米庆良，周玉林

（1.湖南省怀化市中方县蒿吉坪瑶族乡农业服务中心畜牧站，湖南 怀化 418000；2.怀化职业技术学院，湖南 怀化 418000）

羊巴贝斯虫病，又名焦虫病[1]，是由经蜱传播的巴贝斯虫寄生于红细胞内所引起的一种以精神沉郁、贫血、发热、血小板减少为病理特征的血液源性寄生虫病[2-3]。该病的发病率及死亡率较高，且大多呈急性病例[4]。各个年龄段的山羊均可感染巴贝斯虫病，但幼、青龄山羊的发病率及病死率较成年山羊的高[5]。山羊在感染该病后，临床上多出现高热不退、精神不振、食欲废绝、体格消瘦、不愿走动、呼吸急促、严重贫血、粘膜黄疸及排血红蛋白尿等一系列临床症状[6]，多因救治不及时而死亡。此外，巴贝斯虫病呈世界性分布[7]，可在不同动物之间相互传播，且其流行具有一定的季节性[8]，对人和动物的健康形成一个巨大潜在的威胁，也在一定程度上阻碍了全球养殖业的发展。

1 发病情况

2020年8月13日，湖南省怀化市中方县某养殖户于山林放养山羊268头。最近，该养殖户反应在其所放养的山羊中，6头青幼龄山羊出现了异常状况。6头发病山羊均出现高热不退、精神不振、食欲废绝、体格消瘦、不愿走动、呼吸急促、严重贫血、粘膜发黄及腹泻等一系列临床症状；个别山羊出现血尿等临床症状。该养殖户一直认为是细菌所引起的疾病，曾使用阿莫西林、恩诺沙星等抗生素进行治疗，但病情未得控制反而愈加严重。

2 临床症状

发病羊只精神萎靡、体格消瘦、四肢无力，喜卧，被毛粗乱且无光泽，可视黏膜苍白、黄染且回血缓慢，体温41℃，呼吸急促（100～160次/min），心跳频率明显加快（102～189次/min），眼角有大量分泌物，并表现出特征性临床症状——血尿及带有恶臭味的褐色稀便；腹部触诊脾肿大、肾肿大且疼痛。此外，在发病羊只的体表见到大量吸饱血的蜱虫。

3 诊断

3.1 初步诊断

根据发病季节、发病羊只所表现出来典型的临床症状及其体表的蜱虫和笔者临床实践经验，初步诊断该病为山羊的巴贝斯虫病。

3.2 染色镜检

颈静脉采血于装有抗凝剂的采血管中。用胶头滴管吸取一滴血液于载玻片上，进行瑞氏—姬姆萨氏染色，制作血涂片。染色步骤为：首先，用瑞氏染液将涂膜面充分覆盖；待稍等片刻后，再滴加姬姆萨染液2～3滴；再稍等1～2分钟后，再往玻片上滴加磷酸盐缓冲液，直至膜面上染色液形成表面张力而终止滴加染色液；于室温下，静置染色30～40分钟；最后，用自来水缓慢冲洗玻片3～5分钟,晾干，置于显微镜下以进行病原体形态学检查。镜检结果显示：病羊的红细胞肿大呈球形，且内含有蓝色逗点状的虫体（图1）。根据镜检结果可初步确定该病的病原体为巴贝斯虫，该病为巴贝斯虫病。

图1 巴贝斯虫的镜检图Fig.1 Microscopic examination of Babesia

3.3 分子生物学诊断

将剩下的血液置于冰盒内，拿回进入实验室进行分子生物学检测。用血液、组织DNA提取试剂盒（购买于北京天根生化科技有限公司）提取血液的总DNA。将提取的好的DNA样品，置于-20℃保存，备用。

利用引物18S rDNA-F（GAAACTGCGAATGGCT CA），18S rDNA-R（TGCTGTAGT-ATTCAAGGCGA）对巴贝斯虫核糖体18S rDNA基因进行PCR扩增。反应体系为50uL，反应条件为：95℃（预热），5 min；95℃（变性），30 s；54℃（退火），30 s；72℃（延伸），1 min；共35个循环；最后72℃（延伸），5 min。反应完成后，吸取5uLPCR产物在1.5%琼脂糖上进行凝胶电泳检测，结果显示为阳性，条带单一、清晰，大小约为650 bp（图2）。将PCR产物发送至上海生工生物有限公司进行测序。

