钟承志 吴德松 颜宏 郭琰 龚吕东 李婷

摘要：目的 考查丹參和甘草提取物样品体外抗菌、体内抗炎作用。

方法 （1）采用肉汤连续二倍微孔稀释法测定丹参和甘草提取物样品对痤疮丙酸杆菌ATCC11827最小抑菌浓度（MIC）；（2）采用内耳廓皮内注射丙酸杆菌建立大鼠痤疮模型，测定丹参和甘草提取物样品对丙酸杆菌致炎大鼠耳廓肿胀度的影响；（3）采用二甲苯致小鼠耳廓肿胀法，测定丹参和甘草提取物样品对二甲苯致炎小鼠耳廓肿胀度的影响。

结果 （1）体外抗菌实验结果显示，丹参和甘草提取物体外对痤疮丙酸杆菌MIC值分别为16 mg/mL、12.5 mg/mL。（2）丙酸杆菌致炎大鼠痤疮模型实验结果显示，丹参和甘草提取物可明显降低丙酸杆菌致炎大鼠耳廓肿胀度（P<0.05）。（3）二甲苯致小鼠耳廓肿胀实验结果显示，与溶媒组比较，丹参和甘草提取物连续涂药7 d，均可明显降低二甲苯致炎小鼠耳廓肿胀度（P<0.05）。

结论 丹参和甘草提取物具有抗菌、抗炎及抗痤疮感染作用，能被广泛用作化妆品原料药。

关键词：丹参；甘草；抗菌；抗炎；痤疮

中图分类号：R285.5

文献标志码：A

文章编号：1007-2349（2023）07-0001-03

Study on Antibacterial and Anti-Inflammatory Effects of Extractsfrom Salvia Miltiorrhiza and Licorice

ZHONG Cheng-zhi1， 2， WU De-song1， 2， YAN Hong1， 2， GUO Yan1， 2， GONG Lv-dong1， 2， LI Ting1， 2

（1. Yunnan Institute of Materia Medica， Kunming 650111， China; 2. Key Laboratory of Traditional Chinese Medicine and Ethnodrug New Drug Development Enterprise of Yunnan， Kunming 650111， China）

【Abstract】Objective： To study the antibacterial and anti-inflammatory effects of extracts from salvia miltiorrhiza and licorice in vitro. Methods： （1） The minimum inhibitory concentration （MIC） of salvia miltiorrhiza and licorice extract samples against propionibacterium acnes ATCC11827 was determined by continuous two-fold microporous dilution method. （2） The acne model of rats was established by injecting propionibacterium into the inner auricle skin， and the effect of salvia miltiorrhiza and licorice extract samples on the swelling degree of auricle induced by propionibacterium was measured. （3） The effect of salvia miltiorrhiza and licorice extract on the degree of auricle swelling in the mice induced by xylene was determined by the method of xylene induced auricle swelling. Results： （1） The results of antibacterial experiment in vitro showed that the MIC values of salvia miltiorrhiza extract against propionibacterium acnes in vitro were 16 mg/mL and 12.5 mg/mL， respectively. （2） The experimental results of acne model of rats induced by propionibacterium inflammation showed that the extract of salvia miltiorrhiza and licorice could significantly reduce the degree of auricle swelling in the rats induced by propionibacterium inflammation （P<0.05）. （3） The experimental results of ear swelling induced by xylene in the mice showed that compared with the solvent group， the salvia miltiorrhiza and licorice extract applied continuously for 7 days could significantly reduce the ear swelling of mice induced by xylene inflammation （P<0.05）. Conclusion： The extracts of salvia miltiorrhiza and licorice have antibacterial， anti-inflammatory and anti-acne effects， and can be widely used as cosmetic raw materials.

【Key words】Salvia Miltiorrhiza; Licorice; Antibacterial; Anti-Inflammatory; Acne

丹参为唇形科鼠尾草属植物丹参（Salvia miltiorrhiza Bge.）的干燥根及根茎，性微寒、味苦，入心、经肝，具有活血化瘀，解毒凉血，消肿止痛，疗疮止痢等功效，常用于妇科病、冠心病、缺血性中风、动脉粥样硬化、血栓闭塞性脉管炎、迁延性和慢性肝炎等症的治疗［1］。现代药理研究发现丹参对心血管系统有显著影响，对脂质代谢及中枢神经系统都有作用，抗菌作用及降血糖作用明显［2］。有研究表明丹参对金黄色葡萄球菌及其耐药菌株、大肠埃希菌、链球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、分枝杆菌、人结核杆菌等都有明显抑杀作用，临床应用于痤疮及一般化脓性感染［3-6］。另外，有研究表明［7］丹参提取物在护肤方面具有抗氧化、消炎、抗衰老等作用。

