潘玫 雷钧

(江西省妇幼保健院妇瘤科 江西南昌 330006)

1 资料与方法

1.1 一般资料

CIN患者、宫颈浸润癌患者各20例,年龄20～60岁,病理检查确诊,均未接受放疗、化疗。

对照组正常健康女性10例,年龄25～52岁,均无诱变剂接触史。

1.2 实验方法

1.2.1 高危型HPV-DNA检测 应用第2代的杂交捕获试验法(Hybrid Capture Ⅱ)HC-2,它是一个放大的酶标板技术,该技术把核酸信号扩大后利用化学发光来检测,无需基因扩增,可检测出13种高危型HPV(16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68),5种低危型HPV(6、11、42、43、45与生殖道疣有关),有极高敏感性。每例取宫颈外口分泌物,进行检测。

1.2.2 细胞培养 采用低叶酸TC199培养基,加5%小牛血清和PHA(植物凝集素,最终浓度为0.lmg/mL),pH值7.4～7.6。每5mL培养液接种用肝素抗凝的静脉血0.5mL,在37℃条件下培养96h,收获前加秋水仙素0.8mg,常规收获细胞,制备染色体玻片,进行Giemsa染色[2]。

1.2.3 染色体分析 每份标本观察分析50～80个分散和形态较好的中期分列相,在油镜下逐一对细胞染色体进行观察及结构检查,记录染色体畸变的次数与类型,计算染色体的畸变率(CAR)。对有畸变的染色体可进行显微照相,再进行G显带分析,染色单体裂隙、断裂,染色体裂隙、断裂及断片等进行定位分析。按人类细胞遗传学ISCN(1995)国际标准进行核型分析[3]。

2 结果

2.1 结果判断

染色体畸变率＝(亚二倍体＋超二倍体)/计数细胞×100%;染色体结构畸变标准:断裂,裂隙,断片,三射体计1次畸变,某一标本畸变率在10%以上为异常。

常见染色体结构异常指染色体模糊零乱,浓淡,长短不一,个别染色体部分纵裂,部分裂解为单体衍生染色体,单体断裂,双着丝粒染色体,和无着丝点片段。

HPV感染阳性标准是1pg HPVDNA/mL(5000拷贝/mL)。

2.2 结果

(1)CIN、宫颈浸润癌和正常对照组的染色体畸变率(CAR)分别为8.5%、15%和0,三者之间有显著性差异(P<0.01)。

(2)CIN、宫颈浸润癌和正常对照组高危型HPV感染率分别为CINI35%,CINII80.5%,CINIII(CIS)95.6%,宫颈浸润癌97%,正常对照组27.5%。

(3)宫颈癌患者检出染色体断点包括1p22,1q30,1p31,3p10,3p30,1q22,1q25,3q22,3p14,10q22,10q24。CIN检出率染色体断点1q23,4p10,正常人群对照组无着丝点片段,未发现明显的染色体畸变。

3 讨论

癌症发生的本质是由于基因突变导致细胞无控制增殖,研究表明染色体畸变与细胞癌变之间有着密切联系,畸变所涉及的染色体部位与癌基因的位点或表达有关。HPV-DNA与宿主染色体整合可以导致宿主染色体的断裂或丢失,发生染色体单体型畸变,持续性高危型HPV感染是发生宫颈病变的必要条件,手术干预合并高危型HPV感染的CIN患者,其HPV清除率72%(6个月内),身体自然清除HPV可能原于感染病毒位于细胞核的染色体外,CINIII及宫颈浸润癌中HPV-DNA常整合于细胞DNA中,而肿瘤常在抑制基因位点发生染色体基因缺失。尽管HVP感染在生殖器癌症的进展中起到重要作用,但也涉及其他遗传或环境联合因素,大量研究发现,宫颈癌和CIN的HPV感染和病变染色体数量异常相关,尤其是高危型HPV感染。本研究取肿瘤患者外周血淋巴细胞培养分析,染色体数目畸变是反映染色体不稳定性的指标,宫颈癌外周血淋巴细胞染色体畸变率高于CIN,CIN高于正常健康对照组(P<0.01)。CIN与对照组无显著性差异。Rao等研究证实2q33～q37缺失,3q插入和染色体增加是侵润型宫颈的特征性改变,总之利用目前遗传学技术证实的这些染色体的改变,说明癌染色体不稳定性与个体遗传有关,与个体肿瘤易感性增加有关。

[1]Mruty vvvs.Spontancous chromosomal aberrationsin partients with drecancerous and ancerous lesion of thd cerrix urteri[J].cancer Gent Cytogenet,1985,17:247.

[2]刘权章.人类染色体方法学[M].北京:人民卫生出版社,1992:272.

[3]Mitel man F.An International System for Human Cytogenetic Nomeenclature[M].Basel:S.Karger,1995:12.