雷芊芊，周明夏

（江苏农牧科技职业学院，江苏 泰州 225300）

药物安全性评价是指在实验室条件下，用试验系统对药物安全性作出评价，为临床研究提供理论依据，是评判药物能否进入临床研究的重要研究手段。生殖毒性试验是药物临床安全性评价经常使用的研究方式，按研究目的不同分为四类。Ⅰ段研究药物对动物精子活力、发情周期的影响；Ⅱ段研究药物对雌性动物妊娠及胚胎、胎仔发育的影响；Ⅲ段研究药物对动物遗传学的影响；Ⅳ段研究内容包括药物对妊娠动物、胚胎、胎仔发育情况及对动物群体遗传学表达规律的影响。本试验通过小鼠尾静脉注射神经药物，研究药物对小鼠的生育能力和早期胚胎发育的影响，旨在为临床研究提供动物试验资料。

1 材料与方法

1.1 试验动物的选择

1.1.1 品种的选择 根据药物生殖毒性研究技术指南，小鼠具有体型小、操作方便、易于饲养、性成熟快、生育能力强、怀孕时间短、产仔数多、对药物敏感等优点，被定义为人类的常用试验动物之一［1］。故使用小鼠作为试验动物。

1.1.2 数量的选择 在满足研究目的、科学标准，监管要求和动物福利的前提下，尽量减少使用动物。根据药物生殖毒性研究技术指南，每组中每种性别的小鼠不得少于5 只［2］。为确保每组数据有效性，防止偶然性，每组每种性别使用10 只小鼠。

1.1.3 日龄体重的选择 给药时雄性动物日龄为40～50 日龄；雌性为55～65 日龄。给药时雄性动物体重为27.2～34.4 g；雌性为24.7～28.6 g。

1.2 试验动物称重

试验动物给药前需称重1 次，称重后根据体重分组；分组后交配前1 周称重2 次；交配期间不称重；交配成功后，雌性小鼠在发现妊娠当天、妊娠3 d、妊娠6 d、妊娠9 d、妊娠13 d 各称重1 次，雄性小鼠交配成功后安乐死前称重［3］。

1.3 动物分组

根据动物体重，采用随机分组法，详见表1。

表1 试验动物分组情况

1.4 方法

1.4.1 动物标记识别

1）动物个体标记。分组前，用记号笔在小鼠尾部标记临时号。根据体重分组后雄性小鼠和雌性小鼠拥有一个惟一的动物编号，用耳打孔法辅助识别。耳打孔法具体方式：左耳打孔代表十位，右耳打孔代表个位，左右耳打孔中央圈为组别［4］，详见图1。

图1 耳打孔法

2）笼卡标记。动物饲养笼盒上挂有标注动物信息的笼卡。

1.4.2 动物饲养 试验动物在无菌屏障环境中饲养，温度控制为20～24 ℃，湿度在30%～60%，光照12 h［5］，动物在试验期间饮用纯净水，自由采食符合国家标准的小鼠生长繁育饲料。交配前饲养在装有垫料的饲养盒中，每盒最多饲养5 只同性别动物；交配期间，雌性小鼠放在雄性小鼠笼中饲养；交配成功后，为了防止妊娠动物在群养笼中相互咬伤而导致流产或其他事故，雌性小鼠单独饲养在单个笼子里［6］。

1.4.3 给药频率与方法

1）给药频率。每天给药1 次，雄性小鼠的给药时间为交配前28 d 开始至交配成功后停止；雌性小鼠的给药时间为交配前14 d 开始到妊娠6 d 停止［7］。

2）给药方法。对照组饲喂神经药物辅料，低剂量组、中剂量组、高剂量组注射不同浓度的某神经药物，使用仪器为一次性灭菌注射器和配套针头，采用尾静脉注射方式给药，10～20 s 完成。每只动物的给药量应根据体重进行调整，给药量需精确到0.01 mL。

1.4.4 动物观察

1）临床观察。每天2 次临床观察。2 次临床观察需间隔2 h 以上［8］。

2）给药局部观察。试验给药期间，每次给药前需对给药部位局部观察；给药结束后每周观察1 次。如动物给药局部出现异常反应，应连续观察至异常现象消失或安乐死当天。给药部位局部观察的主要内容是观察给药局部是否出现破溃、出血等症状［9］。

1.4.5 亲代动物指标检测

1）亲代雌性小鼠的妊娠检查。1～4 组孕鼠在妊娠13 d 解剖进行妊娠状态检查。将动物安乐死后，切除子宫，观察子宫状态，并对活胎、死胎及吸收胎进行计数。

2）亲代雄鼠精子计数和活力检查。交配成功后的雄性小鼠在24 h 内实施安乐死，解剖后取左侧附睾尾，吸取1 份精子悬液，滴至载玻片上，置于精子分析仪中进行精子计数，检查精子活力［10］。

3）亲代雄鼠精子形态检查。用一次性无菌胶头滴管吸取精液样本，在显微镜下观察每只动物200个精子中含有的畸形精子数。

2 结果与分析

2.1 体重

试验期间，对各组动物称量体重，未见异常，详见表2、表3。

表2 雄性小鼠平均体重 （单位：g）

表3 雌性小鼠体重 （单位：g）

2.2 临床观察

试验期间，各组试验动物均未出现不良反应。

2.3 妊娠情况

与对照组相比较，各试验组动物的妊娠率、活胎率、吸收胎率、死胎率未见异常，详见表4、表5。

表4 动物妊娠情况

表5 亲代雌性小鼠剖宫产数据统计

2.4 雄性小鼠精子活动度和精子计数

与对照组相比，各剂量组雄性小鼠精子活动度和精子计数未见明显异常，详见表6、表7。

表6 雄鼠精子活动度和精子计数

表7 雄鼠精子活动度和精子计数

2.5 亲代雄鼠精子形态学检查

通过统计学分析，对照组和各剂量组雄性小鼠精子畸形率未见明显异常，详见表8。

表8 雄性小鼠精子形态统计

2.6 亲代鼠生育能力统计

与对照组相比，各剂量组亲代雄性小鼠的交配率、生育率未见异常，各剂量组亲代雌性小鼠的交配率、受孕率、妊娠率未见异常，详见表9。

表9 小鼠生育能力统计

3 结论

随着科学与技术的进步，特殊人群的用药安全越来越受到重视。为了特殊人群的用药安全，在满足试验要求和动物福利的前提下，用试验小鼠拟代特殊人群开展试验。选用80 只试验鼠，对雌、雄性小鼠重复尾静脉注射某神经药物。通过观察重点检测指标，对试验结果进行分析发现神经药物对雌性小鼠妊娠情况、活胎率、吸收胎率、死胎率及雄性小鼠精子活力、精子计数和精子形态等均未产生影响。本研究实际为药物剂量、毒性的探索试验，观察药物对亲代小鼠生育能力及早期胚胎发育的影响，为该药物后续实验提供数据基础，为特殊人群安全用药提供参考。