李亚莉 张 蒙 常强强 杨 玉 孙天原 郭 彦 刘晓霞 张俊珍*

(1.山西农业大学动物科学学院，太谷 030801；2.山西农康新拓科技发展有限公司，太原 030000)

贵妃鸡作为优质的肉蛋兼用型禽类，主要分布于法国、英国和荷兰等欧洲国家，具有体型娇小、骨骼结构紧凑且坚硬、皮下脂肪含量低和肉质鲜美等特点[1]。共轭亚油酸(conjugated linoleic acid，CLA)是亚油酸的同分异构体，研究最多的2种异构体是c9,t11-CLA和t10,c12-CLA[2-3]。CLA具有广泛的生物学功能，如具有抗动脉粥样硬化、抗癌、抗氧化、降低胆固醇、改善糖尿病、增强免疫力和预防心血管疾病等作用[4-6]。非反刍动物体内CLA含量较少，因此获得富含CLA的食物是非常有价值的。研究表明，鸡肉是通过在基础饲粮中添加CLA来富集CLA的理想候选材料，因为CLA在被吸收前不会进一步饱和，其在组织中的沉积效率相对较高[7]。Jiang等[8]报道，在爱拔益加(AA)肉鸡饲粮中添加1% CLA能够增加胸肌粗脂肪含量，降低肉色黄度(b*)值和剪切力，提高肉品质，但对生长性能无显著影响。Kumari等[9]报道，肉鸡胸肌中的CLA含量随着饲粮中CLA含量的增加而显著增加，CLA的添加可导致血清总胆固醇(TC)和低密度脂蛋白含量的降低。Fu等[10]在种鸡的饲粮中添加CLA发现，CLA可以降低子代雏鸡血清甘油三酯(TG)和TC含量，增加肝脏中CLA的富集，进一步调控肝脏的脂质代谢。徐蔼宣等[11]报道，在科宝500的饲粮中添加CLA能够降低热应激肉鸡胸肌和腿肌b*值和胸肌亮度(L*)值，提高肉品质。Liu等[7]研究表明，在AA肉鸡基础饲粮中添加1.5% CLA后发现，胸肌和腿肌中丙二醛(MDA)和活性氧含量降低，谷胱甘肽(GSH)含量升高，表明CLA可以降低胸肌和腿肌的脂质过氧化水平，提高其氧化稳定性。目前，关于CLA在贵妃鸡肉鸡生产中的应用研究尚未报道。因此，本试验旨在研究在基础饲粮中添加不同水平CLA对贵妃鸡生长性能、血清生化指标、胸肌和腿肌CLA含量、肉品质以及抗氧化功能的影响，以获得富含CLA的优质鸡肉，并发现贵妃鸡基础饲粮中CLA的适宜添加水平，为CLA在贵妃鸡生产中的应用提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 试验设计

本试验在山西省养殖技术试验基地进行，试验选取360只体重接近且健康的55日龄贵妃鸡公鸡作为试验动物，随机分为5个组，每组6个重复，每个重复12只。对照组饲喂基础饲粮+2.0%大豆油，基础饲粮参照NRC(2004)配制，其组成及营养水平见表1；试验组在对照组饲粮中分别添加0.5%、1.0%、1.5%和2.0% CLA，并以对应的CLA替换等量大豆油。试验预试期7 d，正试期42 d，期间采用标准化饲养管理措施。

表1 基础饲粮组成及营养水平(风干基础)

1.2 试验材料

CLA购买于青岛某生物有限公司，纯度为80.6%，其中主要的2种异构体c9,t11-CLA和t10,c12-CLA含量分别为38.1%和39.4%。试验所用测定血清生化指标和血清、胸肌和腿肌抗氧化指标的试剂盒均购买于南京建成生物工程研究所。

