李 侠 高 宇 李 江

1 型糖尿病是儿童中最常见的慢性自身免疫性疾病之一，其特征是T 细胞介导的胰岛β 细胞的自我破坏，导致胰岛素合成和分泌不足[1］。现阶段儿童期1 型糖尿病的发病率正在增加，虽然目前患者生存率和健康状况已能得到改善，但1 型糖尿病的病因复杂，因此其治疗仍然难以捉摸[2-3］。Ⅰ型T 辅助细胞（T helper cell 1，Th1）和Ⅱ型T 辅助细胞（T helper cell 2，Th2）细胞是宿主防御有害微生物和炎症性疾病发病过程中由CD4+T 细胞介导的特异性免疫反应的表型，已证明二者的免疫平衡改变在1 型糖尿病的发病机制中起着重要作用[4-5］。白细胞介素-33（interleukin-33，IL-33）表达与部分Th1/Th2 细胞介导的免疫反应有关，有报道称，糖尿病肾病患者胰岛素抵抗和微量白蛋白尿的严重程度增加与IL-33 水平降低密切相关，并观察到部分Th1/Th2 细胞失衡[6-7］。本文主要通过检测1 型糖尿病患儿血清中的IL-33 以及部分Th1/Th2 相关细胞因子的水平，研究它们之间的相关性，为临床治疗提供参考。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2020 年3 月至2022 年3 月在秦皇岛市妇幼保健院内分泌科接受治疗的125 例1 型糖尿病患儿为研究对象，为1 型糖尿病患儿组，其中男童61 例，女童64 例；年龄1～14 岁；身体质量指数（body mass index，BMI）12～20 kg/m2。选取120 例同期健康体检儿童作为对照组，其中男童64 例，女童56例；年龄3～14 岁，平均（10.25±2.84）岁；BMI 为13～20 kg/m2。两组研究对象年龄、性别、BMI 比较差异均无统计学意义（P＞0.05），见表1。本研究得到本院伦理委员会审核并批准（批准号：20-00236），且研究对象家长均签署知情同意书。

表1 两组研究对象一般资料对比

1.2 纳入与排除标准 纳入标准：①1 型糖尿病患儿符合糖尿病的诊断标准[8］：空腹血糖≥7.0 mmol/L，和/或餐后2 h 后的血糖浓度≥11.1 mmol/L，胰岛自身抗体阳性，且伴随糖尿病症状体征；③临床资料完整。排除标准：①2 型糖尿病患儿；②合并其他自身免疫病；③合并严重肾、肝功能障碍；④合并其他恶性肿瘤。

1.3 方法

1.3.1 试剂与仪器 人IL-33 酶联免疫吸附测定（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）试剂盒（批号：ABE10104）购买于上海瓦兰生物科技有限公司；人肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor alpha，TNF-α）ELISA 试剂盒（批号：R-1389）购买于上海广锐生物科技有限公司；人白细胞介素2（interleukin-2，IL-2）ELISA 试剂盒（批号：YM-SZ0055）购买于上海远慕生物科技有限公司；人白细胞介素4（interleukin-4，IL-4）ELISA 试剂盒（批号：IB-E10051）购买于江西艾博因生物科技有限公司；人白细胞介素10（interleukin-10，IL-10）ELISA 试剂盒（批号：YM-SZ0066）购买于上海远慕生物科技有限公司；酶标仪（型号：Varioskan LUX）购买于赛默飞有限公司；全自动生化分析仪（型号：AU5821）购买于美国贝克曼库尔特有限公司。

1.3.2 样本收集 采集患儿入院24 h 内清晨空腹外周肘静脉血4 mL，于室温静置30 min，以3 500 r/min离心8 min，收集离心后的上清液，于冰箱-20 ℃中保存待检。并获取健康体检儿童体检时外周肘静脉血4 mL，采取上述同样操作。

1.3.3 临床生化指标资料收集 通过全自动生化分析仪检测受试者空腹血糖（fasting blood glucose，FBG）、三酰甘油（triglyceride，TG）、总胆固醇（total cholesterol，TC）、高密度脂蛋白胆固醇（high-density lipoprotein cholesterol，HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（low-density lipoprotein cholesterol，LDL-C）水平。

