◎ 李 苗，代 菲，金 萍，丁洪流，秦孟姣

（1.苏州市产品质量监督检验院，江苏 苏州 215104；2.SCIEX亚太技术支持中心，上海 200335）

茶作为我国的传统饮品，也是世界三大饮料之一[1]。据科学测定，茶叶中含有儿茶素类、咖啡碱、茶多酚、维生素和矿物质等多种成分，不仅对多种疾病有治疗作用，而且有良好的延年益寿、抗老强身的作用。茶树种植过程中出现的虫害种类较多，螨类较多时对茶叶产量和品质都有严重影响，从而造成经济损失。很多茶农会喷洒农药以防治病虫害，但茶叶易吸附农药。大多数茶叶都含有一定量的农药，只要农药残留量低于国家标准规定的限量，就是安全的产品。灭螨醌作为触杀性杀螨剂，《食品安全国家标准食品中农药最大残留限量》（GB 2763—2021）[2]中灭螨醌（灭螨醌与其代谢物羟基灭螨醌之和）限量为0.01 mg·kg-1。本实验参照《出口食品中灭螨醌和羟基灭螨醌残留量的测定 液相色谱-质谱/质谱法》（SN/T 4066—2014）[3]中前处理方法，采用液相色谱-质谱/质谱法对茶叶中灭螨醌和羟基灭螨醌残留量进行测定，并对该方法检测的准确性进行确认。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

灭螨醌标准品、羟基灭螨醌标准品（美国A Chemtek公司）；乙腈、丙酮、甲醇、正己烷、甲酸和乙酸铵（色谱纯，美国Merck公司）；实验室用水为Milli-Q超纯水一级水；氯化钠（分析纯，国药集团试剂有限公司）；弗罗里硅固相萃取小柱（上海安谱实验科技股份有限公司）。

1.2 仪器与设备

I-Class液相色谱仪（美国Waters公司）；Qtrap 6500串联质谱仪（美国AB Sciex公司）；电子分析天平（0～120 g，英国梅特勒-托利多公司）；涡旋混合仪（IKA）；氮吹仪（杭州奥盛仪器）。

1.3 实验方法

1.3.1 样品提取

称取2.5 g茶叶于50 mL离心管中，加入5 mL水、0.02 mL甲酸后，放置0.5 h。加入15 mL甲酸-乙腈溶液，高速匀浆1 min，加入2 g氯化钠，漩涡混匀，离心5 min，吸取上层有机相于25 mL容量瓶中。残渣中加入10 mL甲酸-乙腈溶液，重复提取一次，合并上层有机相并定容至25 mL。转移5 mL有机相至试管中，在40 ℃条件下，氮吹浓缩至近干，待净化。

1.3.2 样品净化

以2 mL弗罗里硅土柱洗脱液分两次洗涤试管中残留物并全部转入活化后的弗罗里硅土固相萃取柱中，待溶液全部流出后，加入10 mL洗脱液洗脱，收集全部洗脱液，于40 ℃氮气吹至近干，用乙腈溶解并定容至1 mL，过膜，测定。

1.3.3 标准物质配制

分别精密称取灭螨醌和羟基灭螨醌标准物质1.0 mL于100 mL容量瓶中，甲酸-乙腈溶剂溶解并定容至刻度，摇匀，配制成1.0 μg·mL-1混合标准液。称取一定质量的阴性样品，按照上述前处理方法制备空白基质溶液。准确吸取灭螨醌和羟基灭螨醌混合标准液适量，用空白基质提取液将其稀释为标准系列工作溶液，临用时配制。

1.3.4 仪器条件

（1）液相色谱参考条件。色谱柱：ACQUITY UPLC C18柱；柱温：30 ℃，进样量：2 μL；流动相：A为10 mmol/L乙酸铵水溶液，B为乙腈，梯度洗脱程序见表1。