1.3 检测指标和方法

1.3.1 生长性能

预试期结束后，空腹称试验鸡体重作为初始体重；正试期结束后，空腹称试验鸡体重作为终末体重。计算平均日增重(ADG)、平均日采食量(ADFI)(总采食量/鸡数/天数)和料重比(F/G)，计算公式如下：

ADG(g/d)=总增重/(试验鸡数×试验天数)；
ADFI(g/d)=总采食量/(试验鸡数×试验天数)；
F/G=ADFI/ADG。

1.3.2 血清生化指标

正试期结束后，每组随机选取12只(每个重复2只)体重相近的贵妃鸡翅静脉进行采血，静置分离出血清后放入-20 ℃冰箱中待测。采用试剂盒测定血清TC、TG、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)含量。

1.3.3 胸肌和腿肌CLA含量

正试期结束后，禁食12 h，将贵妃鸡进行颈静脉放血屠宰，取左侧胸肌、腿肌置于4 ℃冰箱中保存待测；取右侧胸肌、腿肌于液氮中保存，然后置于-80 ℃冰箱中保存，取一部分放在真空冷冻干燥机(宁波新芝生物科技股份有限公司)冻干待测。称取0.5 g肌肉冻干粉，采用气相色谱法[12]测定胸肌和腿肌CLA含量。

1.3.4 肉品质

采用pH计(Opto-Star，德国)测定胸肌和腿肌24 h pH，参照任文仕[13]的方法采用肉色测定仪(Opto-Star，德国)测定胸肌和腿肌肉色的L*、红度(a*)和b*值，采用肌肉剪切力测定仪(RH-N50)测定胸肌和腿肌剪切力。

1.3.5 血清和肌肉组织抗氧化指标

采用南京建成生物工程研究所的试剂盒对血清和肌肉组织中的总抗氧化能力(T-AOC)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化物酶(CAT)和超氧化物歧化酶(SOD)活性以及MDA含量进行测定。

1.3.6 肌肉组织抗氧化相关基因mRNA相对表达量

严格按照TRIzol试剂盒(南京建成生物工程研究所)说明书对贵妃鸡肌肉组织样本进行RNA提取，取1 μL RNA溶液用NanoDrop 2000微量分光光度计测定浓度和纯度，纯度要求A260/A280的比值在1.8～2.0。选用RNA质量较高的样品，用PrimeScriptTMRT reagent Kit with gDNA Eraser(货号：RR047A；TaKaRa)试剂盒进行cDNA的合成。通过SYBR®Premix Ex TaqTMⅡ试剂盒(货号：DRR820A)进行实时荧光定量PCR。用Oligo 7软件设计引物，交由华大基因合成，引物序列见表2。实时荧光定量PCR反应总体系10 μL：TB Green Premix Ex Taq Ⅱ 5.0 μL，上、下游引物各0.4 μL，cDNA 1.0 μL，ddH2O 3.2 μL。扩增条件为：预变性95 ℃ 30 s；变性95 ℃ 5 s、退火57 ℃ 30 s、延伸72 ℃ 10 s，44个循环；熔解过程(95 ℃ 60 s、55 ℃ 30 s、95 ℃ 30 s)。内参基因甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)与目的基因的样本要在同样的条件下进行实时荧光定量PCR，通过2-△△Ct法计算目的基因的mRNA相对表达量。

表2 实时荧光定量PCR引物序列

1.4 数据统计分析

借助Excel 2019记录试验数据，使用SPSS 22.0软件进行单因素方差分析，并用Duncan氏法进行多重比较，结果用“平均值±标准误”表示，P<0.05为差异显著，P<0.01为差异极显著。

2 结 果

2.1 CLA对贵妃鸡生长性能的影响

由表3可知，与对照组相比，饲粮添加CLA对贵妃鸡ADG无显著影响(P>0.05)；饲粮添加1.5%和2.0% CLA显著降低ADFI和F/G(P<0.05)，其中ADFI分别降低了3.94%和5.35%，F/G分别降低了3.96%和5.36%。

