猪口蹄疫O型抗体检测试纸条对比试验

2022-02-02王红娜

中国猪业 2022年6期

王红娜

（河南省宝丰县农业农村局，河南宝丰 467400）

口蹄疫（foot-and-mouth disease,FMD）是由口蹄疫病毒（foot-and-mouth disease virus,FMDV）引起的一种急性、烈性、高度接触性传染性和快速远距离传播的动物疫病，被世界动物卫生组织（OIE）列为必须报告的传染病，我国将其列为一类传染病[1,2]。该病具有传播速度快、感染致病性强、潜伏期短等特点，对畜牧业危害极大。2020年韩国、日本相继发生猪、牛、羊口蹄疫，经济损失达20亿美元，致使两国畜产品无法进入国际市场。2001年英国暴发O型口蹄疫时，共扑杀动物592万头，造成直接经济损失27亿英镑，间接损失达200亿英镑，相当于英国国内生产总值（GDP）的2.5%[3]。

根据我国国情，目前疫苗免疫是最主要的也是最经济的手段[4]，每年国家投入大量的人力、财力和物力用于疫苗的采购和实施强制免疫[5]，因此疫苗的免疫效果直接影响着口蹄疫的防控结果[6,7]。目前，尽管养殖者都高度重视口蹄疫的防疫，然而许多猪场的免疫效果并不理想，免疫猪只时有发病[8,9]。因此，快速简单地评价疫苗免疫状况至关重要。本试验旨在通过对比评估4种猪口蹄疫O型抗体检测试纸条的敏感性及特异性，并对比猪口蹄疫O型VP1结构蛋白抗体ELISA诊断试剂盒的检测结果，为基层兽医和养殖户开展疫苗免疫效果评估提供参考依据。

1 材料与方法

1.1 猪口蹄疫O型抗体检测试纸条

4种猪口蹄疫O型抗体检测试纸条分别以A、B、C、D代表（见表1）。

表1 4种猪口蹄疫O型检测试纸条及规格

1.2 血清样品

4份已知阳性血清样品和阴性血清样品分别来源于口蹄疫病毒O型液相阻断ELISA抗体检测试剂盒及口蹄疫病毒A型液相阻断ELISA抗体检测试剂盒中的阳性对照血清和阴性对照血清作为相关及非相关标准血清；20份猪场免疫血清来源于河南省平顶山市某规模化猪场，免疫猪口蹄疫O型合成肽疫苗28 d后采血制备血清。

1.3 抗体检测试剂盒

猪口蹄疫O型VP1结构蛋白抗体ELISA诊断试剂盒购自郑州某生物技术有限公司，规格为96 T×2。

1.4 敏感性试验

将口蹄疫O型已知阳性血清样品用0.02 mol/L pH值7.2 PBS缓冲液分别作1∶4、1∶8、1∶16、1∶32、1∶64、1∶128、1∶256、1∶512、1∶1024共9个稀释度，然后按照4种试纸条的说明书进行检测与结果判定。

1.5 特异性试验

将4份已知阳性血清样品和阴性血清样品按照4种试纸条的说明书进行检测与结果判定。

1.6 试纸条与试剂盒对比试验

将4种试纸条对20份猪场免疫血清进行检测与结果判定，同时用猪口蹄疫O型VP1结构蛋白抗体ELISA诊断试剂盒对20份猪场免疫血清进行检测，并与试纸条检测结果进行对比分析。

2 结果与分析

2.1 敏感性试验

检测结果显示，A试纸条的检测极限为1∶256稀释的样品，B试纸条的检测极限为1∶128稀释的样品，而其他2种试纸条的检测极限均较低，详见表2。

表2 各试纸条敏感性试验结果

2.2 特异性试验

检测结果显示，A和D试纸条的特异性较好，而其他2种试纸条的特异性均较差，已知阴性血清样品检测出假阳性结果，详见表3。

表3 各试纸条特异性试验结果

2.3 试纸条与试剂盒对比试验

20份猪场免疫血清检测结果显示，猪口蹄疫O型VP1结构蛋白抗体ELISA诊断试剂盒的检测合格率为100%，A～D试纸条的检测合格率分别为90%、65%、55%、40%，详见表4。

表4 各试纸条与试剂盒对比检测结果

3 讨论

当前国内外采用口蹄疫疫苗免疫抗体检测方法主要是液相阻断ELISA。该方法虽然具有特异、敏感等特点，但操作复杂，费时费力，且需特定的仪器设备和专业技术人员，很难在基层普及推广[10]。由于试纸条具有操作方便、快速检测等优点，具有广阔的推广应用前景和价值。除上述口蹄疫抗体检测试纸条外，还有针对口蹄疫合成胎疫苗的检测试纸条，同时，随着口蹄疫疫苗的不断研发和创新，新的检测口蹄疫抗体的试纸条也将应运而生[11]。梁素联等[12]比较了口蹄疫O型抗体液相阻断ELISA检测试剂盒与其改进试剂盒的灵敏性，为猪口蹄疫抗体的精准检测提供参考。

把试验结果数据进行调整，经对照各种试纸条监测数据基本符合测试敏感性要求，证明基本试剂的原理是符合设计的。其中各试纸条监测数据共同显示结果，样本编号为14、19、8、13号的结果应判为异常，可能与试验操作有关。其余结果分析，B试纸条监测数据最不稳定，应该属于实际设计本身问题；D试纸条显示数据基本符合设计规律，更接近于试验预期，取值误差应该在临界值选取上偏高，表现灵敏度偏低。而A试纸条设计临界值就较为合理，接近本试验选取的液相阻断ELISA临界标准。

试验通过对4种猪口蹄疫O型抗体检测试纸条的敏感性、特异性方面进行评估，对比检测结果显示，仅有A试纸条的敏感性和特异性较好，且与试剂盒抗体检测结果的符合率高达90%，更适合用于基层兽医和养殖户进行现场快速检测评估。而其他3种试纸条的敏感性和特异性较差，与试剂盒抗体检测结果的符合率较低（40%～65%），且存在已知阴性血清检测出假阳性结果，这将影响临床血清样品的检测评估，检测性能还有待进一步优化提升。

但结合实际生产应用，A试纸条可以选为评定免疫效果应用；而D试纸条更适于大群生产检测应用，以稍微偏高的抗体表现来判断是否应补免，有利于超前保护动物抗病力。