谭艾娟　欧　翔　刘爱英

摘要应用4株蝉拟青霉开展对小菜蛾致病性的研究。结果表明:4株蝉拟青霉分生孢子、菌丝对小菜蛾的致病性有一定差异,其中GZDXIFR4611的感染致死效果最好,孢子悬液的致死率可达到70%,菌丝悬液的致死率可达到65%,为将蝉拟青霉作为一类重要的生防真菌提供了参考数据。

关键词蝉拟青霉;小菜蛾;致病性

中图分类号 S476.12 文献标识码A文章编号 1007-5739(2009)15-0369-01

StudyonPathogenicityofPaecilomycescicadaetoPlutella xylostella

TAN Ai-juanOU XiangLUI Ai-ying

(College of Life Sciences,Guizhou University,Guiyang Guizhou 550025)

AbstractTo investigate the effect of pathogenicity of Paecilomyces cicadae(PC)to Plutella xylostella(L.),the insecticidal mortality of the 4 strains of PC were tested. The results showed that the spore and the hyphae of 4 strains of PC had great differences in the pathogenicity. The highest insecticidal mortalitywas GZDXIFR4611,whose mortality in spore suspension was 70% and in hyphae suspension was 65%.The results provided reference for the use of Paecilomyces cicadae as bio-control fungi.

Key wordsPaecilomyces cicadae;Plutella xylostella;pathogenicity

蝉拟青霉(Paecilomyces cicadae)又名蝉花,是由子囊菌类麦角菌科真菌大蝉草(Cordyceps cicadae)的子实体及其寄主山蝉(Cicadeflammata)幼虫的虫体部构成[1]。拟青霉属真菌作为一类重要的生防真菌可以侵染多种害虫,产生多种具有生物活性的代谢产物,在害虫生物防治上有着广泛的应用[2]。蝉拟青霉既是名贵中药,又有较高的致病性,可以寄生鳞翅目(Lepidoptera)、膜翅目(Hymenoptera)中的很多昆虫[3]。小菜蛾(Plutella xylostella(L.))属鳞翅目菜蛾科,在我国南、北方均有分布,危害植物多达40种以上,也是热带和亚热带十字花科蔬菜的重要害虫[4]。对小菜蛾的防治起初采用化学农药,随着其对化学农药耐药性的增加以及农药残留毒性等弊端日益凸显,生物防治成为当今研究的热点[5]。现报道4株蝉拟青霉对小菜蛾的致病性,为将蝉拟青霉作为一类重要的生防真菌提供参考数据,有一定的应用价值。

1材料与方法

1.1试验材料

1.1.1供试菌株。蝉拟青霉(Paecilomyces cicadae)共4株:GZDXIFR4611采自贵州省贵阳市森林公园,GZDXIFR 4718采自贵州省梵净山,GZDXIFR3716采自四川省成都市青城山,GZDXIFR4606采自云南省墨江,以上菌株均由贵州大学真菌资源研究所分离、鉴定、保存。

1.1.2试验试虫。供试小菜蛾由贵州省农科院植保所提供。

1.1.3培养基。①PDA培养基:马铃薯200g切块,用水煮沸30min,加蔗糖20g、琼脂20g、水补足1 000mL,pH值自然。②液体培养基[6]:葡萄糖20g,酵母膏5g,K2HPO4 1g,水补足1 000mL,pH值6.5。

1.2试验方法

1.2.1菌培养。①斜面培养:将4株菌分别接种到PDA试管斜面上,25℃恒温培养7d,备用。②平板培养:将活化的斜面菌种接种于PDA平板,25℃恒温培养15d,备用。③液体种子培养:用接种环将已活化的试管斜面菌种接种到装有50mL液体培养基的250mL的三角瓶中,25℃,150rpm,摇床振荡培养18～20h。④液体发酵培养:将种子培养液按5%的接种量接种到装有50mL液体培养基的250mL的三角瓶中,25℃,150rpm,摇床振荡培养72～96h。

1.2.2杀虫制剂准备。①孢子悬液:在培养好的平板菌落上倒入适量的0.05%土温-80溶液,用接种环轻轻刮下孢子,充分振荡后用4层纱布滤入无菌三角瓶中,调整孢子浓度为1×107个/mL、2×107个/mL、3×107个/mL,备用。②菌丝悬液:将摇瓶培养好的菌丝用无菌水洗涤除去发酵液,用玻璃匀浆器破碎细胞,无菌水稀释备用,稀释倍数(w∶v)为1倍、2倍、5倍。