2.2 CLA对贵妃鸡血清生化指标的影响

由表4可知，与对照组相比，饲粮添加1.0%和2.0% CLA显著降低贵妃鸡血清TC含量(P<0.05)，且二者之间无显著差异(P>0.05)；饲粮添加2.0% CLA显著降低血清TG含量(P<0.05)，极显著降低血清LDL-C含量(P<0.01)，分别降低了27.71%和42.55%；饲粮添加1.0%和1.5% CLA极显著提高血清HDL-C含量(P<0.01)。

表4 CLA对贵妃鸡血清生化指标的影响

2.3 CLA对贵妃鸡胸肌和腿肌CLA含量的影响

由表5可知，与对照组相比，饲粮添加不同水平CLA均极显著提高贵妃鸡胸肌和腿肌CLA含量(P<0.01)，且各试验组之间差异极显著(P<0.01)；各试验组胸肌CLA含量分别提高了68.30%、89.04%、114.32%和160.77%，腿肌CLA含量分别提高了58.53%、99.91%、148.00%和170.60%，均以2.0% CLA添加组最高。

2.4 CLA对贵妃鸡肉品质的影响

由表6可知，与对照组相比，饲粮添加1.5% CLA显著降低贵妃鸡胸肌L*值(P<0.05)；饲粮添加CLA对胸肌a*值、b*值和pH无显著影响(P>0.05)；饲粮添加1.0%、1.5%和2.0% CLA均极显著降低胸肌剪切力(P<0.01)，且三者之间无显著差异(P>0.05)。与对照组相比，饲粮添加1.5%和2.0% CLA显著降低贵妃鸡腿肌L*值(P<0.05)，且在2.0% CLA添加组最低；饲粮添加CLA对腿肌a*值、b*值和pH无显著影响(P>0.05)；饲粮添加2.0% CLA极显著降低腿肌剪切力(P<0.01)。

表5 CLA对贵妃鸡胸肌和腿肌CLA含量的影响

表6 CLA对贵妃鸡肉品质的影响

2.5 CLA对贵妃鸡血清和肌肉组织抗氧化指标的影响

由表7可知，与对照组相比，饲粮添加不同水平CLA均极显著提高贵妃鸡血清T-AOC和SOD活性(P<0.01)，且均以2.0% CLA添加组最高；饲粮添加2.0% CLA极显著提高血清GSH-Px活性(P<0.01)；饲粮添加不同水平CLA均极显著降低血清MDA含量(P<0.01)，且1.0%、1.5%和2.0% CLA添加组之间无显著差异(P>0.05)；饲粮添加2.0% CLA极显著提高血清CAT活性(P<0.01)。

由表8可知，与对照组相比，饲粮添加2.0% CLA极显著提高贵妃鸡胸肌T-AOC(P<0.01)；饲粮添加1.5%和2.0% CLA极显著提高胸肌SOD活性(P<0.01)，且二者之间无显著差异(P>0.05)；饲粮添加1.0%、1.5%和2.0% CLA均极显著提高胸肌GSH-Px活性(P<0.01)，分别提高了33.61%、13.04%和27.90%；饲粮添加不同水平CLA极显著降低胸肌MDA含量(P<0.01)，分别降低了0.77%、9.81%、9.48%和14.55%，其中以2.0% CLA试验组最低且与其他各试验组差异极显著(P<0.01)；饲粮添加1.0%和2.0% CLA极显著提高胸肌CAT活性(P<0.01)，且二者之间无显著差异(P>0.05)。

