谢美晓，陈家仪，邓雯姬，谢思敏，栗建明

（广东省广州市药品检验所，广东 广州 510160）

复方罗布麻片Ⅰ为临床常用的降血压药［1］，其中氢氯噻嗪、维生素B1、维生素B6的标示含量分别为每片1.6，0.5，0.5 mg［2］。含量均匀度检查是控制小剂量制剂内在质量的重要指标［3］，但该制剂现行质量标准中无含量均匀度检查项，仅对氢氯噻嗪进行含量测定及对维生素B1、维生素B6进行液相色谱鉴别。已有研究中仅有氢氯噻嗪和维生素B6、维生素B1的含量及氢氯噻嗪的含量均匀度测定，而无同时对氢氯噻嗪和维生素B6、维生素B1的含量及氢氯噻嗪含量的均匀度进行控制的方法［4-8］。优劣解距离（TOPSIS）算法是根据评价对象与理想化目标的接近程度进行优选的一种多指标决策分析方法，得分越高表明方案越好，能从多维度、综合、全面的评价中成药的质量。目前，越来越多的研究中运用TOPSIS法对中药质量进行综合评价［9-11］。为此，本研究中采用TOPSIS 法考察复方罗布麻Ⅰ片中氢氯噻嗪、维生素B1、维生素B6的含量及氢氯噻嗪含量的均匀度，以期为其质量标准修订提供依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器

1260Ⅱ型安捷伦高效液相色谱仪（美国Agilent 公司），配有G7111A 四元泵，G7129A 自动进样器，G7117C 二极管阵列（DAD）检测器，OpenLab CDS 2.4色谱工作站；AG245 型梅特勒电子天平（精度为十万分之一），Xp26 型梅特勒电子天平（精度为百万分之一），均购于梅特勒- 托利多公司；P300H 型超声波清洗器（德国Elmasonic公司，功率为250 W，频率为40 kHz）。

1.2 试药

复方罗布麻片Ⅰ（企业A，共27批；企业B，共22批；企业C，共17批）；阴性样品（实验室自制）；维生素B1对照品（批号100390-201806，纯度为97.9%），维生素B6对照品（批号100116-201705，纯度为100.00%），氢氯噻嗪对照品（批号100309-201404，纯度为99.7%），均购于中国食品药品检定研究院；甲醇、乙腈（色谱纯，德国Merck公司）；其他试剂（分析纯，广州化学试剂厂）；水为超纯水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：Inertsil C18柱（250 mm × 4.6 mm，5 µm）；流动相：0.01 mol/ L 庚烷磺酸钠溶液- 乙腈- 甲醇-二乙胺（400∶80∶20∶0.5，V/V/V/V，用20%磷酸溶液调至pH 至3.5）；流速：0.8 mL/min；柱温：30 ℃；检测波长：270 nm；进样量：20µL。理论板数按维生素B1峰、维生素B6峰、氢氯噻嗪峰计均大于10 000。

2.2 溶液制备

混合对照品溶液：取维生素B1、维生素B6对照品各适量，精密称定，加0.1 mol/L 盐酸溶液制成每1 mL 含100µg 的对照品贮备液。取氢氯噻嗪对照品适量，精密称定，置100 mL容量瓶中，加乙腈20 mL与冰醋酸2 mL，超声处理15 min，再加0.1 mol/L 盐酸溶液50 mL，超声处理（功率为250 W，频率为40 kHz）15 min，放冷，加0.1 mol/L 盐酸溶液定容，摇匀，制成每1 mL 含100µg的对照品贮备液。分别精密吸取维生素B1、维生素B6对照品贮备液1.0 mL，氢氯噻嗪对照品贮备液3.0 mL，置10 mL容量瓶中，加0.1 mol/L盐酸溶液定容，摇匀，即得。

供试品溶液：取样品细粉适量（相当于维生素B10.5 mg），置50 mL 容量瓶中，加0.1 mol/L 盐酸溶液适量，超声处理（功率为250 W，频率为40 kHz）30 min 使溶解，用0.1 mol/L 盐酸溶液定容，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

阴性对照品溶液：按处方，不加入维生素B1、维生素B6、氢氯噻嗪制备样品0.1 g，按供试品溶液制备方法制备维生素B1、维生素B6、氢氯噻嗪阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

专属性试验：分别取2.2 项下3 种溶液各适量，按2.1 项下色谱条件进样测定。供试品溶液色谱图中，在与混合对照品溶液相同保留时间处有维生素B1、维生素B6、氢氯噻嗪色谱峰，且阴性对照溶液在此处无色谱峰干扰。色谱图见图1。

1.维生素B6 2.氢氯噻嗪 3.维生素B1A.混合对照品溶液 B.供试品溶液 C.阴性对照品溶液图1 高效液相色谱图1.Vitamin B6 2.Hydrochlorothiazide 3.Vitamin B1A.Mixed reference solution B.Test solution C.Negative reference solutionFig.1 HPLC chromatograms

线性关系考察、检测限与定量限确定：分别精密吸取2.2项下氢氯噻嗪对照品贮备液3，2，4，5，2，2 mL，以及维生素B1和维生素B6混合对照品贮备液10，10，25，50，50，100 mL，置同一容量瓶中，加0.1 mol/L 盐酸溶液定容，得系列混合对照品溶液。按2.1 项下色谱条件进样测定，以峰面积（A）为纵坐标、进样质量浓度（C，µg/mL）为横坐标进行线性回归，得回归方程；分别以信噪比（S/N）为3∶1和10∶1时的质量浓度作为各化合物的检测限和定量限。结果见表1。