甘草（Glycyrrhiza uralensis Fisch）又名甜草根、粉草、国老等，为豆科甘草属（Glycyrrhiza L.）多年生草本植物干燥的根及根茎，味甘，性平，归心、肺、脾、胃经，具有补脾益气、清肺解毒、祛痰止咳、缓急止痛、调和诸药的功效。现代药理学研究表明［8-11］甘草具有保肝，抗菌消炎，抗氧化衰老，抗病毒，降糖降脂，抗动脉粥样硬化，抗肿瘤，镇咳祛痰，润喉，解热等多种药理活性，被广泛应用在医药、化妆品、食品等领域。有研究显示［12］甘草醇提取物对金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌等革兰氏阳性细菌具有显著抑菌作用。

近年来，虽然国内对丹参和甘草提取物的抑菌特性进行了一些研究，但对其在痤疮方面的研究较少，为进一步了解丹参和甘草提取物在痤疮方面的治疗作用，本研究通过体外测定痤疮丙酸杆菌MIC值和体内抗痤疮感染及对二甲苯所致急性炎症的抑制作用，来探讨丹参和甘草提取物的抗痤疮和抗炎作用，为其在化妆品方面的研究开发提供一定的理论依据。

1 材料和方法

1.1 实验材料

1.1.1 样品制备 丹参提取物制备：取丹参药材置烘箱中，50℃干燥，粉碎，过60目筛，为丹参干燥粉末。精密称取丹参干燥粉末8 g，加水50 mL，加热回流提取1 h，放置至室温，过滤，滤液浓缩并转移至25 mL容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，备用。丹参提取液浓度为320 mg/mL。

甘草提取物制备：称取甘草粗粉适量，24倍量体积的蒸馏水，99℃下提取2 h。用三层纱布过滤，将滤液在3000 r/min的转速下离心3 min；取上清液，过滤后用蒸馏水定容至生药浓度250 mg/mL。

1.1.2 菌株 痤疮丙酸杆菌Propionibacterium acnes ATCC11827，购自美国特殊物种贮藏中心（ATCC），保存于云南省药物研究所药理研究室。

1.1.3 培养基 液体培养基配制：沙氏葡萄糖液体培养基，取本品50 g，加适量纯化水搅拌溶解后定容至1000 mL，分装，121℃高压灭菌15 min，取出待其冷却后放入4℃冰箱保存备用。

固体培养基配制：沙氏琼脂培养基配制：将沙氏液体培养基与10 g琼脂粉混合，定容至500 mL，使琼脂浓度达到2%，121℃高压灭菌15 min，当溶液温度达到50℃左右时倾倒于灭菌培养皿（直径=90 mm）中，待其凝固后倒置放入4℃冰箱保存备用。

1.1.4 实验动物 SPF级SD大鼠（220±20 g）（雌雄各半）、KM小鼠（20～2 g）（全雄），均由广东医学实验动物中心提供，生产许可证号：SCXK（粤）2013-0002。动物饲养管理：塑料盒群养，雌雄分笼，每日饲喂大小鼠生长繁殖饲料，自由饮水，视情况每周更换2～3次垫料。饲料来源于北京科澳协力饲料有限公司。

1.1.5 主要试剂 复方醋酸地塞米松乳膏（华润三九医药股份有限公司，批号：1807006S），红霉素软膏（马应龙药业集团股份有限公司，批号：180811），注射用美罗培南（住友制药有限公司，批号：160901）；二甲苯（AR）（广东光华化学厂有限公司，批号：20080508）；水合氯醛（国药集团化学试剂有限公司，批号：20140619）；沙氏培养基（Oxoid，批号：CM0147）；琼脂粉（北京奥博星生物技术有限责任公司，批号：20150608）。

1.1.6 主要仪器 JJ2000型电子天平，常熟市双杰测试仪器厂生产；SQP型电子分析天平，赛多利斯科学仪器（北京）有限公司生产；THZ-D型台式恒温振荡器，江苏太仓实验设备厂；Multiskan GO全波长酶标仪，美国Thermo公司；GNP-9270隔水式恒溫培养箱，上海精宏实验设备有限公司；SW-CJ-2FD型双人单面净化工作台，苏州净化设备有限公司。