由表9可知，与对照组相比，饲粮添加不同水平CLA极显著提高贵妃鸡腿肌T-AOC(P<0.01)，且1.0%、1.5%和2.0% CLA添加组之间无显著差异(P>0.05)；饲粮添加不同水平CLA极显著提高腿肌SOD活性(P<0.01)，且1.5%和2.0% CLA添加组之间无显著差异(P>0.05)；饲粮添加1.0% CLA极显著提高腿肌GSH-Px活性(P<0.01)；饲粮添加不同水平CLA极显著降低腿肌MDA含量(P<0.01)，分别降低了3.68%、7.58%、9.16%和15.58%，其中以2.0% CLA试验组最低且与其他各试验组差异极显著(P<0.01)；饲粮添加1.0%、1.5%和2.0% CLA均极显著提高腿肌CAT活性(P<0.01)，且三者之间无显著差异(P>0.05)。

表7 CLA对贵妃鸡血清抗氧化指标的影响

表8 CLA对贵妃鸡胸肌抗氧化指标的影响

表9 CLA对贵妃鸡腿肌抗氧化指标的影响

续表9项目 ItemsCLA添加水平 CLA supplemental levels/%0(对照 Control)0.51.01.52.0P值P-value丙二醛 MDA/(nmol/mg prot)9.50±0.03Aa9.15±0.05Bb8.78±0.06Cc8.63±0.09Cd8.02±0.04De<0.001过氧化氢酶 CAT/(U/mg prot)26.46±0.61Bb26.06±0.52Bb29.44±0.43Aa28.88±0.68Aa29.12±0.09Aa<0.001

2.6 CLA对贵妃鸡肌肉组织抗氧化相关基因mRNA相对表达量的影响

CLA对贵妃鸡肌肉组织抗氧化相关基因mRNA相对表达量的影响如图1所示。与对照组相比，饲粮添加不同水平CLA均极显著提高贵妃鸡胸肌超氧化物歧化酶1(SOD1)和超氧化物歧化酶2(SOD2)mRNA相对表达量(P<0.01)；饲粮添加1.0%、1.5%和2.0% CLA均显著或极显著提高胸肌谷胱甘肽过氧化物酶1(GPX1)和CATmRNA相对表达量(P<0.05或P<0.01)。与对照组相比，饲粮添加1.5% CLA显著提高贵妃鸡腿肌SOD1 mRNA相对表达量(P<0.05)，饲粮添加1.0%、1.5%和2.0% CLA均极显著提高腿肌SOD2 mRNA相对表达量(P<0.01)，并以2.0% CLA添加组最高；饲粮添加1.0%和1.5% CLA均显著提高腿肌GPX1 mRNA相对表达量(P<0.05)，其中1.0% CLA添加组达到极显著水平(P<0.01)；饲粮添加1.0%、1.5%和2.0% CLA均显著提高腿肌CATmRNA相对表达量(P<0.05)，其中2.0% CLA添加组最高并达到极显著水平(P<0.01)。

与对照组相比，数据柱标注*表示差异显著(P<0.05)，**表示差异极显著(P<0.01)，无标注表示差异不显著(P>0.05)。Compared with the control group, data columns with * mean significant difference (P<0.05), with ** mean extremely significant difference (P<0.01), while with nothing mean no significant difference (P>0.05).

3 讨 论

3.1 CLA对贵妃鸡生长性能的影响

目前关于CLA对动物生长性能的影响研究报道不一，造成这些差异的原因可能与家禽品种、日龄和CLA添加水平有关。Suksombat等[14]在AA肉鸡基础饲粮中添加0、0.5%、1.0%和1.5% CLA，结果表明，ADG在CLA添加水平为1.5%时显著降低，但对ADFI无显著影响。Moraes等[15]研究发现，饲粮添加1.0%和2.0% CLA可以显著降低科宝肉鸡的F/G，但对ADFI无显著影响。本研究中，饲粮添加CLA对贵妃鸡生长性能的影响结果与上述快大型白羽肉鸡不一致，饲粮添加1.5%和2.0% CLA可以显著降低贵妃鸡ADFI和F/G，但对ADG无显著影响，这可能与添加CLA的含量有关。本研究结果为贵妃鸡基础饲粮中添加CLA能够降低F/G提供了依据。

