黄芪多糖、银黄联用对新生犊牛免疫力及发病的影响

2021-12-07郭思凡

中国乳业 2021年10期

郭思凡，曹杰

中国农业大学动物医学院，北京 100193

0 引言

新生犊牛在胎儿时期无法通过胎盘获得母源抗体，出生后需通过初乳获得被动免疫，此阶段犊牛免疫系统发育不完全，易受各种病原侵袭而发生腹泻、肺炎等疾病[1]。预防性使用抗生素可能造成犊牛肠道菌群失调、生长缓慢，也会增加耐药风险。黄芪多糖是中药黄芪的提取物，能刺激机体产生免疫细胞，增强吞噬细胞功能，快速杀灭病原菌，从多通路上提高犊牛免疫力[2，3]。银黄可溶性粉是金银花和黄芩提取物，主成分为黄芩苷和绿原酸，可干扰病原微生物的复制表达代谢，具有解热、止咳平喘的作用，对呼吸系统疾病有很好的抑制作用[4]。且黄芪多糖和银黄可溶性粉没有耐药风险。本试验的目的在于，探索黄芪多糖和银黄联用对新生犊牛免疫力及发病的影响，为犊牛疾病预防提供依据。

1 材料与方法

1.1 试验材料

黄芪多糖粉，北京生泰尔生物科技有限公司生产，兽药字050325236；银黄可溶性粉，北京生泰尔生物科技有限公司生产，兽药字050325229。

免疫球蛋白G（IgG）酶联免疫吸附检测试剂盒，购自比利时Bio-X Diagnostics公司；白细胞介素2（IL-2）、肿瘤坏死因子（TNF-α）、CD3分子、CD4分子、CD8分子酶联免疫吸附剂测定（ELISA）试剂盒，购自上海江莱生物科技有限公司。

Cence离心机CL5，购自凯达湘仪离心机厂；HT312医用折光仪，购自ATC公司；MK3酶标仪，购自Thermo公司。

1.2 试验动物及处理

试验分两阶段进行，I期试验在河北首农现代农业科技有限公司进行，II期试验选择新生犊牛发病率较高的河北某牧场进一步验证。两次试验各选择40头体重相近、健康状态良好的1 日龄荷斯坦母犊纳入试验，随机分为试验组和对照组，每组20 头。试验组犊牛自出生起，每天随奶投服黄芪多糖5 g、银黄可溶性粉3 g，每天1 次，连续给药7 天。对照组犊牛不给药，其他饲养条件一致。

1.3 数据收集及分析

自出生起连续观察记录两组犊牛21 天内健康状况。按照美国威斯康辛大学犊牛健康评分表打分，记录犊牛腹泻、肺炎发生情况，如耳号、症状持续时间和死亡数，计算发病率、发病群体平均评分和死亡率。在给药第7天时，I期试验40 头犊牛采血，血清总蛋白使用医用折光仪检测，血清IgG、IL-2、TNF-α、CD3、CD4、CD8使用ELISA试剂盒检测。

数据采用SPSS 20.0软件进行单因素方差分析，结果用平均数±标准差表示，P＜0.05为差异显著。

2 结果与分析

2.1 新生犊牛发病及死亡情况分析

I期试验两组新生犊牛均未发生肺炎，腹泻分1～7 天、8～21 天两阶段统计。两阶段内试验组新生犊牛腹泻发生率均显著低于对照组（P＜0.05）；试验1～7 天发病评分，试验组与对照组相同，8～21天，试验组低于对照组，但差异不显著（表1）。试验组8～21 天发病率较1～7 天提高5%，对照组8～21天发病率较1～7 天提高25%。试验组8～21 天发病评分较1～7 天无变化，对照组8～21 天发病评分较1～7 天提高0.18（表1）。从腹泻犊牛具体评分上看，试验1～7 天两组腹泻犊牛评分均为2分，8～21天，试验组腹泻犊牛评分均为 2 分，而对照组有50%的腹泻犊牛为2 分，50%的腹泻犊牛为 3 分，表明试验组犊牛腹泻发生严重程度轻于对照组犊牛（表2）。从腹泻持续时间上看，试验1～7 天，试验组犊牛腹泻持续时间为3～4 天，对照组均为4 天及以上；8～21 天，试验组犊牛腹泻持续时间均为3 天，对照组持续3 天的犊牛仅占40.0%（表3）。