表1 梯度洗脱程序表

（2）质谱/质谱条件。离子化模式：电喷雾离子源（ESI），正离子模式；电喷雾电压：4 500 V；离子源温度：400 ℃；监测离子对、定量离子对、驻留时间、去簇电压及碰撞能见表2。

表2 监测离子对、定量离子对、驻留时间、去簇电压及碰撞能表

2 结果与分析

2.1 线性关系

准确移取灭螨醌和羟基灭螨醌标准物质溶液，用基质空白提取液逐级稀释成浓度为2 ng·mL-1、5 ng·mL-1、10 ng·mL-1、25 ng·mL-1和 50 ng·mL-1的系列混合标准溶液，上机测定。以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，进行线性回归分析。线性相关范围、线性方程和相关系数见表3，灭螨醌和羟基灭螨醌线性范围较宽，线性范围内线性关系良好。依据标准《实验室质量控制规范 食品理化检测》（GB/T 27404—2008）[4]，应满足R≥0.98，本实验满足要求。

表3 线性范围、相关系数及线性方程表

2.2 定量限

称取阴性样品2.5 g于离心管中，加入浓度为25.0 ng·mL-1灭螨醌和羟基灭螨醌标准工作液0.500 mL，制备含灭螨醌和羟基灭螨醌的浓度为5 μg·kg-1的待测试样，经提取和净化后待测液浓度为2.5 ng·mL-1。待测液上机，进样2 μL，进行色谱分析。根据上机结果，逐级稀释待测液浓度，直到信噪比值约为10，即为定量限。

灭螨醌和羟基灭螨醌的色谱图见图1。灭螨醌的定量限为4 μg·kg-1时，信噪比为S/N=10.4；羟基灭螨醌的的定量限为2 μg·kg-1时，信噪比为S/N=10.2。S/N≥10时表明方法定量限验证结果能满足标准要求[5]。因此，灭螨醌的定量限为4 μg·kg-1，羟基灭螨醌的定量限为2 μg·kg-1，满足标准要求。

图1 灭螨醌和羟基灭螨醌色谱图

2.3 加标回收率实验

称取2.5 g阴性样品9份，分成3×3组分别进行加标，使样品中灭螨醌和羟基灭螨醌的浓度为5 μg·kg-1、20 μg·kg-1、80 μg·kg-13 个 梯 度， 按 照 1.3.1 和 1.3.2进行样品处理，灭螨醌和羟基灭螨醌的最终浓度为2.5 ng·mL-1，10.0 ng·mL-1，40.0 ng·mL-1， 上 机。 通过标准工作曲线得到灭螨醌和羟基灭螨醌的浓度，计算回收率，见表4。回收率为81.6%～97.4%，结果准确可靠，可满足茶叶中灭螨醌和羟基灭螨醌的测定要求（被测组分含量＜0.1 mg·kg-1时，回收率范围为60% ～ 120%[6]）。

表4 灭螨醌和羟基灭螨醌的回收率表

2.4 精密度实验

称取6份阴性样品各2.5 g，向阴性样品中加标，按照1.3.1和1.3.2进行样品处理，样液中灭螨醌和羟基灭螨醌的浓度为10 ng·mL-1。根据灭螨醌和羟基灭螨醌的峰面积响应值，计算相对标准偏差。RSD为1.92%～2.39%，精密度满足相关要求，具体见表5。

表5 灭螨醌和羟基灭螨醌精密度表

3 结论

在实验室日常检测工作中，APCI源涉及的检测项目较单一，而ESI源具有良好的通用性，且溶剂使用量较少，本实验的液相色谱-质谱/质谱法通过ESI源代替APCI源检测灭螨醌及羟基灭螨醌，不仅线性良好、准确可靠、灵敏度和精密度高，而且在大批量检测任务中，可节省更换离子源环节的时间，延缓仪器使用寿命，提高检测效率，为今后检测茶叶中的灭螨醌和羟基灭螨醌含量提供了科学参考。