3.2 CLA对贵妃鸡血清生化指标的影响

动物机体血脂代谢水平常用TG、TC、LDL-C和HDL-C含量表示。TC在细胞生命活动中发挥着重要作用；TG可反映动物机体脂肪组织发育和脂肪沉积能力；LDL-C将肝脏合成的内源性TC转运到肝脏外组织，保证组织细胞对TC的需要；HDL-C则维持动物机体内TC含量的稳定。马建爽等[16]在AA肉鸡基础饲粮中添加CLA，发现0.9% CLA可以显著降低血清TG、TC和LDL-C含量，对血清HDL-C含量无显著影响。王武等[17]用0.005、0.010、0.015 mL/g CLA给小鼠灌胃，结果发现试验组小鼠血清TG、TC和LDL-C含量均显著低于对照组，血清HDL-C含量极显著高于对照组。本研究发结果发现，与对照组相比，饲粮添加2.0% CLA均显著降低贵妃鸡血清TC、TG和LDL-C含量，饲粮添加1.0%和1.5% CLA极显著提高血清HDL-C含量，这可能与CLA通过调控过氧化物酶体增殖物活化受体α(PPARα)和过氧化物酶体增殖物活化受体γ(PPARγ)的表达进而调控机体脂肪代谢有关[18]。本研究结果与前人研究结果基本一致，这表明CLA在调控脂质代谢过程中发挥了重要作用，进而能够维持机体健康，为贵妃鸡饲粮中合理添加CLA提供了理论依据。

3.3 CLA对贵妃鸡胸肌和腿肌CLA含量的影响

富集CLA的肌肉可以改善肌肉组织中的脂肪酸结构，提高肉品质，对人类的健康具有重要的作用[19-20]。单翠燕[21]研究发现，饲粮中分别添加1%、2%和3% CLA，对关中奶山羊肌肉和脂肪中CLA含量有显著升高作用，肌肉和脂肪中CLA含量随着基础饲粮中CLA添加水平的提高而增加。Suksombat等[14]等在AA肉鸡基础饲粮中添加0、0.5%、1.0%和1.5% CLA发现，CLA在肌肉中的含量随着CLA添加水平的提高呈线性增加。本研究中，在贵妃鸡的基础饲粮中添加不同水平CLA发现，胸肌和腿肌CLA含量也随添加水平的升高而增加，且各试验组之间胸肌和腿肌CLA含量差异极显著，这说明在基础饲粮中添加CLA可以获得富集CLA的贵妃鸡肉，不过，其在贵妃鸡胸肌和腿肌CLA最大富集量的添加水平有待进一步研究。

3.4 CLA对贵妃鸡肉品质的影响

肉色、pH和剪切力等是评价肉品质的重要指标。CLA可以通过调控脂肪细胞分化、糖脂代谢、肌内脂肪沉积、肌肉发育和肌纤维类型影响肉色、嫩度和pH等指标[22]。王琪等[23]报道，猪肉24 h pH和大理石纹评分均在饲粮中添加1.5% CLA时极显著提高，且肉色b*值极显著降低。姜文等[24]在艾维茵肉仔鸡基础饲粮中添加CLA显著降低了胸肌和腿肌肉色b*值，并显著降低了腿肌滴水损失及胸肌剪切力。Zhang等[25]在北京油鸡基础饲粮中添加0、0.25%、0.50%、1.00%和2.00% CLA发现，0.50%以上CLA可以显著降低胸肌肉色b*值，2.00% CLA显著降低胸肌剪切力，但对胸肌pH、L*值和a*值无显著影响。本研究结果发现，在贵妃鸡基础饲粮中添加1.5% CLA能够显著降低胸肌肉色L*值和剪切力，饲粮添加2.0% CLA能够显著降低腿肌肉色L*值和剪切力。本试验结果与上述研究中肉色的结果不一致，剪切力和pH结果一致，可能是试验动物品种不同导致。结果表明，CLA可以改善贵妃鸡肉品质，这可能与CLA富集调控肌内脂肪沉积有关，这为贵妃鸡基础饲粮中添加适合水平的CLA能够提高肉品质提供了理论依据。