1.2.3致病性测定。参照安建梅[7]、陈祝安等[8]方法,在直径为15cm的培养皿内放入圆形滤纸,灭菌、冷却,将小菜蛾2～3龄的幼虫分别浸于配好的待测溶液中。每浓度处理20头虫,浸渍10～20s后放入培养皿中,饲喂新鲜甘蓝菜叶片,放在20～25℃室温下饲养,每天更换新鲜的甘蓝菜叶片,并在培养皿内放湿棉球以保持高湿,逐日统计感染死亡率。以无菌水为对照,设3个重复。致死率=试验组死亡率-对照组死亡率。

2结果与分析

2.1感染症状

在试验过程中,小菜蛾感染了蝉拟青霉后1～2d长得很慢,而对照长得很快,可见菌液对小菜蛾有抑制生长的作用。处理后4～7d虫体僵硬,出现死亡高峰,继续培养1～2d 后,虫体被白色菌丝覆盖,无孢梗束形成,对感染的小菜蛾进行粘片显微观察,可见蝉拟青霉菌丝形成的产孢结构和分生孢子。

2.24株蝉拟青霉菌丝悬液对小菜蛾的致病性差异

由表1可看出,不同浓度的4株蝉拟青霉菌丝悬液对小菜蛾都有致病作用,浓度越高,致病性越强。其中GZDXIFR 4611的致病性最强,致死率可达到65%。

2.34株蝉拟青霉孢子悬液对小菜蛾的致病性差异

由表2可看出,不同浓度的4株蝉拟青霉孢子悬液对小菜蛾都有致病作用,浓度越高,致病性越强。其中GZDXIFR 4611的致病性最强,致死率可达到70%。

3结论与讨论

(1)对小菜蛾的致病性测定结果显示,4株蝉拟青霉菌株对小菜蛾都有致病作用,浓度越高,致病性越强。通过对蝉拟青霉孢子悬液、菌丝悬液致病性测定表明,孢子悬液的致病能力略高于菌丝悬液,其中GZDXIFR4611孢子悬液对小菜蛾的最高致死率可达到70%,菌丝悬液的最高致死率可达到65%。由此说明,孢子悬液的致病能力高于菌丝悬液,4株蝉拟中GZDXIFR4611致病性最强。

(2)昆虫病原真菌通过体表接触即能使寄主感染、发病并引起寄主昆虫死亡,可以发挥独到的作用[5]。对感染的小菜蛾进行粘片显微观察,结果显示芽孢结构是蝉拟青霉;孢子悬液致病的原因可能在于孢子萌发时芽管侵入虫的体表使虫致死。

(3)昆虫病原真菌在昆虫病原微生物中种类最多,约占昆虫病原微生物种类的60%以上。在温室栽培业蓬勃发展的今天,研究利用昆虫病原真菌已成为害虫微生物防治研究领域的热点。有关小菜蛾的致病性研究方面,目前仅有少量关于白僵菌、绿僵菌和拟青霉等的研究报道[9,10];对蝉拟青霉的研究主要集中在药用方面,在生物防治方面的研究不多,研究表明,蝉拟青霉作为生防试剂有良好的开发应用前景,有待进一步深入研究。

4参考文献

[1] 陈祝安,刘广玉,胡菽英.蝉花的人工培养及其药理作用研究[J].真菌学报,1993,12(2):138-144.

[2] 陈祝安.虫生真菌蝉拟青霉的研究[J].真菌学报,1991,10(4):280-287.

[3] 邹晓,刘爱英,梁宗琦.紫外线诱变蝉拟青霉对白粉虱治病性的影响[J].菌物研究,2004,2(4):35-39.

[4] 黄剑,吴文君.小菜蛾抗药性研究进展[J].贵州大学学报(自然科学版),2003,20(1):97-104.

[5] 韩燕峰,张延威,梁建东,等.一些拟青霉菌株对小菜蛾致病性的初步研究[J].植物保护,2008,34(2):46-49.

[6] TAN AIJUAN,LIANG ZONGQI,LIU AIYING.Orthogonal Experi-ment on the Optimum cluture conditions of paecilomyces cicadae[J].Jou-rnal of Huazhong Agricultural University,2004,23(1):33-35.

[7] 安建梅.虫生真菌粉质拟青霉对黄刺蛾幼虫的致病性研究[J].山西农业大学学报,2000(2):105-107.

[8] 陈祝安,黄基荣,许益伟,等.蝉拟青霉防治菜粉蝶幼虫试验[J].生物防治通报,1990,6(3):131-133.

[9] 马骏,HOLDOM D,DUFF J,等.球孢白僵菌对小菜蛾致病力的测定[J].湖南农业大学学报,1999,25(5):387-392.

[10] 姚丽娟.几株真菌代谢产物对小菜蛾和菜青虫的杀虫效果[J].中国生物防治,1996,12(3):99-102.