代小芳 叶元土 蔡春芳 尹晓静 邱 燕 谭芳芳 张 俊 戴修赢 王文娟

除了常规的大豆、油菜籽、花生、油葵外，新的含油植物籽类是探索的重要目标。在我国苹果籽、南瓜籽产量丰富，作为饲料原料资源分析，苹果籽、南瓜籽的平均蛋白含量分别为34%和29%，脂肪含量分别为25%和35%，是重要的饲料蛋白质资源和油脂资源，在添加饲料油脂的同时也补充蛋白质。除此之外，苹果籽、南瓜籽含有多种营养和保健作用的成分，例如黑色南瓜籽中含有丰富的抗真菌的多肽（HX Wang，2003），这种抗真菌蛋白在普通南瓜籽中也有发现并提取（Alice，1998）。苹果籽中含有杏苷、根皮苷、多种多酚、多糖类等还原性物质，具有清除自由基、抑制脂质过氧化、减缓细胞衰老、促进机体健康生长作用。苹果籽、南瓜籽还具有降血脂、血糖、驱虫的保健作用，如果能够作为饲料油脂原料在水产配合饲料中应用，则可以替代相应的药物使用，实现饲料的绿色化。本试验主要依据苹果籽、南瓜籽脂肪含量，设计不同的饲料油脂水平进行团头鲂(Megalobrama amblycephala)的养殖试验，探讨苹果籽、南瓜籽对团头鲂鱼体氨基酸组成产生的影响。

1 材料与方法

1.1 试验鱼

试验团头鲂 (Megalobrama amblycephala)初重（14.2±1.5）g，为苏州市相城新时代特种养殖场当年池塘繁育鱼种。经两周暂养后挑选体格健壮、规格整齐的鱼种共600尾，随机分养于30个养殖桶中，每桶放养20尾。

1.2 试验饲料

选用苹果籽、黑色南瓜籽（黑瓜子）、白色南瓜籽（白瓜子）3种油籽原料，苹果籽为生产苹果酱的副产物苹果渣中挑选，来自于陕西；2种南瓜籽均来自于黑龙江，为籽用南瓜的种子。3种籽类的一般成分见表1。设计试验饲料粗蛋白含量均为28%，以油脂含量为基准，3种籽实分别以1%、2%、3%的油脂水平折算油籽量添加到饲料中，以添加1.5%的豆油作为对照组共10种试验饲料。养殖试验共设10个组，每组3个平行；10种饲料分别投喂10组试验鱼。试验饲料组成、实测营养水平见表2，饲料氨基酸组成见表3。

所有饲料原料经粉碎过40目筛，混合均匀，用小型颗粒饲料机加工成直径1.5 mm的颗粒饲料，饲料置于-20℃冰箱储存备用。饲料制粒温度在65～70℃，持续时间约1 min。

表1 3种油籽原料营养成分及部分理化特征值（鲜样基础）

表2 试验饲料配方和营养成分

表3 试验饲料氨基酸组成(干物质基础，%)

1.3 饲养管理

试验鱼用豆油对照组饲料饲喂暂养1周，鱼正常摄食后开始正式试验。养殖试验在室内循环系统中进行，养殖桶容积为0.33 m3，以曝气的自来水为水源，每天换水量为总水量的1/3，养殖水体经过过滤、沉淀后流回蓄水池，再经过增氧、控温后再由水泵抽回养殖桶，如此循环。每天 8：30、12：30、17：30 定时进行投喂饲料，日投饵量为鱼体重的3%～6%，每两周根据估算的鱼体增重量调整投饲量。正式饲养期为60 d。

养殖时间为2009年5月至7月，整个养殖试验期间，水温为（26.8±0.9）℃、DO 值为（5.8±0.6）mg/l、pH 值为（7.1±0.4）、亚硝酸盐含量（0.1±0.1）mg/l、氨氮含量（0.2±0.1）mg/l，硫化物浓度＜0.05 mg/l。

1.4 取样与测定方法

饲养试验结束时，停食24 h取样，饲料、全鱼、肌肉的氨基酸样品采用105℃恒温干燥得绝干样品。

氨基酸测定样品的处理：①准确称取一定量的绝干样品，于特制的水解管底部，缓慢加入8 ml 6N HCl并轻轻转动水解管，保证样品得到全部润湿，抽真空，维持5 min后，在酒精喷灯上封口；②（110±1）℃水解22～24 h；③切开水解管用去离子水全部转移到25 ml容量瓶中、定容，双层滤纸过滤后，取滤液1 ml置于25 ml小烧杯中，在加NaOH的真空干燥器中蒸干（水浴加热不超过50℃），加入1 ml pH值2.2的盐酸溶解后，溶液转移至1.5 ml的离心管中。10000 r/min离心10 min。取上清液0.5 ml于样品瓶中上机（安捷伦液相色谱仪，Ag1100，OPA FMOC柱前衍生化）测定。

