凝胶贴膏中挥发性成分的“逆向工程”分析

2023-01-31尚海巍

辽宁科技学院学报 2022年6期

关键词：薄荷醇贴膏逆向工程

尚海巍

(辽宁科技学院生物医药与化学工程学院，辽宁本溪117004)

逆向工程是通过对产品进行逆向解析，剖析产品中部分辅料含量的一种方法，它可以有效降低仿制药开发的难度，缩短分析时间，为我国的仿制药质量与疗效一致性评价提供了一条新思路[1]。

薄荷醇和肉豆蔻酸异丙酯(IPM)都可以作为透皮制剂的促渗剂，对某些药物的促渗作用比氮酮还要强[2-3]。二者均可以可逆地改变皮肤结构，降低皮肤对药物的阻碍，增加药物透皮吸收速率从而增加药物透过量[4-5]。化学结构如图1所示。

图1 薄荷醇和肉豆蔻酸异丙酯的结构示意图

氟比洛芬(Flurbiprofe, FP)是一种芳基丙酸类非甾体抗炎药，常用于治疗关节炎，缓解疼痛[6-7]。氟比洛芬凝胶贴膏具有透皮性能高，吸收起效快，作用时间长，副作用小等特点，受到人们的广泛关注[8]。目前国内已上市的氟比洛芬凝胶贴膏有得百安和泽普思两种。经查阅，两种氟比洛芬的市售制剂中均采用薄荷醇和肉豆蔻酸异丙酯作为促渗剂，促进氟比洛芬的经皮透过量。为了进一步确定市售凝胶贴膏中薄荷醇和肉豆蔻酸异丙酯的含量，文章采用“逆向工程”技术对其进行了研究。

药典及相关文献都只有单独一种促渗剂的含量测定方法，没有同时测定两种化学促渗剂的方法[9-11]。本文建立了可以同时测定薄荷醇和肉豆蔻酸异丙酯含量的方法。通过测定市售氟比洛芬凝胶贴膏中薄荷醇和肉豆蔻酸异丙酯的含量，证明该方法可简单，快速，高效的测定氟比洛芬凝胶贴膏中两种促渗剂的含量，也为其他透皮制剂中两种促渗剂含量的同时测定提供了方向。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Agilent 7890A气相色谱仪(FID检测器，安捷伦科技有限公司)、KQ-500E型超声清洗器(昆山超声仪器系统有限公司)、ML204T电子天平(梅特勒-托利多仪器上海有限公司)。

1.2 试药

薄荷醇(安徽银丰药业股份有限公司)、肉豆蔻酸异丙酯(上海凛恩科技发展有限公司)、水杨酸甲酯(分析纯，天津市大茂化学试剂厂)、无水乙醇(色谱纯，山东禹王和天下新材料有限公司)、得百安氟比洛芬凝胶贴膏(北京泰德制药股份有限公司)、泽普思氟比洛芬凝胶贴膏(北京泰德制药股份有限公司)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Agilent DB-5毛细管色谱柱(50 m×320 μm×0.52 μm)；检测器：氢火焰离子化检测器(FID)；进样口温度: 230 ℃；检测器温度:240 ℃；分流比：10∶1；进样量：1 μL；程序升温：初始温度88 °C, 保持1 min, 以20 °C·min-1的速率升温至200 °C, 保持7 min, 以10 °C·min-1的速率升温至220 °C后, 保持10 min。

2.2 溶液的配制

薄荷醇对照品储备液的配制：取10 mg薄荷醇，精密称定，置100 mL量瓶中，无水乙醇溶解稀释至刻度，摇匀，得浓度为0.1 mg·mL-1的薄荷醇对照品储备液。

肉豆蔻酸异丙酯对照品储备液的配制：取100 mg肉豆蔻酸异丙酯，精密称定，置100 mL量瓶中，无水乙醇稀释至刻度，摇匀，得浓度为1 mg·mL-1的肉豆蔻酸异丙酯对照品储备液。