1.3.4 ELISA 法检测血清IL-33、TNF-α、IL-4 水平血清IL-33、TNF-α、IL-2、IL-4、IL-10 的水平检测采用ELISA 法，均严格按照试剂盒说明书进行。测定在450 nm 处不同浓度标准品的吸光度值，绘制标准曲线。同样，取适量血清样本解冻，然后测定450 nm 处各样本的吸光度值。最后，依据标准曲线计算血清IL-33、TNF-α、IL-2、IL-4、IL-10 水平。

1.4 统计学方法 采用SPSS 25.0 软件分析数据。计量资料以±s表示，组间比较行t检验；计数资料以百分比表示，组间比较行χ2检验；Pearson 相关性分析血清IL-33 水平与部分Th1/Th2 细胞因子平衡的相关性；logistic 回归分析1 型糖尿病发生的影响因素。以P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组研究对象生化指标比较 与对照组相比，1型糖尿病患儿组TC、TG、FBG、LDL-C 水平均升高，HDL-C 水平降低，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表2。

表2 两组研究对象生化指标比较 （±s）

表2 两组研究对象生化指标比较 （±s）

注：FBG为空腹血糖；HDL-C为高密度脂蛋白胆固醇；LDL-C为低密度脂蛋白胆固醇；TG为三酰甘油；TC为总胆固醇。

临床指标1型糖尿病患儿组对照组t值P值TC（mmol/L）4.71±1.42 3.76±1.37 5.326＜0.001例数125 120 FBG（mmol/L）8.74±2.12 4.71±1.14 18.422＜0.001 HDL-C（mmol/L）1.03±0.26 1.55±0.37 12.769＜0.001 LDL-C（mmol/L）2.74±0.81 2.28±0.62 4.977＜0.001 TG（mmol/L）1.21±0.33 1.04±0.27 4.403＜0.001

2.2 两组研究对象血清IL-33 以及部分Th1/Th2 细胞因子的水平比较 与对照组相比，1 型糖尿病患儿组IL-33、IL-4、IL-10 表达水平降低，TNF-α、IL-2 表达水平升高，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表3。

表3 两组研究对象血清IL-33以及部分Th1/Th2细胞因子的水平比较（±s）

表3 两组研究对象血清IL-33以及部分Th1/Th2细胞因子的水平比较（±s）

注：IL-33为白细胞介素-33；TNF-α为肿瘤坏死因子α；IL-2为白细胞介素2；IL-4为白细胞介素4；IL-10为白细胞介素10。

组别1型糖尿病患儿组对照组t值P值IL-4（pg/mL）7.76±2.02 12.82±3.23 14.764＜0.001 IL-10（pg/mL）9.50±2.49 17.33±4.48 16.997＜0.001例数125 120 IL-33（pg/mL）9.46±2.47 12.25±3.16 7.717＜0.001 TNF-α（pg/mL）13.87±3.54 8.91±2.35 12.866＜0.001 IL-2（pg/mL）10.70±2.81 6.19±1.62 15.308＜0.001

2.3 两组研究对象部分Th1/Th2 细胞因子水平比较与对照组相比，1 型糖尿病患儿组TNF-α/IL-4、TNFα/IL-10、IL-2/IL-4、IL-2/IL-10 值均升高，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表4。

表4 两组研究对象部分Th1/Th2细胞因子水平比较（±s）

表4 两组研究对象部分Th1/Th2细胞因子水平比较（±s）

注：TNF-α为肿瘤坏死因子α；IL-4为白细胞介素4；IL-10为白细胞介素10；IL-2为白细胞介素2。

组别1型糖尿病患儿组对照组t值P值例数125 120 TNF-α/IL-4 1.79±0.48 0.70±0.21 22.862＜0.001 TNF-α/IL-10 1.46±0.39 0.51±0.14 25.171＜0.001 IL-2/IL-4 1.38±0.36 0.48±0.13 25.816＜0.001 IL-2/IL-10 1.13±0.30 0.36±0.11 26.459＜0.001

2.4 1 型糖尿病患儿血清IL-33 水平与部分Th1/Th2细胞因子的相关性分析 1 型糖尿病患儿血清IL-33表达水平与TNF-α/IL-4、TNF-α/IL-10、IL-2/IL-4、IL-2/IL-10 均呈负相关（P＜0.05）。见表5。

