顾玉芳,陈方勇,彭本英

(长江大学动物科学学院,湖北 荆州434025)

随着人类对疾病重视程度的提高以及人们对健康观念的理解不断发生转变,从单纯的医病治病到个体乃至保障人群健康都与我们息息相关的生态平衡、环境污染、人畜共患病、动物性食品的安全性等密切相关[1]。环境中的污染物尤其是一些病原微生物污染空气、水源、土壤,破坏生态平衡,通过呼吸、饮水直接危害人类健康。高仕瑛等查出某社区的肉类、生活饮用水、蔬菜等含有不同程度的食用性致病菌[2],方治国等对北京城市空气细菌群落结构及细菌动态变化进行了探讨[3],傅小红等检出医院外环境中的金黄色葡萄球菌产生明显的耐药 性[4]。因此对自然环境中微生物的监测,保护自然环境及生活环境,提高人们预防和控制疾病的能力尤为重要。本文通过对学校周边不同功能区环境中细菌种类及相关病原菌的致病性进行了分析研究,为学校周边环境公共卫生状况及疾病预防,提供相应的理论依据。

1 材料与方法

1.1 环境中微生物的检测 选择学校周边4个不同功能区:超市、宿舍、医院门诊部、旷野用灭菌牛肉膏蛋白胨培养基露置60 min,然后37℃恒温培养24 h。观察菌落生长状况。

1.1.1 常规仪器设备、试剂 均由长江大学动物医学基础实验室提供。

1.1.2 细菌种类及总数统计 挑选不同色彩、形态的菌落涂片,进行革兰染色、镜检,做好标记,同时进行细菌总数统计分析。

细菌数计算:采用培养平板暴露法[5]

每m3细菌(真菌)数=1000÷[(A/10)×t×(3/5)]×N=[167000N/(At)]

A—平板面积(固定数100 cm2);t—平板曝露空气时间5 min;N—培养后平板上菌落数。

评价标准:根据我国2003年3月1日起正式实行的GB/T18883-2002《室内空气质量标准》为内空气中细菌总数≤2500 CFU/m3为合格。

1.1.3 细菌的分离、纯化及鉴定 选取上述镜检是葡萄球菌和枯草芽孢杆菌的菌落反复3次用牛肉膏蛋白胨培养基进行纯化培养,革兰染色、镜检。再取单一菌落在血琼脂培养基37℃培养,24 h后观察菌落溶血状态,然后再将得到较纯的葡萄球菌菌落放入液体培养基培养,24 h后取其培养物0.5 mL接种到已制备好的1∶2～1∶4的兔血浆中,37℃过2～4 h后观察血浆凝固情况,其余备用。

1.2 葡萄球菌的致病性试验 小鼠30只,购自荆州某实验动物养殖场。

将上述3种备用液体培养物,分别离心收集细菌,各用5 mL生理盐水重悬制备菌液,取24只小鼠分为4组,每组6只。试验1组为对照组皮下注射0.5 mL生理盐水;2、3、4组分别皮下注射0.5 mL三种不同的菌液,隔离饲喂,随时观察小鼠的临床症状,对死亡小鼠进行剖检,并在第3天全部剖杀,观察病变。

2 结果

2.1 菌落的种类及数量统计 在4个不同功能区所采集的菌落数不一。超市和门诊部以球形菌落较多,形态大多圆形、凸起、表面光滑、湿润、边缘整齐,色彩有金黄色、橙色、白色,旷野里除了少量的球形菌落外,还有乳白色、边缘整齐、表面有皱褶、较大的菌落。居室里主要是较大白色、絮状、边缘不整齐、直径较大的菌落及零星的球形菌落。镜检可见超市和门诊的菌落主要是长链状的葡萄球菌,还有一些少量其他未做鉴定的细菌;旷野里有少量葡萄球菌,大部分是枯草芽孢杆菌。寝室里主要是真菌和少量球菌。细菌总数分别是:门诊部2 688 CFU/m3,超市3 500 CFU/m3,田野 1 848 CFU/m3,宿舍 700 CFU/m3。

