徐大海，田茂金，史万玉**

（1.河北农业大学动物医学院/中兽医学院，河北 保定 071000；2.山东旭昶生物科技有限公司，山东 德州 251200）

大量研究表明，益生菌对动物机体免疫系统、消化系统、神经系统及内分泌系统等发挥着重要的调节作用[1-3]。但益生菌产品活性易受基质组成（pH、蛋白质、脂肪和碳水化合物浓度、水活性、天然抗生素等）、获取营养物质的途径、发酵条件、生产工艺技术（喷雾干燥、冷冻浓缩等）的影响[4]。此外，益生菌作为一种活菌体，很难评估其在肠道中的生物利用度[5]、临床最佳使用剂量和疗程以及使用的安全性。近年来，益生菌的长期使用是否会对家禽的健康产生负面影响，是否抑制肠道内源益生菌的增殖，是否会让机体对益生菌产生依赖性需要进一步验证。而作为活性益生菌的替代品[6]，后生元在技术、经济和安全性上具有显著优势。

2021年5月，国际益生菌和益生元科学协会（ISAPP）发表了后生元（Postbiotics）的共识声明：后生元是指对宿主健康有益的无生命微生物和/或其成分的制剂。如灭活的菌体细胞、菌体裂解成分以及细菌的代谢产物，其中菌体成分包括脂磷壁酸、细胞表面蛋白、肽聚糖、菌毛、鞭毛等，代谢产物包括酶、多肽类、短链脂肪酸、多糖(如胞外多糖)等。这些具有促进健康功效的灭活菌及其代谢物均属于“后生元”的范畴[7-9]。

研究发现，后生元可通过直接或间接途径发挥多种生物作用，如抗菌、抗氧化和免疫调节作用[10-11]。在热应激条件下，饲喂后生元可提高肉鸡的抗氧化活性，改善鸡肉品质（pH、系水力、色泽和嫩度），并降低急性期蛋白腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶（Adenosine diphosphate-glucose pyrophosphorylase，AGP）、羧肽酶（Carboxypeptidase N，CPN）、血浆胆固醇水平和脂质的过氧化[12]。

本试验以WOD168小型优质肉杂鸡为研究对象，研究饲粮添加后生元（使用酿酒酵母菌、产朊假丝酵母菌和嗜酸乳杆菌制备）对肉鸡抗氧化功能和肝功能的影响，同时与抗生素作对比，为其在商品肉鸡上的应用提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 试验材料

后生元：委托山东旭昶生物科技有限公司进行生产。具体生产工艺为：酿酒酵母菌、产朊假丝酵母菌和嗜酸乳杆菌分别液体发酵后，经酶、高压等裂解、灭活，再通过离心、透析等提纯，最后喷雾干燥而成。含有酿酒酵母菌、产朊假丝酵母菌、嗜酸乳杆菌等菌体自溶物和初级代谢产物，包括小分子有机酸、B族维生素、氨基酸、核苷酸、多糖、脂类、酵母葡聚糖、甘露聚糖肽（分子量为10~40 KDa）、低聚肽、γ-氨基丁酸等成分。可知部分有效成分含量：酵母葡聚糖≥12%、γ氨基丁酸≥2 mg/kg、低聚肽(分子量小于1 000 U的蛋白质比例)≥35%。

鸡新城疫、传染性支气管炎、禽流感（H9亚型）、传染性法氏囊病四联灭活疫苗（La Sota株+M41株+SZ株+rVP2蛋白）购自天津瑞普生物技术股份有限公司。

鸡新城疫、传染性支气管炎二联活疫苗（HB1株+H120株）购自法国诗华动物保健公司。

盐酸大观霉素、盐酸林可霉素可溶性粉购自湖南加农正和生物技术有限公司。

1.2 试验动物及分组

试验地点为思玛特（北京）食品有限公司商品肉鸡场。试验选用510只健康且体重为（40.01±0.62）g的1日龄 WOD168母雏（购于北京市华都峪口禽业有限责任公司）。分组前，雏鸡进行新支二联疫苗喷雾免疫（1羽份/鸡）和颈部皮下注射鸡新支流法疫苗（0.15 mL/鸡）；随后将雏鸡随机分成3组，每组5个重复，每个重复34只。对照组饲喂基础饲粮，抗生素组、后生元组分别在基础饲粮中添加5×107U/t盐酸大观霉素和25 g/t盐酸林可霉素可溶性粉和750 g/t后生元。试验鸡采用2层笼养，日常饲养管理参照《商品肉鸡生产技术规程》（GB/T 19664-2005）执行。基础饲粮为玉米-豆粕型，参考NRC（1994）肉鸡营养需要量设计并制成颗粒饲料，基础饲粮组成及营养水平见表1。

表1 基础饲粮组成及营养水平（风干基础） 单位：%

1.3 检测指标及方法

在试验21 d及35 d，各组随机选取10只肉鸡(每个重复2只)，翅静脉采血2 mL，5 000 rpm离心5 min，收集血清于EP管中，置于-20℃保存。采血后的肉鸡颈静脉放血处死，收集肝脏、肺脏及盲肠组织，-80℃保存。采用南京建成生物工程研究所提供的丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷草转氨酶（AST）及谷丙转氨酶（ALT）试剂盒测定各器官MDA、SOD和血清中AST、ALT。

