秦俊哲， 李亚杰

(陕西科技大学生命科学与工程学院， 陕西 西安 710021)

0 前 言

桑黄，又名鲍氏层孔菌Phellinusigniarius，是目前发现的生物抗癌领域有效率最高的大型真菌[1,2].目前在桑黄的研究与开发中，频频出现“同物异名”、“同名异物”的现象[3]，在文献中和已经作为产品提供的鉴定标本中当作“桑黄”使用的种有12个[4]，造成了名称和应用上的混乱.针对这一现象，本研究对收集到的8种不同来源的桑黄菌株进行了菌丝体生长特性的研究，旨在对其亲缘关系远近进行初步鉴定，为今后对桑黄的研究与开发奠定基础.

1 供试材料

表1 供试菌株编号及来源

1.1 供试菌种

均由陕西科技大学生命科学与工程学院微生物菌种室提供，菌种编号及来源如表1所示.

1.2 供试培养基

斜面培养基、平板培养基均为综合PDA培养基[5].

2 试验方法

2.1 培养基的制备

参照参考文献[6]进行.

2.2 菌种的培养

2.2.1 菌种纯化

按照无菌操作的要求，取一块菌种转接于平板培养基中央，置28 ℃恒温培养.待菌丝生长3～6 d，取菌落边缘纯净的一小块菌块转接到斜面试管中培养.如此反复几次，可使菌种达到纯化及活化的效果，满管后于4 ℃冰箱中保存备用.

2.2.2 菌种扩培

按照上述方法进行试管转接培养，待菌丝长满后放4 ℃冰箱中保存备用.

2.2.3 培养观察

将活化好的菌种按无菌操作的要求分别转接至斜面和平板培养基上，28 ℃恒温培养，每2 d观察1次，记录菌丝萌发快慢、生长速度、菌落大小、菌丝颜色、长势等特征(每组做6个平行取均值).

平板菌丝长速(mm/d)=菌落半径(mm)/菌丝生长天数(d)斜面菌丝长速(mm/d)=菌丝长度(mm)/菌丝生长天数(d)

2.2.4 拮抗试验

按照无菌操作的要求，将活化好的8种桑黄菌点接于平板培养基上，每个平板均匀接入3种菌株，每组合3个平行，28 ℃恒温培养7～10 d，观察菌丝间是否有拮抗现象发生，拮抗线是否明显，并拍照记录.根据拮抗线的宽度、颜色等特征，可以鉴别菌株的差异大小.

3 结果与讨论

3.1 菌丝生长特性比较

图1 斜面和平皿培养基菌丝形态示例

表2 不同菌丝生长特性比较

注：+++ 菌丝生长势强, ++ 菌丝生长势一般, +菌丝生长势弱.

由图1和表2可以看出，8个菌株中，R、H、S7的长势最好，其次为S、S6和S8.长势较好的菌株日平均生长速度较快，长势弱的菌株生长速度较慢.不同菌株的菌落形态及菌丝颜色也有差异,H、W、S8、S1的菌丝颜色较深，且易产生色素，S7和S菌丝生长到后期表面会有油状分泌物出现，这些特征均是伴随菌龄的增加而产生的.

通过对菌丝生长过程的观察，菌丝生长速度呈现先慢后快而后又慢的趋势.这是由于新接入的桑黄菌株对新环境有一个适应过程，所以生长比较缓慢；当接种5 d左右的时候，新接入的桑黄菌株已适应新的生长环境，这时由于环境中营养成分充足，所以桑黄菌种开始在培养基上迅速生长，进入快速生长阶段；当培养到后期的时候，由于培养基中的营养及氧供给的限制，菌丝的生长速度变慢，有些菌丝进入老化阶段.

图2 拮抗试验示例

3.2 拮抗试验结果与分析

表3 拮抗实验结果分析

注：+ 拮抗现象不显著， ++ 拮抗现象显著， +++ 拮抗现象非常显著.

通过图2和表3可以看出，S1与W；S6与R；S7与S8；H与S之间拮抗线不明显，说明它们之间的亲缘性较近；而S6与H、W、S；S7与H、S；S8与H；R与W、S；H与W；W与S之间拮抗线明显，亲缘性较远.

4 结束语

本试验从形态培养观察和拮抗试验分析两个方面对8种不同来源的桑黄菌株进行了比较，初步得出其亲缘关系的远近，为以后的试验和研究奠定了基础.但由于此方法易受环境条件等因素的影响，应用于桑黄的种性鉴定中还存在缺陷，因此在后续的研究工作中还需对其做进一步的研究与分析.

参考文献

[1] 戴玉成. 药用担子菌—鲍氏层孔菌(桑黄)的新认识[J].中草药, 2003,34(1):94-95.

[2] 黄年来.中国最有开发前景的主要药用真菌[J].食用菌,2005,(1):38-42.

[3] 曾念开,王秋颖,苏明声.桑黄基原物种的探[J].中国食用菌,2008,27(2):56-59.

[4] 张小青.什么是桑黄[C].南通:中国菌物学会首届药用真菌产业发展暨学术研讨会论文集,2005.

[5] 秦俊哲, 姚艳芳.桑黄菌丝的最适培养条件研究[J]. 食用菌,2007,29(1):6-9.

[6] 钱存柔,黄仪秀.微生物学实验教程[M].北京:北京大学出版社,1999:48-52.