郝彬 景鹏 张宗林 李淑盈

(陕西郝其军制药股份有限公司，陕西 西安 710075)

升血小板胶囊是由青黛、连翘、牡丹皮等五味中药组成的中药复方制剂，具有清热解毒，凉血止血，散瘀消斑的功效，用于治疗原发性血小板减少性紫癜。原制备工艺为连翘提取挥发油，将挥发油喷洒在颗粒上焖放一定时间，然后密封包装，挥发油在贮藏中较易损失。为了提高连翘挥发油在制剂中的稳定性，本研究用β-环糊精对升血小板胶囊中的连翘挥发油进行包合，并采用正交试验法选择包合工艺的最佳条件。

1 仪器与试药

79-1A型恒温磁力搅拌器(天津鑫博得仪器有限公司)，101电热鼓风干燥箱(北京科伟永兴仪器有限公司)，YP1002N电子天平(上海精密科学仪器有限公司)，β-环糊精(天津市光复精细化工研究所)，连翘挥发油(陕西郝其军制药有限公司提取车间自提，方法为：连翘加水浸泡4 h，水蒸气蒸馏法提取挥发油6 h)，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1包合物的制备 β-环糊精包合物的制备方法有饱和水溶液法、研磨法、超声法等，进行预试验研究，根据试验结果初步确定包合物制备方法。

2.1.1饱和溶液法 取β-环糊精40 g，加水320 mL，40 ℃搅拌30 min使溶解，滴入等体积无水乙醇稀释的挥发油10 mL，边加边搅拌，搅拌1 h，低温冷藏24 h，抽滤，用少量无水乙醇洗涤包合物，包合物置烘箱中于50 ℃干燥，粉碎，即得。

2.1.2超声法 取β-环糊精40 g，加水320 mL，40 ℃超声30 min使溶解，滴入等体积无水乙醇稀释的挥发油10 mL，超声1 h，低温冷藏24 h，抽滤，用少量无水乙醇洗涤包合物，包合物置烘箱中于50 ℃干燥，粉碎，即得。

2.1.3研磨法 取β-环糊精40 g，加水320 mL，研磨30 min，滴入等体积无水乙醇稀释的挥发油10 mL，继续研磨1 h，低温冷藏24 h，抽滤，用少量无水乙醇洗涤包合物，包合物置烘箱中于50 ℃干燥，粉碎，即得。

2.2空白回收率的测定 精密量取连翘挥发油1 mL，置500 mL烧瓶中，加水320 mL，按照中国药典2015年版四部挥发油测定项下甲法测定，按下公式计算空白回收率：

2.3挥发油包合率和包合物收得率的测定 取制得的包合物，称定重量，置于500 mL烧瓶中，加水320 mL，按照中国药典2015年版四部挥发油测定项下甲法测定，按下公式计算挥发油包合率，结果见表1。

包合物收得率=

100%

表1 包合物制备预试验结果(%)

结果表明，饱和溶液法制得的包合物挥发油包合率和收得率均较高，因此，选择饱和溶液法作为包合物制备方法，并进一步研究出最佳包合条件。

2.4最佳包合工艺选择 选择挥发油(mL)∶β-环糊精(g)比例、包合温度、搅拌时间、加水倍数四个因素，各取三个水平，按照L9(34)进行正交试验，因素水平表见表2。

2.4.1综合评价指标 挥发油包合率是衡量包合效果的重要指标，包合率越高，包合效果越好，可作为包合工艺筛选的主要指标，权重系数定为80%；包合物收得率在大生产中也很有意义。在β-环糊精和挥发油投入量一定的情况下，收得率越高，包合效果越好，故将包合物收得率作为次要筛选指标，权重系数定为20%。

综合评分=包合率(%)×80%+收得率(%)×20%

2.4.2正交试验结果与分析 按L9(34)正交表的安排进行试验，结果见表3。由直观分析可知，影响挥发油包合的因素顺序为：挥发油(mL)和β-环糊精(g)比例、搅拌时间、加水倍数和包合温度，最佳工艺为A3B2C2D1；方差分析见表3。由方差分析可知，挥发油(mL)和β-环糊精(g)比例对挥发油包合有显著性影响，其余均无显著性影响，影响次序为A>C>D>B，和直观分析一致。因此，将包合工艺参数定为：挥发油(mL)∶β-环糊精(g)比例(1∶8)，包合温度40 ℃，搅拌时间2 h、加水倍数8倍量。