色谱条件：色谱柱：（250×4.6）mm 5 μm ODS HYPERSIL；柱温：40 ℃；流动相：A 相：（称取 8.0 g结晶乙酸钠于1000 ml烧杯中，加入1000 ml水搅拌至所有结晶水溶解，再加入225 μl三乙胺，搅拌并滴加5%的醋酸，将pH值调到7.20±0.05；加入5 ml四氢呋喃，混合后备用）、B相（称取8.0 g结晶乙酸钠于800 ml烧杯中，加入400 ml水搅拌至所有结晶溶解；滴加2%醋酸将pH值调到7.20±0.05；将此溶液加入800 ml乙腈和800 ml甲醇，混合后备用）；流速：1.0 ml/min；紫外检测器：338 nm 262 nm(Pro,Hypro)；梯度洗脱。

1.5 数据处理

采用Microsoft Office（2003）中的Excel表中数据处理功能计算。

2 结果

各组饲料氨基酸组成见表4、表5，共测定了17种氨基酸，色氨酸因酸水解被破坏，未测定。

2.1 全鱼的氨基酸组成

由表4结果可知，从全鱼必需氨基酸组成来看，团头鲂全鱼中赖氨酸含量最高，其次为亮氨酸、精氨酸；在同一蛋白水平下，苹果籽组的全鱼氨基酸组成与饲料的相关系数稍低。各试验组全鱼的必需氨基酸总量的变异系数为2.69%，氨基酸总量的变异系数为2.97%。各必需氨基酸的变异系数在4.3%以内，其中组氨酸的变异系数最大为4.3%。非必需氨基酸中，脯氨酸的变异系数最大为15.87%，其他非必需氨基酸变异系数在4.47%以内。

2.2 肌肉的氨基酸组成

表5 不同油籽原料及其添加水平对肌肉氨基酸组成的影响

由表5结果可知，团头鲂肌肉的氨基酸组成与对应饲料的相关系数各试验组无差异，肌肉的必需氨基酸变异系数为2.39%，氨基酸总量的变异系数为2.21%。各试验组必需氨基酸中异亮氨酸、缬氨酸、组氨酸的变异系数较大，达到3.0%以上，其它必需氨基酸的变异系数均在3.0%以内。非必需氨基酸中脯氨酸的变异系数最大，为13.75%，其次为胱氨酸，为3.92%，其它非必需氨基酸变异系数在3.0%以内。

3 讨论

目前,关于饲料中氨基酸对全鱼和组织氨基酸含量的影响研究报道很少。陆茂英等（1992）采用酪蛋白作为大部分的基础饲料的蛋白源,添加少量的晶体氨基酸后制成的试验饲料饲养团头鲂鱼种,发现在鱼体生长上及体蛋白氨基酸组成方面均未受到影响。黄更生等（2003）对投喂不同饲料的成鱼肌肉氨基酸组成进行分析,发现其氨基酸组成没有明显差异。本试验结果与以上学者一致，各试验组团头鲂全鱼、肌肉氨基酸组成与饲料的相关系数非常接近，说明本试验中的饲料氨基酸组成对团头鲂全鱼和肌肉氨基酸组成没有明显影响。而Alam等（2002）研究指出，饲料中不同氨基酸模式对牙鲆生长及鱼体蛋白结合态氨基酸的组成有影响。黄权等认为，摄食不同饵料对鱼体肌肉氨基酸含量有一定影响。这些结果可能是由于鱼种和试验条件差异所致。

林仕梅等（2008）的实验发现，补充D-蛋氨酸对罗非鱼全鱼氨基酸含量不产生任何影响，但鱼体组氨酸和脯氨酸含量受饲料中蛋氨酸水平的影响。Mai等（2006）研究发现，大黄鱼肌肉中其它必需氨基酸不受饲料中蛋氨酸的影响，但蛋氨酸和异亮氨酸含量受饲料中蛋氨酸水平的影响。本试验结果中，团头鲂全鱼、肌肉的16种氨基酸组成中，全鱼、肌肉的异亮氨酸、组氨酸和脯氨酸的变异系数最大，可见，异亮氨酸、组氨酸和脯氨酸的含量可能受饲料氨基酸组成的影响最大。

4 结论

苹果籽、白瓜籽、黑瓜籽以及豆油添加到饲料中，在同一蛋白水平下对团头鲂全鱼和肌肉的氨基酸组成没有影响。在团头鲂氨基酸组成中，异亮氨酸、组氨酸和脯氨酸受饲料的影响最大。