表1 试验期间犊牛腹泻发生情况

表2 试验期间腹泻犊牛评分情况单位：头

表3 试验期间犊牛腹泻持续时间单位：头

II期试验犊牛腹泻、肺炎均有发生。两期试验犊牛腹泻情况综合分析表明，黄芪多糖和银黄联用可有效降低犊牛腹泻发生率，降低腹泻犊牛临床症状的严重性，缩短腹泻持续时间。将II期试验犊牛肺炎发病情况分成1～7 天、8～21 天两阶段统计。1～7天，试验组和对照组新生犊牛均无肺炎发生，10 天左右部分犊牛出现症状，轻微泪痕，单侧眼睛少量黏稠分泌物，按照美国威斯康辛大学犊牛健康评分表计算总评分小于4 分；部分犊牛症状加重表现肺炎，持续性咳嗽、泪痕、双侧脓性鼻腔分泌物、单耳或双耳下垂（中耳炎），采用长效土霉素治疗。试验8～21 天内，试验组犊牛肺炎发病率显著低于对照组，死亡率低于对照组但差异不显著（表1）。犊牛肺炎发病评分，试验组1 头犊牛评分为6 分，对照组7 头犊牛评分4 分犊牛3 头、6 分犊牛4 头。试验组仅1 头犊牛发生肺炎，持续3 天，最终死亡，而对照组7 头发病犊牛中，持续3、4、5天时间各1 头，4头发病时间≥7 天，最终死亡3 头。结果表明，黄芪多糖和银黄联用可降低犊牛肺炎发病率、缩短发病时间并减轻发病严重程度。

2.2 I期试验犊牛血清总蛋白、IgG、免疫因子及T细胞淋巴亚群评价

I期试验40 头犊牛采血检测结果显示，两组犊牛出生第7天的TP值均高于5.50 g/dL，IgG均高于10.00 mg/mL，并且均在正常范围内，表明试验组和对照组新生犊牛均未出现被动转运失败。试验组犊牛的TP值较对照组高0.28 g/dL，IgG含量较对照组高0.24 mg/mL，均差异显著（P＜0.05），表明黄芪多糖与银黄联用可在一定程度上促进初乳免疫球蛋白被动转运，提高犊牛免疫力。试验组犊牛血清IL-2水平较对照组犊牛高3.4 pg/mL，差异不显著；血清TNF-α水平较对照组低1.34 pg/mL，差异显著（P＜0.05）。试验组犊牛CD3、CD4、CD8浓度均高于对照组，差异不显著；试验组犊牛CD4/CD8值高于对照组，差异显著（P＜0.05），表明黄芪多糖和银黄联用可提高新生犊牛的免疫水平。

