杨永国，陈丽君，李 媛，田 华，管 蕾

PAX家族是一组转录因子，由9个成员组成(即PAX1～9)，每个成员均编码1个转录因子，其在组织和器官的形成中起重要作用[1]。PAX8是PAX转录因子家族的一员，对肾脏、甲状腺和Müllerian管起源器官的胚胎发育至关重要，同时也是这些器官组织起源肿瘤的敏感性和特异性标志物[2]。PAX8在胸腺原发上皮性肿瘤中的表达文献以PAX8多克隆抗体进行检测报道较多[3-8]。PAX8单克隆抗体因克隆号不同而表达各有差异，文献报道较少。本文采用免疫组化EnVision两步法检测两种不同克隆号的PAX8单克隆抗体在胸腺上皮性肿瘤中的表达，探讨两种抗体在胸腺上皮性肿瘤中的表达及临床意义。

1 材料与方法

1.1 材料收集2013年1月～2020年10月复旦大学附属肿瘤医院病理科存档的胸腺上皮性肿瘤116例，包括A型胸腺瘤3例，AB型胸腺瘤11例，B1型胸腺瘤5例，B2型胸腺瘤7例，B3型胸腺瘤15例，化生性胸腺瘤2例，微结节型胸腺瘤1例，B3/鳞状细胞癌(灰区)2例，胸腺鳞状细胞癌65例，胸腺腺癌1例，胸腺不典型类癌3例，胸腺淋巴上皮癌1例。另收集同期行PAX8检测的甲状腺具有胸腺样分化的癌(carcinoma showing thymus-like differentiation of the thyroid, CASTLE)40例，肺鳞状细胞癌29例，胸腺鳞状细胞癌肺转移3例。收集2015年1月～2020年10月江苏省扬州市江都人民医院病理科胸腺上皮性肿瘤26例，其中A型胸腺瘤4例，AB型胸腺瘤10例，B1型胸腺瘤2例，B2型胸腺瘤3例，B3型胸腺瘤2例，胸腺鳞状细胞癌5例。另收集卵巢上皮性肿瘤45例(黏液性腺癌4例、浆液性腺癌32例、透明细胞癌3例、子宫内膜样癌6例)、肾脏上皮性肿瘤14例(透明细胞癌12例，嫌色细胞癌2例)、甲状腺乳头状癌4例检测PAX8抗体的表达。所有标本均由两位高年资病理医师共同阅片确诊，本实验经江苏省扬州市江都人民医院伦理委员会批准，患者均签署知情同意书。

1.2 方法标本均经10%中性福尔马林固定，常规石蜡包埋，4 μm厚切片，HE染色。免疫组化染色采用EnVision两步法。鼠单克隆抗体PAX8(克隆号MRQ-50)购自CELL MARQUE公司，兔单克隆抗体PAX8(克隆号EP298)购自福州迈新公司。HRP标记的二抗及DAB显色分别购自Leica公司和福州迈新公司。复旦大学附属肿瘤医院选用PAX8(MRQ-50)抗体和Leica公司的二抗进行检测，江苏省扬州市江都人民医院选用PAX8(EP298)抗体和福州迈新公司的二抗进行检测。两个单位的免疫组化结果经互换蜡块检测未发现差异表达。

1.3 结果判断PAX8以细胞核棕黄色着色为阳性。每张切片选取10个高倍视野，每高倍视野计数200个肿瘤细胞。按阳性细胞着色和所占百分比进行判断：肿瘤细胞无着色为阴性；肿瘤细胞核有着色，但阳性细胞百分比<10%为弱阳性；≥10%为阳性。

2 结果

2.1 胸腺上皮性肿瘤和部分肺鳞状细胞癌中PAX8(MRQ-50)的表达PAX8(MRQ-50)在胸腺上皮性肿瘤中的阳性率：A型胸腺瘤100%(3/3)、AB型胸腺瘤72.7%(8/11)(图1)、B1型胸腺瘤60.0%(3/5)、B2型胸腺瘤100%(7/7)、B3型胸腺瘤73.3%(11/15)、化生性胸腺瘤100%(2/2)、微结节型胸腺瘤100%(1/1)、胸腺鳞状细胞癌73.8%(48/65)(图2)、胸腺不典型类癌100%(3/3)、胸腺淋巴上皮癌100%(1/1)和CASTLE为57.5%(23/40)；B3/鳞状细胞癌(灰区)2例和胸腺腺癌1例阳性率为0。此外，本实验亦发现PAX8(MRQ-50)在转移至肺脏的胸腺鳞癌组织中100%(3/3)阳性。PAX8(MRQ-50)在29例肺原发鳞状细胞癌中，仅5例呈弱阳性，其余均阴性(表1，图3)。

2.2 胸腺上皮性肿瘤和肾脏、卵巢、甲状腺上皮性肿瘤中PAX8(EP298)的表达PAX8(EP298)在胸腺上皮性肿瘤：A型胸腺瘤(0/4)、AB型胸腺瘤(0/10)(图4)、B1型胸腺瘤(0/2)、B2型胸腺瘤(0/3)、B3型胸腺瘤(0/2)、胸腺鳞状细胞癌(0/5)(图5)均呈阴性。PAX8(EP298)在卵巢黏液性腺癌(1/4)、卵巢浆液性腺癌(30/32)、卵巢透明细胞癌(3/3)、卵巢子宫内膜样癌(6/6)、肾脏透明细胞癌(12/12)、嫌色细胞癌(1/2)、甲状腺乳头状癌(4/4)(图6)呈阳性。