2.2 细菌分离、纯化 经过3次牛肉膏蛋白胨纯化培养得到的细菌菌落。镜检观察2号、4号、7号细菌均为革兰阳性的葡萄球菌;6号为枯草芽孢杆菌呈长杆状排列。血琼脂培养2、4、7号出现不同程度的溶血现象,且血浆凝固酶试验是阳性;而6号均为阴性。2.3 致病性试验

2.3.1 临床观察 攻毒后各试验组小鼠未表现出明显的异常变化,个别小鼠精神沉郁,食欲降低。

2.3.2 病理学观察 攻毒后第3天剖杀的小鼠,其眼观变化表现为试验2组2号小鼠脾脏轻度肿大,肺心叶膈叶局部色彩暗红,肾脏轻度肿大,肝脏边缘有针帽大小的脓性病灶。镜检肺组织局部毛细血管淤血,间质里有少量淋巴细胞浸润,肝细胞轻度变性,脾脏淤血,其他病变不明显。试验3组3号小鼠肝脏边缘有米粒大小白色粘稠病灶,肺膈叶上缘有暗红色实变区,镜检与3号病变类似。7号小鼠肝色彩变黄,边缘有黄豆大的白色脓性病灶,脾肿大,肾肿大、色淡,脑水肿,镜检肝细胞普遍变性,局部有散在坏死灶,肾小管上皮细胞出现不同程度颗粒变性和脂肪变性,心肌细胞变性,脾脏淤血,小梁疏松、水肿。试验4组6号小鼠肝肿大,边缘有绿豆大的白色脓性病灶,镜检观察内脏器官病变与试验2组类似。

3 讨论

3.1 从所检测结果中可以看出,学校周边几个不同功能区葡萄球菌的检出率为100%,还有少量的枯草芽孢杆菌、真菌。细菌总数分别是门诊部2 688 CFU/m3,超市 3 500 CFU/m3,田野 1 848 CFU/m3,宿舍700 CFU/m3,医院门诊、超市里的空气质量较差。根据我国2003年3月1日起正式实行的GB/T18883-2002《室内空气质量标准》为内空气中细菌总数≤2 500 CFU/m3为合格的规定是不符合卫生标准的。主要是由于医院里病人来往较频繁,消毒措施没有及时跟上,超市里货物较多,品种复杂,货物摆放不严格,不规范,再加上通风不良,湿度较大,卫生打扫不彻底,造成细菌的大量繁殖。学生宿舍真菌数量较多,也应引起注意。提示我们平时要加强环境监测,提高人们的认识,积极采取措施,降低不良因素的影响,控制疾病的发生。

3.2 小鼠致病性试验结果显示,3种类型的葡萄球菌都对机体内脏器官产生不同程度的器质性变化,肝脏表现典型的化脓性病灶,特别是试验3组更为明显,尽管多数葡萄球菌为非致病菌[6],但如果超出一定量它可导致疾病发生,尤其是医院交叉感染的重要来源。应该引起高度重视。

[1]张彦明.兽医公共卫生学[M].北京:中国农业出版社,2003:1-123.

[2]高仕瑛,杨赟,邓仲良,等.社区外环境中细菌种群分布及耐药性检测[J].中国卫生检验杂志,2007,17(10):1830-1832.

[3]方治国,欧阳云志,赵景柱,等.北京城市空气细菌群落结构与动态变化特征[J].微生物学报,2006,46(4):618-623.

[4]傅小红,徐景野,于梅,等.医院外环境中检出的金黄色葡萄球菌的耐药性[J].现代预防医学,2005,32(5):523-524.

[5]钟嶷,郭重山,李小晖,等.自然沉降法和撞击法在空气细菌总数测定中的应用和比较[J].环境与健康杂志,2004,21(3):149-152.

[6]郁庆福.卫生微生物学[M].北京:人民卫生出版社,1995.