表1 线性关系考察、检测限与定量限确定结果Tab.1 Results of linear relation test，LOD and LOQ

精密度试验：取2.2 项下混合对照品溶液适量，按2.1项下色谱条件连续进样测定，记录峰面积6次。结果氢氯噻嗪、维生素B1、维生素B6峰面积的RSD分别为0.02%，0.73%，0.37%（n=6），表明仪器精密度良好。

重复性试验：取样品（企业A，批号为190703）6份，按2.2 项下方法制备供试品溶液，按2.1 项下色谱条件进样测定。结果样品中氢氯噻嗪、维生素B6、维生素B1的平均含量分别为13.19，4.50，3.06 mg/ g，RSD分别为2.66%，1.90%，1.02%（n=6），表明方法重复性良好。

稳定性考察：取样品（企业A，批号为190703），依法制备供试品溶液，分别于室温下放置0，2，4，8，12，24，30 h 时按2.1 项下色谱条件进样测定，记录峰面积。结果维生素B1、维生素B6和氢氯噻嗪峰面积的RSD分别为2.11%，2.28%，0.52%（n= 7），表明供试品溶液在30 h内稳定性良好。

加样回归试验：取重复性试验中的样品0.06 g，精密称定，置50 mL容量瓶中，平行6份，分成3组，分别精密加入2.2 项下对照品贮备液适量，按2.2 项下方法制备供试品溶液，按2.1 项下色谱条件进样测定，计算加样回收率。结果见表2。

表2 加样回收试验结果（n=6）Tab.2 Results of the recovery test（n=6）

2.4 样品含量测定

标准规定氢氯噻嗪含量限度为每片1.36～1.84 mg，即标示量的85%～115%［2］。共测定66批样品中维生素B6、维生素B1、氢氯噻嗪的含量。其中，企业A、企业B、企业C 氢氯噻嗪的含量均在85%～115%范围内；企业A、企业B 维生素B6的含量均在85%～115%范围内，企业C有11.76%的样品超出85%～115%范围；企业A、企业C 中分别有33.33%和70.59%的样品超出85%～115%范围。可见，仅对维生素B6、维生素B1进行液相鉴别不能完全评估样品的优劣。结果见表3和图2。

表3 样品中维生素B6、维生素B1、氢氯噻嗪含量测定结果（%）Tab.3 Results of the content determination of vitamin B6，vitamin B1，and hydrochlorothiazide in samples（%）

图2 样品中维生素B6、维生素B1、氢氯噻嗪含量测定结果散点图Fig.2 Scatter plot of the content determination of vitamin B6，vitamin B1 and hydrochlorothiazide in samples

2.5 含量均匀度

依据2020年版《中国药典（四部）》通则0941 含量均匀度检查法，A+2.2S≤L，片剂的L为20.00，但复方制剂中多种维生素或微量元素一般不检查含量均匀度。本研究中主要测定氢氯噻嗪的含量均匀度，并以维生素B6、维生素B1的含量均匀度作为TOPSIS 分析数据。取样品1 片，研细，按2.2 项下方法制备供试品溶液，按2.1项下色谱条件进样测定。企业A、企业B、企业C各取10 批，企业A 有10 批样品中氢氯噻嗪含量均匀度A+2.2S≤20，企业B 有2 批A+2.2S≥20，企业C 有7批A+2.2S≥20。详见图3。

图3 A+2.2S值频数柱形图Fig.3 Frequency histogram of A+2.2S value

2.6 TOPSIS 分析

TOPSIS 分析：原始矩阵正向化→建立标准化矩阵Z→计算理想解（Z+）及负理想解（Z-）→计算到Z+的距离（D+）和到Z-的距离（D-）→计算欧式贴近度（Ci）。Ci为综合评分。随机选取企业A、企业B、企业C 各10 批样品的含量测定数据（置信区间95%），并选取含量均匀度的数据进行TOPSIS 分析，评分越高，质量越优。含量测定综合评分提示，企业B 质量最优，企业B 样品中维生素B6及维生素B1质量优，企业A 样品中氢氯噻嗪质量优，企业A、企业C 维生素B1样品中得分均较低；含量均匀度综合评分提示，企业A 质量最优，企业A样品中维生素B6及氢氯噻嗪质量优，企业B 维生素B1质量优。结果见表4。以成分含量测定及含量均匀度作TOPSIS分析，权重为1，结果见表5。企业B质量最优，企业A次之，企业C最差。

表4 含量测定与含量均匀度结果的综合评分Tab.4 Comprehensive score of content determination and content uniformity results

表5 不同企业的D+、D-及综合评分Tab.5 Comprehensive score，D + and D - of different manufacturers

3 讨论

复方罗布麻片Ⅰ现行质量标准中缺少氢氯噻嗪含量均匀度及维生素B1、维生素B6的含量测定项。TOPSIS法可将多维问题转化为一维问题，提高了多指标综合分析的科学性与准确性，为多成分的中药质量分析评价提供了可靠的数据支撑。同时，在进行质量综合评价时，若指标间有侧重点，可使用层次分析法或熵权法计算相应的权重，再进行综合分析［12-13］，结果更接近预期值。本研究中采用TOPSIS法结合维生素B1、维生素B6及氢氯噻嗪3 种成分的含量及含量均匀度对市场上3 家企业的复方罗布麻片Ⅰ质量进行综合评价，企业B质量较好。

综上所述，本研究中建立的方法简便、快速、准确、重复性好，能用于维生素B1、维生素B6及氢氯噻嗪的含量及氢氯噻嗪的含量均匀度测定，为更好地控制复方罗布麻片Ⅰ的内在质量和生产工艺改进提供依据。