表5 1型糖尿病患儿血清IL-33水平与部分Th1/Th2细胞因子的相关性分析

2.5 患儿发生1型糖尿病的影响因素 以患儿是否发生1 型糖尿病为因变量（发生=1，未发生=0），以血清FBG、HDL-C、LDL-C、TC、TG、IL-33、TNF-α、IL-2、IL-4、IL-10 为自变量（连续变量原值带入），行logistic 回归分析。结果显示，IL-33、IL-4、IL-10 为患儿发生1型糖尿病的保护因素（P＜0.05），FBG、TNF-α、IL-2 为患儿发生1 型糖尿病的危险因素（P＜0.05）。见表6。

表6 患儿发生1型糖尿病的影响因素分析

3 讨论

1 型糖尿病是儿童中最常见的慢性自身免疫性疾病之一。这种疾病的特征是β 细胞被破坏，导致高血糖，并进入终身胰岛素依赖状态[9］。1 型糖尿病的发病率持续上升，18% 的新诊断发生在9 岁及以下的儿童中[10］。在1 型糖尿病中，胰岛素的缺乏与胰腺β 细胞被破坏有关，这可能是由辅助性T 淋巴细胞和巨噬细胞的激活引起的[11］。Th1 和Th2 是两个功能上独立的Th 细胞亚群，TNF-α、IL-2 是由Th1 细胞产生的促炎细胞因子，支持细胞介导的免疫，从而促进炎症、细胞毒性和延迟型超敏反应；IL-4、IL-10 是Th2 细胞分泌的抗炎细胞因子，支持体液免疫并下调Th1 细胞的炎症作用[12-13］。Th1/Th2 细胞因子平衡对于维持机体正常免疫反应至关重要，一旦这种平衡被打破就会引发体内促炎反应，从而导致机体免疫损伤[14］。张帅[15］研究发现2 型糖尿病患者血清中Th1 细胞因子（TNF-α）升高，而Th2 细胞因子（IL-4、IL-10）降低，表明糖尿病的发生发展与机体部分Th1/Th2 细胞因子的平衡密切相关。本研究发现1 型糖尿病患儿组IL-4、IL-10 表达水平降低，TNF-α、IL-2 表达水平及TNF-α/IL-4、TNF-α/IL-10、IL-2/IL-4、IL-2/IL-10 值升高，与臧雯等[12］研究相似，可能原因为：1 型糖尿病患儿中部分Th1/Th2 细胞因子间的平衡被打破，导致胰岛β 细胞的破坏，从而促进1 型糖尿病的发生[11-13］。

IL-33 是IL-1 家族中新发现的细胞因子，通常存在于细胞质和细胞核中。当细胞被激活或受损时，IL-33 可分泌到细胞外，通过与其特异性致癌抑制因子2（suppression of tumorigenicity，ST2）结合，调节各种免疫细胞的功能[16］。有证据表明IL-33/ST2 轴在慢性炎症和自身免疫性疾病中起重要作用，如Pavlovic 等[17］研究发现ST2 的基因缺失增强了T 细胞介导的自身免疫性炎症疾病发生风险，而外源性IL-33 在1 型糖尿病模型中显示出强大的预防作用。此外，在糖尿病诱导6天和12 天后尝试治疗性应用IL-33 对疾病临床和实验室体征的发展具有显著的影响。Lu 等[18］研究表明，IL-33 可预防糖尿病前期非肥胖糖尿病小鼠的疾病发展，并强调IL-33/ST2 可作为预防1 型糖尿病的潜在治疗靶点。IL-33 也被报道与Th1 和Th2 细胞因子介导的免疫反应有关，Th1 和Th2 细胞因子介导的免疫反应已被作为某些疾病的“警报”[19］。汪矗等[20］研究表明IL-33 所介导的Th1/Th2 免疫调节失衡与慢性阻塞性肺疾病的发病密切相关。本研究发现与对照组相比，1型糖尿病患儿组IL-33 表达水平降低，表明IL-33 可能参与1 型糖尿病的发病，且1 型糖尿病患儿血清IL-33 降低可能与部分Th1/Th2 细胞因子失衡密切相关。另外logistic 回归分析结果显示，IL-33、IL-4、IL-10 均为患儿发生1 型糖尿病的保护因素，而FBG、TNF-α、IL-2 均是患儿发生1 型糖尿病的危险因素。

综上所述，1 型糖尿病患儿血清IL-33 表达水平降低，部分Th1/Th2 细胞比例失衡，且IL-33 表达水平与部分Th1/Th2 细胞失衡密切相关，表明IL-33 可能参与1 型糖尿病的发生发展过程，后续本研究也将进一步扩大样本量，继续探究二者与1 型糖尿病的关系，并进一步探索其具体病理机制。