图2 巴贝斯虫18S rDNA基因的PCR结果Fig.2 PCR results of 18SrDNAgene of Babesia

将所获得的序列在GenBank上进行BLAST搜索分析，发现与已公布巴贝斯虫ITS2基因序列的相似度为99%～100%（图3），从而确定该病原体为巴贝斯虫，该病为山羊的巴贝斯虫病。

图3 巴贝斯虫18S rDNA基因的BLAST分析结果Fig.3 BLAST analysis results of 18SrDNAgene of Babesia

4 治疗

根据确诊结果，采用贝尼尔+辅助治疗对发病羊只进行治疗。首先，静脉注射50毫升含有头孢噻呋钠的0.9%氯化钠溶液，1次/天，连用5天[9]；然后，再静脉注射50毫升加有维生素B6、止血敏及维生素C等药物的5%葡萄糖溶液，1次/天，连用5天[10]；最后在临床症状得到缓解时，肌肉注射贝尼尔，剂量为4.5mg/kg；两天一次，连用三次[11]。此外，静脉注射加有茵栀黄的氨基30毫升，1次/天，连用5天[9]。一周后病羊恢复健康，再次进行血涂片检查，没发现虫体。

5 预防措施

5.1 加强饲养管理

养殖户在饲喂过程中应注意山羊的饲料，应特别注重粗饲料与精饲料的搭配，尽量使营养分配均衡。此外，可适当地在饲料中添加一些山羊生长发育所必需的维生素、矿物质及微量元素，以期提高山羊的身体素质，增强其对疾病的抵抗力。

5.2 改善卫生条件

及时清扫羊圈，确保羊圈干净卫生及通风良好。不定时用双甲脒乳油剂100倍稀释液对羊圈及周围区域进行喷洒[12]。羊粪要置于一偏僻且低洼处进行堆积发酵。

5.3 切断传播途径

蜱虫为巴贝斯虫的主要贮存宿主和传播媒介，故避免蜱虫叮咬是预防山羊巴贝斯虫病的关键及根本途径。尽量不到有蜱活动的草场放牧，并对养殖场周围的草丛进行铲除，且每天用3%火碱液进行消毒1次[3]。羊群回圈应进行药浴，一旦发现立即摘除，并用相应的药物加以预防和治疗[13]。此外，对病死羊进行深埋等无害化处理。

5.4 防止复发

在病羊治愈后1周内，应再次进行血涂片检查，以防止虫体未被全部清除而复发[14]。

6 讨论

羊巴贝斯虫病主要是由蜱传播的巴贝斯虫寄生于红细胞内所引起的一种以精神沉郁、贫血、发热、血小板减少为病理特征的血液原虫病[2-3]。该病的发病率及死亡率较高，且各个年龄段的山羊均可感染巴贝斯虫病，但幼、青龄山羊的发病率及病死率较成年山羊的高[5]。山羊在感染该病后，临床上多出现高热不退、精神不振、食欲废绝、体格消瘦、不愿走动、呼吸急促、严重贫血、粘膜黄疸及排血红蛋白尿等一系列临床症状[6]，多因救治不及时而死亡。该病常发生于我国的多山林地带[15]，且多流行于夏秋两季，呈季节性流行[8]，故避免蜱虫叮咬是预防巴贝斯虫病的关键及根本途径。然而，该病在发病之初常常不出现任何的临床症状，容易被养殖者忽视，直到发病严重时才有明显的临床症状，但往往多为危重病例，且其所表现的症状也多与某些传染病的症状相似，无丰富临床经验的人难以区分，容易将其相互混淆或误诊。而传统的检测技术操作过于繁琐、费时，诊治极为不便。利用分子技术检测不仅操作简单，而且也大大提高了检测结果的精确性，为养殖户对该病的诊断和治疗提供了便捷有效的途径。因此，本文所采用的诊断和防治方法，也为以后的临床诊疗提供技术参考。