3.5 CLA对贵妃鸡抗氧化功能的影响

脂质过氧化是导致肉品质下降的重要原因。肉鸡易发生脂质过氧化主要是由于肌肉脂肪酸的组成，可能是由于多不饱和脂肪酸含量较高，优先沉积在脂肪和肌肉组织中[26]。GSH-Px和SOD是动物体内重要的抗氧化剂和自由基清除剂，MDA含量则反映了脂质过氧化程度[8]。刘永祥等[28]在AA肉仔鸡基础饲粮中添加CLA发现，1.5% CLA降低了肉仔鸡胸肌和腿肌MDA含量，提高了GSH-Px活性。Zhang等[28]研究显示，在AA肉仔鸡饲粮中添加1% CLA显著提高了肉仔鸡肌肉SOD活性和肝脏CAT活性，降低了肌肉MDA含量。姜文等[24]在艾维茵肉仔鸡基础饲粮中添加CLA发现，血清、肝脏和胸肌SOD活性显著增强，血清和肝脏GSH-Px活性显著增强，肝脏T-AOC显著提高，血清和胸肌MDA含量显著降低。本研究结果发现，CLA对贵妃鸡血清和肌肉组织抗氧化指标的影响与前人研究一致，在贵妃鸡基础饲粮中添加CLA，血清、腿肌和胸肌MDA含量极显著降低；2.0% CLA可以极显著提高血清GSH-Px活性，1.0%、1.5%和2.0% CLA可以极显著提高胸肌GSH-Px活性，1.0% CLA极显著提高腿肌GSH-Px活性；CLA对贵妃鸡血清和肌肉组织T-AOC、SOD和CAT活性的影响随着添加水平的提高呈提高趋势。这表明基础饲粮中添加CLA可以提高贵妃鸡抗氧化能力，抑制肌肉中的脂肪过氧化，从而提高肉品质。

SOD1、SOD2、GPX1和CAT是核因子E2相关因子2(Nrf2)信号通路的下游基因[29]。SOD1和SOD2参与细胞内SOD的合成，CAT基因可参与细胞内CAT的合成，GPX1调控GSH-Px活性[30]。Qi等[31]用100 μmol/Lt10,c12-CLA处理蛋鸡原代肝细胞24 h，发现SOD1和CATmRNA水平高于其他处理，SOD2 mRNA水平在所有处理中均无显著差异。吴国玲[32]在褐壳蛋鸡饲粮中添加2%和4% CLA发现，CLA对肝脏中SODmRNA表达的影响差异极显著，且在添加水平为2%时显著升高。本研究结果发现，在贵妃鸡基础饲粮中添加CLA对胸肌和腿肌抗氧化指标酶活性影响与其抗氧化相关基因的表达趋势基本一致。这表明CLA可能激活Nrf2信号通路，使SOD1、SOD2、GPX1和CAT表达上调，增强抗氧化酶活性，抵抗自由基对机体的损伤，从而提高机体抗氧化能力。

4 结 论

在本试验条件下：

① 饲粮添加CLA可以降低贵妃鸡F/G和血清TC、TG和LDL-C含量，提高血清HDL-C含量，从而调控脂质代谢，维持机体健康；② 饲粮添加CLA可以提高贵妃鸡胸肌和腿肌CLA含量，降低肌肉肉色L*值和剪切力，从而改善肉品质；③ 饲粮添加CLA可以通过提高贵妃鸡血清抗氧化能力，并通过上调肌肉组织中SOD1、SOD2、GPX1和CAT基因的表达，提高胸肌和腿肌抗氧化能力；④ 综合各项指标，贵妃鸡基础饲粮中以添加2.0% CLA较为适宜。