表4 试验期间犊牛肺炎发病情况

3 讨论

I期试验中1～7 日龄犊牛腹泻发生率较低、持续时间较短、粪便评分较轻微，牧场在犊牛出生1 h内灌服4 L优质初乳提供了重要保障。试验组犊牛TP值及IgG含量均显著高于对照组，腹泻发生率显著低于对照组，表明黄芪多糖和银黄联用在初乳灌服基础上可进一步提高初乳中免疫球蛋白的被动转运。7 天后犊牛腹泻发生率明显上升，主要与天气变化导致的环境病原微生物富集有关。试验于2020年9月进行，第10天起经历数日阴雨天气，犊牛岛积水、圈舍清理不及时、病原微生物富集，导致腹泻发生率升高。采集腹泻犊牛粪便进行轮状病毒、冠状病毒、大肠杆菌K99及隐孢子虫抗原检测，结果显示，轮状病毒阳性率75.0%、隐孢子虫阳性率12.5%，且存在合并感染。试验组新生犊牛8～21 天发病情况较对照组轻微，表明黄芪多糖和银黄联用能有效抵抗感染性因素以及环境因素的影响，降低停药后犊牛发病率及发病严重程度。辅助性T细胞（Th细胞）是机体免疫系统的重要一环，主要分泌IL-2、TNF-α等细胞因子。TNF-α升高时，可打破肠道促炎因子与抗炎因子之间的平衡引发腹泻。T细胞淋巴亚群分布水平对于抗感染以及免疫调节起到重要作用。根据其表面标志物，T淋巴细胞可分为CD3+T细胞、CD4+T细胞以及CD8+T细胞[5]，CD4/CD8值越高，表明机体免疫功能越强。黄芪多糖和银黄联用能有效调节新生犊牛细胞因子和T淋巴细胞亚群分布情况，试验组TNF-α浓度较对照组降低13.7%，CD4/CD8值提高6.6%，均存在显著差异，有助于提升新生犊牛免疫力，改善肠道健康，最终降低腹泻的发生。

表5 试验期间肺炎犊牛评分情况单位：头

表6 试验期间肺炎犊牛发病持续时间单位：头

表7 I期试验犊牛被动转运、免疫因子及T细胞淋巴亚群情况

II期试验牧场犊牛腹泻和肺炎发病率一直较高，可能与牧场产犊高峰期犊牛小群饲养密度较高（20头/群）且群内日龄相差较大有关。Svensson等[6]发现，犊牛从犊牛岛转至小群饲养后，12～18 头/圈饲养犊牛较6～9 头/圈犊牛呼吸系统疾病发病率更高，但在腹泻方面没有明显差异。Costa等[7]发现，小群饲养过程中日龄差距较大时，日龄偏小犊牛发病率增加。牧场可以通过增加犊牛岛数量、犊牛圈数量、调整分群等方式降低发病风险。II期试验结果表明，黄芪多糖和银黄联用可有效减缓犊牛腹泻发生率的升高以及临床症状的加重，缩短腹泻持续时间。

秋冬季节由于天气变化、冷应激等原因，犊牛抵抗力减弱易发生肺炎。II期试验8～21 天试验组犊牛肺炎发病率显著低于对照组，降低30.0%。发病持续时间方面，试验组肺炎犊牛为3 天，对照组在3～8 天之间，57.1%的犊牛发病持续时间≥1 周。上述结果表明，黄芪多糖和银黄联用可降低肺炎发病率、缩短发病时间。黄芪多糖和银黄联用通过降低TNF-α浓度、提高CD4/CD8值等调节方式，维持机体促炎与抗炎因子平衡，增强巨噬细胞吞噬作用，促进T淋巴细胞增殖与分化，提升新生犊牛免疫力，减少肺炎发病[8，9]。死亡犊牛均集中在15～25日龄之间，剖检显示肺实变、淤血/出血、部分区域干酪样坏死，肺脏病料实验室检测确定为支原体感染。黄芪多糖和银黄可溶性粉联用可部分阻断支原体感染，发生支原体肺炎时应做到早诊断早治疗，出现泪痕的犊牛要引起警惕，评分大于4 分的犊牛及时治疗。两期试验对照组发病情况对比发现，8～21天观察期内，I期试验对照组犊牛未出现犊牛肺炎，而II期试验对照组犊牛肺炎发病率为35.0%，这与饲养模式有关，小群饲养模式犊牛肺炎发病率要高于犊牛岛饲养模式[6]，犊牛岛单栏饲养是预防哺乳犊牛肺炎高发的有效管理手段。