表3 正交试验结果

表4 方差分析表 F0.05(2.2)=19 F0.01(2.2)=99

2.5验证试验

2.5.1包合率和收得率验证 按照最佳挥发油包合工艺条件，进行三批验证试验。

取连翘挥发油5 mL，加无水乙醇5 mL振摇使溶解，取β-环糊精40 g，加水320 mL，40 ℃搅拌30 min使溶解，滴入等体积无水乙醇稀释的挥发油10 mL，边加边搅拌，40 ℃搅拌2 h，低温冷藏24 h，抽滤，用少量无水乙醇洗涤包合物，包合物于50 ℃干燥，粉碎，即得。三批验证试验结果见表5。

表5 β-环糊精包合挥发油验证试验结果

结果表明，该挥发油包合工艺稳定，具有重现性和可操作性。

2.5.2TLC法验证 比较挥发油、β-环糊精挥发油混合物、β-环糊精包合物、包合物中回收的挥发油以及β-环糊精五个样品在同一薄层色谱条件下的斑点差异。

2.5.2.1供试品溶液制备方法 连翘挥发油供试品溶液的制备：精密量取连翘挥发油1 mL，加无水乙醇稀释至20 mL，摇匀，即得。

包合物中回收的挥发油供试品溶液的制备：精密量取包合物中回收的挥发油1 mL，加无水乙醇稀释至20 mL，摇匀，即得。

连翘挥发油和β-环糊精混合物溶液的制备：取β-环糊精8 g，再精密量取连翘挥发油1 mL，喷入环糊精中，混匀，加无水乙醇20 mL，振摇使溶解，滤过，取续滤液，即得。

连翘挥发油β-环糊精包合物溶液的制备：取连翘挥发油β-环糊精包合物8 g，加无水乙醇20 mL，振摇使溶解，滤过，取续滤液，即得。

β-环糊精溶液的制备：取β-环糊精8 g，加无水乙醇20 mL，振摇使溶解，滤过，取续滤液，即得。

2.5.2.2试验方法 精密吸取上述五种溶液各10 μL，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯(8∶2)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(254 nm)下检视，结果见图1。

1.连翘挥发油；2.包合物中回收的挥发油；3.连翘挥发油β-环糊精混合物；4.连翘挥发油β-环糊精包合物；5.β-环糊精

图1 TLC色谱图

2.5.2.3试验结果 由图可知，连翘挥发油、包合物中回收的挥发油以及挥发油和β-环糊精混合物在相同的Rf值上，有相同颜色的斑点；而连翘挥发油β-环糊精包合物和β-环糊精，在此Rf值上，没有斑点。结果表明，β-环糊精对挥发油进行包合后形成新物相，包合效果非常好，同时也表明包合工艺并未改变挥发油化学性质。

2.6包合物的稳定性考察 将挥发油和β-环糊精混合物和挥发油β-环糊精包合物分别置40 ℃和60 ℃放置10 d，分别于第0天、第5天和第10天取样，按挥发油测定法测定挥发油的收率，结果见表6。

表6 高温试验结果

试验结果表明：40 ℃放置10 d，包合物中的挥发油几乎没有损失，混合物中的挥发油损失约89.8%；60 ℃放置10 d，包合物中的挥发油损失约12.5%；混合物中的挥发油损失约92.3%。由此可见，包合物中的挥发油热稳定性明显高于混合物，说明包合工艺是成功可行的。

3 讨论

β-环糊精包合连翘挥发油，能有效防止连翘挥发油挥发，提高其稳定性，从而保证疗效。该方法工艺操作简便，实用性强，对提高升血小板胶囊中挥发油的稳定性有着积极意义。

正交试验的直观分析和方差分析都表明，挥发油(mL)和β-环糊精(g)比例对包合结果又显著影响，其他因素对包合影响次之，但在包合物制备过程中，搅拌时间长，可在一定范围内提高包合物的包合率；包合温度升高，反应速度加快，包合物生成量增多，但是温度过高，部分挥发油会损失，包合率反而下降，温度过低，β-环糊精溶解度降低，包合物生成减少。因此，控制其他包合因素也是很有实际意义的。

用薄层色谱法验证包合效果为一种有效可行的方法，该法直观、简单可行。

对β-环糊精包合物和混合物进行40 ℃和60 ℃条件下稳定性考察，能比较出两者对温度的稳定性，从而进一步证明进行挥发油包合是必要的，有意义的。