郑国兵 张艳芳 梁少霞 赵婧 谢丰华 彭建明

【摘要】目的：探究荧光定量聚合酶链反应（quantitative.fluorescent.polymerase.chain.reaction，QF-PCR）技术在常见染色体非整倍体检测中的应用效果。方法：选取2019年1月至2020.年.12月产前诊断500例标本中的13、18、21、X、Y染色体，并与传统的G显带染色体核型分析结果做对比。结果：在500例样本中，通过QF-PCR技术检测出非嵌合型染色体数目异常有60例，其中有21三体综合征25例，18三体综合征20例，13三体综合征5例，X单体3例，XXX1例，XXY2例，XYY2例，XXX合并18三体综合征2例，检测结果与核型分析结果一致。结论：QF-PCR技术在常见染色体非整倍体检测中具有很大的应用价值，在临床检测中的应用效果较好

【关键词】荧光定量聚合酶链反应技术；染色体非整倍体；产前诊断；核型分析

【中图分类号】R596.1.【文献标识码】A.【文章编号】2096-5249（2021）14-0147-02

染色体非整体倍体异常是一种比较常见的染色数目异常情况，包括21三体综合征、18三体综合征、13三体综合征、三倍体、性染色体数目异常，这些疾病将会胎儿的生命安全造成极大的隐患，如宫内死胎、流产等，患儿在出身后存在不同程度的智力缺陷、生长发育比较迟缓，甚至存在畸形组织器官，会给患者的家庭带来沉重的影响[1]。目前治疗染色体异常的方法还在探索阶段，临床上主要通过产前筛查染色体异常，进行产前干预，以提高新生儿的出生质量[2]。随着科学技术的发展，相关研究发现[3]，荧光定量聚合酶链反应（quantitative fluorescent polymerase chain reaction，QF-PCR）技术能够快速诊断染色体非整倍体，本研究选取2019年1月至2020 年 12月产前诊断500例标本中的13、18、21、X、Y染色体，并与传统的G显带染色体核型分析结果做对比，探究QF-PCR技术在常见染色体非整倍体检测中的应用。

1？资料与方法

1.1.一般资料

选取2019年1月至2020年12月产前诊断500例标本中的13、18、21、X、Y染色体。按照常规培养、收获、制片G显带，按照相关标准进行核型分析。

1.2.方法

在B超引导下，对绒毛、羊水或者脐血穿刺取样，开展染色体核型分析与QF-PCR检测。染色体核型分析按照常规的细胞培养、收获、制片G显带，按照相关标准开展核型分析。QF-PCR检测主要分为STR定点、提取标本DNA、PCR扩增、毛细管电泳等。STR定点使用广州达瑞生物技术股份有限公司非整倍体检测试剂盒，共标测了20位点，包括21号染色体的6个STR位点，18号染色体的4个STR位点，13号染色体有4个STR位点，性染色体6个STR位点，包括按照相关标准提取绒毛、羊水或者脐血标本的DNA，在扩增仪上扩增，以95 ℃持续5 min预变性、然后用94 ℃30 s、60 ℃60 s、70 ℃60 s，循环25次左右，再以60 ℃延伸1 h，将扩增的产物放于4 ℃的环境中避光保存。取甲酰胺8.5 μL，分子质量标记物0.5 μL，PCR扩增产物1.0 μL，放在冰水上迅速冷却 3 min，进行毛细管电泳。

1.3.观察指标

重点观察500例标本中的13、18、21、X、Y染色体，尤其是DXS6809、DXS9895、AMEL、TAF9L、ZFXY、SRY、XHPRT；D13S256、D13S797、D13S317、D13S305、D13S800、D13S325位点的变化。

2？结果

在500例样本中，通过QF-PCR技术检测出非嵌合型染色体数目异常有60例，其中有21三体综合征25例，18三体综合征20例，13三体综合征5例，X单体3例，XXX1例，XXY2例，XYY2例，XXX合并18三体综合征2例，检测结果与核型分析结果一致。