内标溶液的配制：取40 mg水杨酸甲酯，精密称定，置100 mL量瓶中，无水乙醇稀释至刻度，摇匀，得浓度为0.4 mg·mL-1的内标溶液。

混合对照品溶液的配制：精密移取薄荷醇对照品储备液4 mL，肉豆蔻酸异丙酯对照品储备液1 mL，内标溶液1 mL置10 mL量瓶中，无水乙醇稀释至刻度，摇匀，得薄荷醇浓度为0.04 mg·mL-1，肉豆蔻酸异丙酯浓度为0.1 mg·mL-1的对照品溶液。

供试品溶液的制备：取2 cm×2 cm的得百安，泽普思氟比洛芬凝胶贴膏，剪碎，置10 mL量瓶中，加无水乙醇约5 mL，超声20 min，放冷，加内标溶液1 mL，无水乙醇定容至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

阴性对照溶液的制备：取不加薄荷醇和肉豆蔻酸异丙酯的氟比洛芬凝胶贴膏2 cm×2 cm，剪碎，置至10 mL量瓶中，加无水乙醇5 mL，超声20 min，放冷，加内标溶液1 mL，无水乙醇定容至刻度，摇匀，作为阴性对照溶液。

2.3 系统适用性

取“2.2 溶液配制”项下的混合对照品溶液和供试品溶液，按“2.1 色谱条件”进行分析，各峰的分离度均大于1.5，理论塔板数大于5 000，拖尾因子在0.95 ～ 1.05之间。另取混合对照品溶液，连续进样六次，计算薄荷醇和肉豆蔻酸异丙酯与内标峰面积比值的RSD值分别为0.7%和0.6%，表明系统适用性良好。

2.4 方法学验证

2.4.1 专属性

取“2.2 溶液的配制”项下的混合对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液、无水乙醇，按“2.1 色谱条件”进行分析，记录色谱图。结果显示，供试品溶液中的薄荷醇和肉豆蔻酸异丙酯的色谱峰与对照品有相同的保留时间，无水乙醇、阴性对照溶液对供试品中薄荷醇和肉豆蔻酸异丙酯的含量测定没有影响。各溶液的色谱图如图2所示。

2.4.2 线性与范围

精密移取薄荷醇对照品储备液1 mL、2 mL、3 mL、5 mL、6 mL、8 mL，肉豆蔻酸异丙酯对照品储备液0.2 mL、0.4 mL、0.8 mL、1 mL、1.5 mL、2 mL，内标溶液1 mL置同一个10 mL量瓶中，无水乙醇稀释至刻度，摇匀，得薄荷醇浓度为0.01 mg·mL-1、

图2 供试品溶液(A)和混合对照品溶液(B)的气相色谱图

0.02 mg·mL-1、0.03 mg·mL-1、0.05 mg·mL-1、0.06 mg·mL-1、0.08 mg·mL-1，肉豆蔻酸异丙酯浓度为0.02 mg·mL-1、0.04 mg·mL-1、0.08 mg·mL-1、0.1 mg·mL-1、0.15 mg·mL-1、0.2 mg·mL-1的系列混合对照品溶液。按“2.1 色谱条件”进行分析，以浓度C对薄荷醇、肉豆蔻酸异丙酯峰面积与内标溶液峰面积的比值A进行线性回归，得到薄荷醇的线性回归方程：A= 41.018C-0.035处5(r=0.999)，肉豆蔻酸异丙酯的线性回归方程：A= 33.049C+0.726 8(r=0.999)。结果表明，薄荷醇在0.01 mg·mL-1～ 0.08mg·mL-1的浓度范围内具有良好的线性相关性，肉豆蔻酸异丙酯在0.02 mg·mL-1～ 0.2 mg·mL-1的浓度范围内具有良好的线性相关性。

