(±s;n=8)

用药后不同时间各指标值(±s)组 别 指 标30min 60min 90min 120min正常组α-亚麻酸(大)α-亚麻酸(中)α-亚麻酸(小)HR(t/min)SP(kPa)DP(kPa)RR(t/min)HR(t/min)SP(kPa)DP(kPa)RR(t/min)HR(t/min)SP(kPa)DP(kPa)RR(t/min)HR(t/min)SP(kPa)DP(kPa)RR(t/min)380.97±51.38 15.07±1.34 11.81±2.17 64.23±12.16 383.78±34.28 15.20±1.45 12.79±1.78 60.04±11.36 390.20±50.87 15.76±1.85 11.70±1.67 65.61±11.28 405.91±66.65 15.52±3.04 12.15±2.38 76.55±23.19 367.27±42.73 15.20±1.25 11.77±2.10 64.06±10.78 395.54±45.29 15.76±1.32 12.67±1.70 59.66±9.93 390.80±38.19 15.76±1.32 12.37±1.70 65.57±11.67 392.56±61.64 15.56±3.13 11.95±2.55 72.66±11.70 389.85±17.32 14.97±1.48 11.84±1.63 66.37±9.15 451.79±92.51 15.41±1.61 11.99±1.72 58.93±9.52 394.61±48.75 15.76±1.72 11.76±2.25 62.77±10.95 416.73±67.92 15.98±2.70 12.95±2.39 71.26±14.95 401.10±43.98 15.15±1.43 12.29±1.46 63.99±8.77 372.27±35.91 15.68±1.31 12.38±1.41 58.82±9.16 378.49±33.14 15.93±1.26 12.14±1.71 62.34±8.15 407.50±68.67 16.06±2.33 12.69±2.25 71.10±13.98

3 讨 论 椒目作为一种新的木本油脂资源,其油脂中约含有 30%的α-亚麻酸,我们采用综合方法可对其中的α-亚麻酸进行有效分离和纯化[5],为椒目的综合开发和利用奠定了研究基础。

一般药理研究是新药安全性研究的一项重要内容,本实验结果表明,试验剂量的α-亚麻酸对试验动物神经系统、心血管系统和呼吸系统无明显影响,说明其临床应用安全性良好。

[1] 程国庆,李进才,蒋礼成.花椒及其混伪品的鉴别[J].陕西中医,2005,26(11):1234.

[2] 徐叔云,卞如濂,陈 修.药理实验方法学 [M].北京:人民卫生出版社,1991:652-657,642-643,644.

[3] 陈 奇.中药药理研究方法学 [M].北京:人民卫生出版出版,1996:1862-1868.

[4] 郭德玉,敖 平,孙淑玲,等.芪茸保元汤对小鼠抗疲劳及免疫功能的影响[J].山西中医,1999,15(4):41-42.

[5] 杨 倩,王庆伟,刘雪英 ,等.椒目中高纯度 a-亚麻酸的提取分离[J].天然药物研究与开发,2006,5(18):846-847.