易筑刚 陈春旭 陈 华 缪荣浩 刘明理

(1.遵义市林业科学研究所，贵州 遵义563000；2.湄潭县高台镇林业站，贵州 遵义564111)

松乳菇(Lactariusdelicious)，又名松树蘑、松菌、寒菌、紫花菇、松杉菌，是担子菌亚门、层菌纲、伞菌目、红菇科、乳菇属的一种很有开发价值的外生菌根真菌，在我国广泛分布并深受欢迎，其子实体肉质细嫩，味道鲜美独特，营养丰富，是一种珍贵的食药兼用的真菌，可用于功能食品、保健食品和真菌药物开发[1-5]。松乳菇因特殊的生态条件、营养方式和子实体分化条件，目前尚不能人工栽培，只能采取半人工方法，即通过营造松乳菇发生发育的良好环境，实现林内松乳菇单位面积子实体产量的提高[6-8]。然而，自然状态下以马尾松为宿主的外生菌根菌种类繁多(松乳菇只占其中一部分)，加之各种腐生菌、土生菌的共生给松乳菇促产保育工作带来较大难度。为实现松乳菇增产目的，松乳菇宿主的识别和非目的菌的清除是亟需解决的首要问题[9]。为此，我们引进湖南林业科学院技术并结合试验基地具体的立地条件，于2018年9月至2019年9月在湄潭县合江村松乳菇试验基地，分别进行了松乳菇宿主识别和杂菌抑制试验，以期找到符合我省实际情况的宿主识别和杂菌抑制方法，为下一步大面积推广应用松乳菇促产保育技术奠定基础。

1 试验基地概况与实验方法

1.1 试验基地概况

湄潭县合江村松乳菇试验基地(107.352163E，27.658406N)，地处湄潭县高台镇合江村，海拔830～950 m，黄壤，平均坡度20°，属自然更替的马尾松混交林，马尾松分布不匀平均405株/hm2，树龄20～25年。

1.2 实验方法

1.2.1 松乳菇宿主识别

2017年10月，在湄潭试验基地，首先根据松乳菇着生区域与马尾松冠幅相互关系，结合湖南省林业科学院识别松乳菇宿主方法，初步判断宿主。2018年9月26日，根据初步判断情况，标记13株以树干为圆心半径2 m范围内松乳菇数量3个以上的马尾松宿主，同时记录此范围内松乳菇和杂菌数，后间隔1天(即28日、30日)计录一次，完成一个高峰期松乳菇数量记录。2019年按相同方法、相同时间，记录标记树松乳菇和杂菌数量(备注：每记录一次，将蘑菇摘掉)。

1.2.2 非目的菌抑制

在2019年初，在初步判断松乳菇宿主马尾松基础上，结合林分密度调控，伐除以树干为中心半径2 m范围内着生非目的菌菇的过密木、僵老木、被压木、弯曲木。2019年5月采用随机区组实验设计，分别设置对照和处理各5棵树桩(记录周边2米范围内菌菇数量)。对照组不作任何处理；处理组以树桩基部为中心边长2 m范围，用0.3 mm黑色塑料膜覆盖，并用石块和泥土压实周边，处理时间自5～11月，原位抑制菌根性杂菌。

1.3 分析方法

采用R软件K均值聚类分析法和SPSS 17.0软件进行数据处理和分析。

2 结果与分析

2.1 松乳菇宿主识别

2.1.1 数据处理

通过2018年和2019年记录松乳菇一个高峰期的数据(详见表1和表2)来看，仅凭单日一次观察数据还不好判断是否是其宿主，本实验采用一个高峰期的平均数和两年数据，采用Excel 2013软件建立的柱状图(详见图1和图2)。从中看出：松乳菇数量占总蘑菇数量比率，除第10株样株为30%以下外，其余均占70%以上。说明判断的13株样株里有12株的松乳菇外生菌根菌占据优势地位。

表1 2018年试验地马尾松样株蘑菇记录表(2m内)

续表1 2018年试验地马尾松样株蘑菇记录表(2m内)

表2 2019年试验地马尾松样株蘑菇记录表(2m内)

图1 2018年松乳菇与杂菌占比柱状图

图2 2019年松乳菇与杂菌占比柱状图

2.1.2 基于聚类分析的松乳菇宿主判定

进一步以13株标记树为样本，以树干基部2m半径内的松乳菇和其他杂菌数量在不同时间多次观测值为数据，对标记树进行聚类分析。使用的分析软件为R软件，采用的聚类算法为k-means，目标分类数量即K值为2。聚类分析结果见下图：

图3 马尾松样株蘑菇聚类分析图

从上图可见，10号样本(标记树)独自被分为第1类，其他样本被分为第2类，且两类之间的距离较远，界线明显。结合对样本数据的内容，可将第2类解释为正确判断宿主的类群，而第1类为误判为宿主的类群，此结果与上文的判断一致。

据此，本试验方法在松乳菇外生菌根菌宿主马尾松的判别上，成功率达92.31%。

2.2 非目的菌抑制

2.2.1 宿主周围子实体着生数量

结果表明:处理前(5月13日)，对照组与实验组树桩周围2 m范围内均为常见的伞菌类蘑菇，如红菇属、鹅膏菌属、牛肝菌属、腹苗类的硬皮马勃菌属等，且每棵树桩2 m范围内菌菇数量不等，介于3～7个。

处理后(11月12日)，对照组与实验组树桩周围菌菇数量呈现显著性差异，对照组菌菇数量差异不大；实验组菌菇几乎全部被抑制，除树桩5外，其他树桩周围着生个数为0(表3，表4)。

表3 树桩周围菌菇着生数量

表4 对照组和处理组的单因素方差分析

2.2.2 抑制效果分析

对处理前后树桩周围着生数量进行方差分析，结果表明对照组无明显变化；处理组菌菇数量显著降低，菌菇数由处理前的24个降为2个，说明使用该方法对非目的菌根杂菌的抑制率高达91.67%，达到较好的抑制效果(图4)。

图4 抑制效果

3 讨论

松乳菇目的菌宿主辨识实验中发现，该方法是通过连续观察得到的结果，只适用于宏观判断。然而自然界土壤微生物极其丰富，目的菌与非目的菌之间有无相互抑制和促生现象，以及与其它土壤微生物的共生关系等，都有待于采用分子生物学方法作进一步研究。

非目的菌根杂菌的抑制实验中发现，该方法虽然取得良好效果，但时间太长，不可控因素太多，如:野生动物破坏、人为破坏以及风吹、地表水径流等，都会影响抑制效果[10-11]。因此寻找一种在短时间内既能达到抑制杂菌目的，同时对目的菌根在该区域正常生长又无影响的方法，有待作进一步研究。