1.4 统计与分析

所有数据采用SPSS 20.0统计软件进行单因素方差分析（One-way ANOVA），差异显著时用Duncan法进行多重比较，结果以平均数±标准误表示，P＜0.05表示差异显著，P＜0.01表示差异极显著。

2 结果与分析

2.1 后生元对肉鸡肝脏、肺脏及盲肠抗氧化功能的影响

表2为后生元对肉鸡肝脏、肺脏及盲肠抗氧化功能的影响。

由表2可以看出，后生元组21 d和35 d 肝脏MDA含量均与对照组差异不显著，但肝脏SOD活性极显著高于其它组（P＜0.01）。抗生素组各日龄肝脏MDA含量极显著高于其它组（P＜0.01），而肝脏SOD活性极显著低于其它组（P＜0.01）。

各处理组间21 d肺脏 MDA含量无显著差异（P＞0.05），但后生元组21 d肺脏SOD活性显著高于其它组（P＜0.05），35 d肺脏MDA含量显著低于其它组（P＜0.05），35 d肺脏SOD活性显著高于抗生素组（P＜0.05）。

后生元组21 d盲肠MDA含量显著低于其它组（P＜0.05），35 d盲肠MDA含量显著低于抗生素组。后生元组21 d盲肠SOD活性显著高于抗生素组（P＜0.05），而35 d盲肠SOD活性显著高于其它组（P＜0.05）。

2.2 后生元对肝功能的影响

表3为后生元对血清谷草转氨酶及谷丙转氨酶活性的影响。由表3可见，后生元组血清AST和ALT活性与对照组均无显著性差异（P＞0.05），但抗生素组21 d AST及35 d ALT活性显著高于对照组和后生元组（P＜0.05）。此外，抗生素组21 d ALT活性显著高于后生元组（P＜0.05）。

表3 后生元对血清谷草转氨酶和谷丙转氨酶活性的影响（n=10）

3 讨论

3.1 后生元对肉鸡抗氧化能力的影响

正常情况下，机体的氧化系统与抗氧化系统处于动态平衡之中，当体内活性氧、活性氮、有毒自由基增多，超出自身的清除能力，机体就会发生氧化应激[13-14]。机体中MDA含量，SOD、GSH-Px、CAT等抗氧化酶的活性是反映机体抗氧化能力及健康程度的重要指标[15-16]。研究表明，动物双歧杆菌制备的后生元能抑制脂质过氧化反应，增强自由基清除能力(羟基自由基和超氧根自由基)[17]；瑞士乳杆菌制备的后生元展示出很强的自由基清除能力和去除亚铁离子能力；植物乳杆菌制备的后生元表现出抗氧化活性，能降低机体MDA含量，促进CAT等抗氧化酶的活性[18]。本试验研究了后生元对肝脏、肺脏及盲肠的抗氧化能力的影响，发现与对照组和抗生素组相比，后生元组各器官MDA含量均有不同程度的降低，且SOD活性也有提高，这与前人报道的后生元具有抗氧化功能的结果相一致。此外，与对照组和后生元组对比，抗生素组各器官MDA含量升高，SOD活性降低，提示使用该抗生素会导致肝脏、肺脏及盲肠的抗氧化能力降低，进而损害机体健康。本试验中，后生元组肝脏、肺脏及盲肠抗氧化能力的增强，有助于维持机体氧化还原稳态的平衡，进而提高肉鸡的健康程度，可能有助于降低相关系统疾病的发生机率。

3.2 后生元对肉鸡肝功能的影响

抗生素的使用或传染性疾病都会引起肝脏的损伤[19-20]。肝细胞受损会导致膜通透性增加，细胞内AST和ALT等酶被过多地释放到血液中，因此，AST和ALT的活性是诊断肝脏疾病（炎症和损伤）最常用的生化指标[21-23]。研究发现，许多益生菌制备的后生元显示出对肝脏的保护性，乳酸肠球菌和嗜乳酸杆菌的胞内组分可以抑制乙酰氨基酚引起大鼠肝细胞的毒性[24]；发酵乳杆菌的裂解上清液能抑制乙酰氨基酚对肝脏HepG2细胞的毒性[25]。本试验中后生元组血清AST、ALT活性与对照组无显著性差异，但是显著低于抗生素组，提示抗生素可能对肝功能造成一定的损伤。本试验中后生元对肝脏功能并无影响，这与前人报道的后生元具有保护肝脏功能的结果不一致，可能原因是本试验中采用正常肉鸡作为研究对象，并未建立肝损伤模型，另一个原因有可能是本试验对肝功能检测指标较少，未对其它指标进行检测，不能完全确定后生元是否具有保护肝脏的功能，后续需要进一步验证。

4 结论

在本试验条件下，后生元可通过提高抗氧化酶活性来提高肉鸡抗氧化能力，但未影响肝功能。