1.2 实验方法

1.2.1 丹参和甘草提取物体外对丙酸杆菌MIC值测定［13］ 从菌落平板上挑选丙酸杆菌单克隆，接种于沙氏液体培养基中，37℃、100 rpm/min厌氧振荡培养168 h。再以37℃、200 rpm/min厌氧振荡培养48 h。细菌活化后调整细菌浓度调整为1×106 CFU/mL，96孔培养板每排第一孔内加入190 μL菌液，第二至第十二孔均加入100 μL菌液，分别将受试样品10 μL加入第一孔中，混匀后吸取100 μL菌液加入第二孔中，依次对倍稀释。同时，设立菌液对照、培养基对照、溶媒对照、阳性对照。其中，溶媒对照和阳性对照加入方法和步骤同受试样品。将盛有丙酸杆菌的培养板置于37℃培养箱中厌氧培养24 h，溶液清亮表示无菌生长，溶液混浊表示有菌生长，读出抑制细菌生长的最低样品浓度（Minimal Inhibition Concentration，MIC）即为最小抑菌浓度。

1.2.2 丹参和甘草提取物对丙酸杆菌致炎大鼠痤疮模型耳廓肿胀的影响［14-15］ 参照上述方法进行细菌培养，调整细菌浓度为6×107 CFU/mL。选取体重200～20 g大鼠，动物右耳廓皮内注射备用丙酸杆菌菌液（100 μL/只），注射后3 d，选取造模成功的动物（模型成功标准：注射丙酸杆菌侧耳廓出现一个明显的白色或黄色痘状突起。）随机分为模型组、红霉素组、丹参提取物组、甘草提取物组，10只/组，雌雄各半。各给药组动物右耳廓均匀涂布各受试样品（100 μL/只），单层覆盖。模型组涂布纯水（100 μL/只），连续5 d，1次/d。每隔24 h用千分尺测量一次大鼠左、右耳廓厚度，连续5 d。计算各组动物耳廓肿胀度，耳廓肿胀度=右耳廓厚度-左耳廓厚度，比较各组动物耳廓肿胀度差异。

1.2.3 丹参和甘草提取物对二甲苯致炎小鼠耳廓肿胀的影响［16］ 选取SPF级KM小鼠，全雄（20～2 g），随机分为溶媒组、地塞米松组、丹参提取物组、甘草提取物组，10只/组。各给药组动物右耳廓均匀涂布各受试样品（50 μL/只），单层覆盖。溶媒组涂布纯水（50 μL/只），连续7 d，1次/d。于末次涂药后1 h，将二甲苯均匀涂布于各组动物右耳廓造模（50 μL/只）。致炎后1 h将动物处死，剪下双耳用7 mm直径打孔器分别在同一部位打下耳片称重。右耳片重量减去左耳片重量即为耳廓肿胀度，将各组耳廓肿胀度进行统计学分析并比较组间差异。

1.3 统计学方法 采用SPSS 17.0统计软件进行统计分析。组间差异比较用单因素方差分析P<0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 丹参和甘草提取物体外抗菌作用 结果显示，菌液对照长菌，培养基对照无菌生长，表明培养基无污染；溶媒对照均有菌生长，表明溶媒对细菌生长无影响。丹参提取物和甘草提取物体外对痤疮丙酸杆菌ATCC11827 MIC值分别为16 mg/mL、12.5 mg/mL。见表1。

2.2 丹参和甘草提取物对丙酸杆菌致炎大鼠痤疮模型耳廓肿胀的影响 结果显示，与模型组比较，阳性对照红霉素于连续涂药第4、5 d，可明显降低丙酸杆菌致炎大鼠痤疮模型耳廓肿胀度，有统计学差异（P<0.05）。与模型组比较，丹参提取物和甘草提取物连续涂药5 d，均可明显降低丙酸杆菌致炎大鼠痤疮模型耳廓肿胀度，有统计学差异（P<0.05）。见表2。

2.3 丹参和甘草提取物对二甲苯致炎小鼠耳廓肿胀的影响 结果表明，与溶媒组比较，阳性对照地塞米松连续涂药7 d，可明显降低二甲苯致炎小鼠耳廓肿胀度，有统计学差异（P<0.01）。与溶媒组比较，丹参提取物和甘草提取物连续涂药7 d，均可明显降低二甲苯致炎小鼠耳廓肿胀度，有统计学差异（P<0.05）。见表3。