2.4.3 重复性

取同一批次的得百安，泽普思氟比洛芬凝胶贴膏，按照“2.2 溶液的配制”项下供试品溶液配制方法，平行配制六份，按“2.1 色谱条件”进行分析。得百安，泽普思氟比洛芬凝胶贴膏中薄荷醇含量的RSD分别为6.1%，5.1%，肉豆蔻酸异丙酯含量的RSD分别为9.4%，7.9%，表明该方法重复性良好。

2.4.4 稳定性

取同一批次的得百安、泽普思氟比洛芬凝胶贴膏，按照“2.2 溶液的配制”项下供试品溶液配制方法，配制成供试品溶液，室温放置，分别于 0、2 h、4 h、6 h、8 h、10 h 进样测定，记录色谱峰面积。薄荷醇，肉豆蔻酸异丙酯与内标峰面积的比值RSD值分别为0.4%，0.6%，表明供试品溶液在室温下放置10 h稳定。

2.4.5 回收率

取同一批次制作的阴性对照溶液1 mL，精密量取，置10 mL量瓶中(共9份)，作为本底。分别移取0.1 mg·mL-1的薄荷醇对照品溶液2.4 mL、3 mL、3.6 mL，1 mg·mL-1浓度的肉豆蔻酸异丙酯对照品溶液0.8 mL，1 mL，1.2 mL，内标溶液1 mL各三份置于上述9个10 mL量瓶中，无水乙醇稀释至刻度摇匀，即得80%(L)、100%(M)、120%(H)的准确度溶液。将这9个样品按“2.1 色谱条件”分别进行分析，采用内标法计算回收率，结果如表1所示，薄荷醇和肉豆蔻酸异丙酯的平均回收率分别为100.5%和101.7%，RSD分别为0.8%和1.1%，表明该方法准确度良好。

表1 回收率实验结果(n=9)

2.5 含量测定

取同一批次的得百安、泽普思氟比洛芬凝胶贴膏，按照“2.2 溶液的配制”项下供试品溶液配制方法，平行配制六份，按“2.1 色谱条件”进行分析。用内标法计算两种市售氟比洛芬凝胶贴膏中薄荷醇和肉豆蔻酸异丙酯的含量，结果如表2所示。

表2 不同氟比洛芬凝胶贴膏市售制剂中薄荷醇和肉豆蔻酸异丙酯的含量测定结果(Mean±SD n=6)

3 讨论

3.1 色谱条件的选择

查阅相关数据得知，薄荷醇和肉豆蔻酸异丙酯的沸点相差23 °C，采用以极性和沸点作为分离基础的色谱柱更容易分离[12]。内标法可以避免由于操作条件等变化所引起的误差，测定结果比较准确。水杨酸甲酯不会对薄荷醇和肉豆蔻酸异丙酯的含量测定造成影响，且位于薄荷醇色谱峰附近[13]。因此选用水杨酸甲酯作为内标物。通过调整柱温升温的速率和保持时间，改善薄荷醇和肉豆蔻酸异丙酯色谱峰的分离效果，最终确定初始温度88 °C, 保持1 min, 以20 °C·min-1的速率升温至200 °C, 保持7 min, 以10 °C·min-1的速率升温至220 °C后, 保持10 min为最佳程序升温条件。

3.2 含量测定结果分析

由含量测定结果可知，得百安与泽普思氟比洛芬凝胶贴膏两种市售制剂中所含的薄荷醇和肉豆蔻酸异丙酯含量不存在显著性差异(P>0.05)。两种市售制剂中薄荷醇的含量是15.57 mg/贴～18.27 mg/贴，肉豆蔻酸异丙酯的含量是33.60 mg/贴～42.70 mg/贴。文章所建立的挥发性成分的含量测定方法准确、可靠、操作方便，适用于测定氟比洛芬凝胶贴膏中薄荷醇和肉豆蔻酸异丙酯的含量，可以为凝胶贴膏的质量评价提供参考。