3 讨论

PAX蛋白是由128个氨基酸组成的高度保守的结构域，在识别特定的DNA结合位点后启动转录，并控制基因调控[9]。PAX蛋白家族的结构相似，分为4个亚群，其中PAX8和PAX2、PAX5同属第Ⅱ亚群[10]。PAX8在胚胎发育过程中参与调控中枢神经系统、眼睛、肾脏、甲状腺、来自中肾管的器官以及与Müllerian管有关的器官发育[11]。研究表明，在非肿瘤性人体组织中，PAX8在肾小球壁上皮细胞、肾集合管细胞、萎缩性肾小管上皮细胞(不分肾段)和子宫颈上皮细胞、子宫内膜、输卵管、精囊、附睾、甲状腺、胰岛细胞以及淋巴细胞中均阳性[2]。在肿瘤组织的相关研究中，PAX8表达多见于甲状腺、肾脏和Müllerian管起源的肿瘤[12-15]。既往报道PAX8在胸腺上皮性肿瘤中亦有表达，该抗体有多种克隆号，且表达不一致；其中多克隆抗体有较高的阳性率且相对较稳定[3-6]，而单克隆抗体中不同克隆号表达差异较大[6-8]。本实验分析MRQ-50和EP298两种单克隆抗体的表达，探讨PAX8不同克隆号抗体在胸腺上皮性肿瘤的特异性及诊断和鉴别诊断意义。

Weissferdt等[16]发现PAX8在胸腺残留正常上皮细胞中呈阳性，提示PAX8在胸腺胚胎发育中起一定作用。此外，PAX1和PAX9亦可驱动胸腺起源的第三咽囊发育[5]，PAX8多克隆抗体有可能与PAX1或PAX9发生交叉反应呈阳性。

PAX基因家族成员的N末端区域具有高度的序列同源性，其中PAX8和PAX5的N端同源性为70%，增加了该区域内交叉反应的可能性。多克隆PAX8抗体可检测PAX8的5种亚型(相对分子质量分别为：3.1×104、3.4×104、4.1×104、4.3×104和4.8×104)，并可能与其他PAX家族成员具有交叉反应性[8]。因此，在无PAX8的肿瘤也有可能表现多克隆PAX8抗体的免疫反应性。Toriyama等[8]认为多克隆PAX8抗体的免疫反应性可能是与PAX5或PAX6交叉反应的结果，他们也认为胸腺组织和胸腺癌细胞对单克隆PAX8无免疫反应性。

MRQ-50是单克隆PAX8抗体较为常用的克隆号，本实验发现该克隆号在胸腺上皮性肿瘤(胸腺瘤和胸腺癌)中有较高的阳性率。目前研究普遍认为抗PAX8 N端的Abs，特别是多克隆抗体，能与其他PAX转录蛋白发生交叉反应，如在扁桃体B淋巴细胞和胰腺神经内分泌细胞呈核阳性；Røge等发现在克隆号为MRQ-50、PAX8/1492和DBM15.48的单克隆抗体中同样可见该交叉反应。本实验发现PAX8(MRQ-50)在胸腺上皮性肿瘤中的表达也进一步印证该型号单克隆抗体存在交叉反应；同时亦发现PAX8(MRQ-50)在胸腺鳞状细胞癌中有较高的阳性率，在肺原发的鳞状细胞癌中呈阴性。因此，PAX8(MRQ-50)在胸部肿瘤的鉴别诊断中具有重要意义和价值。

EP298是近年针对PAX8 C末端区域的单克隆抗体，本实验胸腺上皮性肿瘤均呈阴性，45例卵巢癌、14例肾细胞癌和4例甲状腺乳头状癌均表现为较高的阳性率。近年重组单克隆抗体(EP298、SP348和ZR-1)主要针对PAX8的C端(ZR-1和EP298)，均未显示有交叉反应，本实验PAX8(EP298)在胸腺上皮肿瘤呈阴性也进一步印证了该观点。因此，建议使用针对PAX8的C末端区域的单克隆抗体检测肿瘤中PAX8的表达。

目前，文献报道PAX8多克隆抗体在胸腺上皮性肿瘤中的阳性率较高，本实验中PAX8(MRQ-50)在胸腺上皮性肿瘤中也具有较高的阳性率。PAX8(MRQ-50)在肺鳞状细胞癌中呈阴性，可资鉴别。PAX8在胸腺上皮性肿瘤中的表达，可能是由于和PAX家族其他成员的N-末端区域发生交叉反应，而非真正的阳性。PAX8(EP298)单抗针对PAX8基因C末端区域无交叉反应，在胸腺上皮性肿瘤中呈阴性。因此，PAX8可以作为胸腺上皮性肿瘤的生物学标志物。由于PAX8抗体有多种克隆号且表达不一致，应选用多克隆抗体或克隆号为MRQ-50的单抗辅助胸腺上皮性肿瘤的诊断或鉴别诊断。