3 讨论

寻常痤疮是一种毛囊皮脂腺的慢性炎症性疾病，具有一定的损容性，主要与雄激素及皮脂增加、毛囊皮脂腺开口处过度角化、痤疮丙酸杆菌感染及继发炎症反应等四大原因相关。其中作为主要的条件致病菌，痤疮丙酸杆菌的数量与疾病严重程度密切相关。由于抗生素的使用监管不利，使得耐药痤疮杆菌的比例逐年上升，而且存在交叉耐药，严重影响了寻常痤疮的临床治疗。因此，从植物中寻找新的天然抗菌药物成为治疗痤疮的方向［17］。

本研究结果显示，丹参和甘草提取物体外对痤疮丙酸杆菌均有抑制作用，且对体内痤疮丙酸杆菌致炎的大鼠耳廓肿胀度有抑制作用，说明丹参和甘草提取物对细菌生长具有直接抑制作用，且通过局部涂抹给药发挥消炎作用。二甲苯可使小鼠耳廓毛细血管通透性增加，造成局部急性渗出性炎症水肿，常用于验证药物的抗炎作用。研究显示丹参和甘草提取物均可显著抑制二甲苯导致的小鼠耳廓肿胀，表明丹参和甘草提取物对非特异性急性炎症具有显著的疗效。丹参和甘草提取物作为一种天然抗菌物质，在护肤方面的应用广泛，具有抗氧化、抗衰老、美白等活性。本研究证实，它们在抗菌、抗炎和抗痤疮方面亦具备明显的药效，能较好的应用于化妆品市场。

参考文献：

［1］孙吉兰，常云亭，宋海英，等.丹参的体外抑菌作用研究［J］.时珍国医国药，2003，14（12）：725.

［2］赵春娟，马玉清，郭杨志，等.丹参提取物药理作用研究进展［J］.光明中医，2014，29（9）：2013-2015.

［3］高玉桂，宋玉梅，杨友义，等.丹参酮的药理［J］.药学学报，1979，14：75.

［4］朱嘉蓉，罗厚蔚.丹参酮ⅡA的抑菌活性研究［J］.中国药科大学学报，2004，35（4）：368-370.

［5］張晓川.丹参的活性成分和药理作用及其在化妆品领域中应用和发展［J］.牙膏工业，2009，19（4）：35-37.

［6］王庆银，姚庆强.丹参提取液体外抑菌活性研究［J］.食品与药品，2010，12（5）：184-187.

［7］亓欣钰，王思晨，张淑涵，等.丹参酮类化合物在化妆品的应用及前景［J］.山东化工，2020，49（8）：111-112，117.

［8］张静，胡代琼，刘三侠，等.常见甘草品种有效成分及药理作用研究进展［J］.中兽医医药杂志，2012，（1）：23-27.

［9］于辉，李春香，宫凌涛，等.甘草的药理作用概述［J］.现代生物医学进展，2006，6（4）：77.

［10］Jeong H G，Kim J Y.Induction of inducible nitric oxide synthase expression by 18β-glycyrrhetinic acid in macrophages.FEBS letters，2002，513（2-3）：208.

［11］M arjan N A，H osseinzadeh H.R eview of pharm aco log ical effects ofG lycyrrh iza sp.and its b ioactive com pounds［J］.Phytother Res，2008，22：709.

［12］张煜炯，何艳丽，李鸿文.甘草醇提取物的抑菌活性及稳定性研究［J］.江苏中医药，2012，44（8）：68-70.

［13］魏伟，吴希美，李元建.药理实验方法学，第4版［M］.北京：人民卫生出版社，2001.1435-1439.

［14］耿东升，刘发，杨弟存，等.消痤灵颗粒抗菌及其对丙酸杆菌致大鼠耳廓炎症痤疮的防治作用［J］.解放军药学学报，1999，15（6）：6-9.

［15］李园，林景，周欣，等.枇杷清痤胶囊对丙酸杆菌致大鼠痤疮模型的实验研究［J］.海南医学，2017，28（21）：3446-3448.

［16］魏伟，吴希美，李元建.药理实验方法学，第4版［M］.北京：人民卫生出版社，2001.742-743.

［17］沈文彤，何翔，张慧敏.植物成分对痤疮杆菌抑菌作用研究进展［J］.辽宁中医药大学学报，2015，17（11）：89-95.

（收稿日期：2022-10-17）