3？讨论

染色体数目发生异常或是结构发生畸形，是导致新生儿出现缺陷的主要原因，染色体异常的发生率通常在1/160，其中最为常见的为21、18、13三体、性染色体异常。患有染色体异常的患儿通常表现为智力低下、生长迟缓、畸形的症状[4]，会给患儿带来巨大的伤害。目前并没有效果较好的治疗方法，患儿的出生会给患儿的家庭以及患兒本身造成极大的伤害，患儿将承担巨大的疾病痛苦，而家庭需要承受沉重的经济负担。在诊断技术没有得到普及时，染色体异常患者由于发育比较迟缓，会伴随行为或者学习的障碍，在青春期容易出现发育异常，在成年以后易发生不孕不育，对患者本人来说是非常严重的影响，患者的家庭也承受着巨大的痛苦。

当前，各个地区大力提倡婚前、孕前检查，以及产前筛查、诊断，目的在于及早防控，以提高新生儿的质量[5]，稳定社会的和谐，避免悲剧的发生。相关的研究认为[6]，不同孕妇年龄与检出染色体异常之间存在联系，因此孕妇高龄被列为风险指标，其他风险因素还包括唐筛高风险、无创产前基因检测高风险、胎儿超声异常、夫妻双方患有珠蛋白生成障碍性贫血、不良生育史、染色体异常家族史等。每种综合征的表现并不相同，一些患儿可能只有轻微的生理异常以及神经认知障碍；而另一些患儿可能会出现比较严重的，甚至危及生命的症状。传统的羊水细胞培养染色体核型分析技术，其检测的范围比较广、可靠性较好、认可度较高，是染色体病检测的金标准，能够准确地检测出染色体的具体情况，主要包括染色体数目、染色体结构两个方面的异常。

随着传统的羊水细胞培养染色体核型分析技术不断应用，操作人员逐渐发现这种方法耗时比较长、等待报告的时间需要10天左右，会加重孕妇以及孕妇家属焦虑的心情。传统的羊水细胞培养染色体核型分析技术运用效果并不理想，主要表现在两个方面。首先，传统的分析技术对操作人员的技术要求比较高。其次，孕妇的羊水对周围环境、显带比较敏感，会影响到检测的结果，甚至最终导致检测的失败[7]，会使患者错过最佳的医学处理时机。

随着科学技术的发展，QF-PCR检测技术得到了广泛的关注，适用于各个年龄阶段的产妇，这种方法能够进一步判断染色体的数目。QF-PCR检测技术与G显带的核型做比较，具有明显的优势[8]，其主要利用了STR的遗传标记在人群中多态性的特点，通过运用PCR扩增以及毛细管电泳技术，逐一分析各STR点荧光峰的个量或面积比值。涉及PentaD、D21S1246、D21S2052、D21S1446、D21S1411、LFG21、D21S1435、D21S1435、D21S11等定点，QF-PCR检测技术操作比较快速，最短能够在一天之内出结果，最长不会超过两天的时间，极大缩短了孕妇以及孕妇家属等待的时间，减少了不良情绪的发生；QF-PCR检测技术操作只需要很少的样本量就能够诊断单基因病；荧光定量聚合酶链反应（QF-PCR）检测技术操作比较便捷、自动化程度较高，能够根据STR点的个性化信息做出准确的判断，判断母体是否发生了组织污染[9-10]。在本研究500例样本中，主要使用了QF-PCR检测技术，分为STR定点、提取标本DNA、PCR扩增、毛细管电泳等。通过QF-PCR技术检测出非嵌合型染色体数目异常有60例，其中有21三体综合征25例，18三体综合征20例，13三体综合征5例，X单体3例，XXX1例，XXY2例，XYY2例，XXX合并18三体综合征2例，检测结果与核型分析结果一致。因此，QF-PCR技术在常见染色体非整倍体检测中应用效果比较好，具有较高的准确性，发展前景广阔，值得在临床治疗中大力推广。QF-PCR检测技术在实际操作中比较高效，操作便捷、能够极大提高检测的效率，节省检测的时间，快速给出检测结果，在临床上能够与染色体核型分析优势互补。简单来说，QF-PCR检测技术所需要的样本比较少、操作步骤简单、自动化程度高、节省人力，过程比较快速、客观，是一种比较准确的检测方法。

参考文献

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