柳 敏，程 颖，景素敬，郝伟红，姜 红

(1.邯郸市第二医院 儿科， 河北 邯郸056000；2.邯郸市中心医院 儿科)

癫痫主要是因多种原因导致儿童脑部神经元异常放电，患儿出现突发性、短暂脑功能障碍，同时该疾病具有一定致残性，对儿童正常生长发育造成严重影响[1]。癫痫患儿主要采用药物治疗，但疾病早期临床特征不明显，部分患儿因无法及时诊断延误最佳治疗时机，病情逐步恶化[2]。儿童癫痫共患注意缺陷多动障碍(ADHD)作为癫痫常见类别之一，表现为自制力不足，常见情况包括注意力涣散、任性冲动、发育迟缓、认知功能缺陷等，通常还伴有多种心理疾病表现[3]。儿童癫痫的发生与中枢神经递质有关，而多巴胺作为其中之一，主要起到兴奋脑内神经递质，可在一定程度上调控中枢神经系统多种生理功能[4]。关于ADHD发病机制研究仍存在一定争议[5-7]。本文通过研究多巴胺转运体(DAT)、多巴胺D2受体(DRD2)与小儿癫痫间关系，进一步证实多巴胺对癫痫影响，并对癫痫与儿童性激素水平间关系进行分析，报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

2018年1月-2019年1月邯郸市第二医院和邯郸市中心医院儿童神经内科门诊及住院部诊断癫痫患儿60例作为研究组，其中ADHD患儿30例作为研究B组，其余患儿则为研究A组；再选择同时段儿科门诊健康体检儿童60例作为对照组。

纳入标准：①观察组患儿均符合《神经病学》[8]中儿童癫痫、ADHD诊断标准，经脑电图、影像学等辅助检查确诊为癫痫，且近期内未使用抗癫痫药物进行治疗；②观察组患儿入组前癫痫发作频次≥2次/月，且发作间隔时间>24 h；③入组儿童年龄在4-12岁间，体质量≤50 kg，性别不限；④对照组儿童年龄与性别均于研究组匹配；⑤两组儿童入组前均未服用激素或其他影响激素代谢药物；⑥临床病历资料完整，能正常获得研究所需数据。

排除标准：①入组儿童存在进行性中枢神经系统疾病、广泛性发育障碍、精神或情感障碍、内分泌系统疾病等；②入组儿童合并心、肺、肝、肾等重大脏器疾病；③入组儿童伴有其他锥体外系疾病，如脑外伤、习惯性抽搐等。

观察组患儿男35例，女25例；年龄4-12岁，平均(8.23±2.55)岁；癫痫发作频次2-20次/月，平均(9.81±3.22)次/月。对照组患儿男33例，女27例；年龄4-12岁，平均(8.56±2.27)岁。两组患儿性别、年龄比较差异无统计学意义(P>0.05)。本研究已获得我院医学伦理委员会批准，且患儿监护人均签署知情同意书。

1.2 方法

入组儿童均采集晨起空腹肘静脉血10 mL，等分为2份分别进行DAT和DRD2基因表达和血清性激素水平检测。

①DAT和DRD2基因表达检测：新鲜血样采取完成后置于抗凝管中，并于-4℃冰箱低温保存，进行基因表达检测，具体操作步骤如下：①提取总RNA及反转录：向样本中加入Trizol裂解细胞(适量)，再进行离心→萃取→离心→沉淀(加入异丙醇)→DEPC水溶解(适量)，使用琼脂糖凝胶电泳+核酸蛋白检测仪进行完整性和纯度检测，并参照试剂盒(Sigma公司，Prime Script RT reagent kit试剂盒)说明进行cDNA合成；②目的基因扩增：根据试剂盒(Sigma公司，SYBR Premix Ex TaqTM II试剂盒)要求及说明加入cDNA、水(适量)及引物，并使用实时检测扩增仪(ABI7500)进行扩增，预变性(95℃，10 s)→变性(95℃，10 s)→变性(56℃，15 s)→变性(72℃，35 s)，共循环42次，其中DAT、DRD2基因定量分析采用内参基因△CT法。

②血清性激素水平检测：新鲜血样采取完成后放入离心机(4 000 r/min，10 min)取血清，置于-20℃冰箱低温保存，使用全自动化学光法测定血清性激素水平，具体指标包括：卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)、催乳素(PRL)、孕酮(P)、睾酮(T)、雌二醇(E2)。

1.3 统计学方法

2 结果

2.1 A组和对照组儿童DAT和DRD2基因表达和血清性激素水平变化比较

A组DAT和DRD2基因表达水平明显高于对照组(P<0.05)，见表1。两组儿童血清FSH、LH、PRL、P、T、E2含量差异无统计学意义(P>0.05)，见表2。

表1 A组和对照组儿童DAT和DRD2基因表达水平比较

表2 A组和对照组儿童血清性激素水平变化比较

2.2 童DAT和DRD2基因表达和血清性激素水平与小儿癫痫相关性分析

Spearman相关性分析结果显示：血清性激素水平与小儿癫痫间无相关性(P>0.05)，DAT和DRD2基因表达水平与小儿癫痫呈正相关(P<0.05)，见表3。

表3 儿童DAT和DRD2基因表达和血清性激素水平与小儿癫痫相关性分析

2.3 B组和对照组儿童DAT和DRD2基因表达和血清性激素水平变化比较

B组DAT基因表达水平明显低于对照组(P<0.05)，B组DRD2基因表达水平明显高于对照组(P<0.05)，见表4。两组儿童血清FSH、LH、P含量差异无统计学意义(P>0.05)；B组血清PRL、T、E2含量明显低于对照组(P<0.05)，见表5。

表4 B组患儿DAT和DRD2基因表达变化比较

表5 B组和对照组儿童血清性激素水平变化比较

2.4 童DAT和DRD2基因表达和血清性激素水平对ADHD患儿诊断价值分析

ROC曲线分析结果显示：儿童DAT、DRD2基因表达和血清PRL、T、E2水平均可在一定程度上诊断ADHD，其AUC分别为0.793(95%CI：0.681-0.905)、0.776(95%CI：0.679-0.872)、0.734(95%CI：0.632-0.837)、0.717(95%CI：0.597-0.836)、0.779(95%CI：0.656-0.903)，见表6。

表6 儿童DAT和DRD2基因表达和血清性激素水平对ADHD患儿诊断价值分析

3 讨论

小儿癫痫是因多种原因诱发阵发性、短暂性脑功障碍所致的神经系统综合征，主要分为原发性和继发性两大类，因儿童各个年龄段神经系统都处于发育阶段，导致其癫痫特征各异，临床多采用个体化药物治疗。近年多项探究发现，小儿癫痫早期临床症状有限，大部分患儿均伴有不同程度发育、认知、精神、心理等各方面障碍，而ADHD作为其常见类型之一，临床发病率相对较高。

大量研究成果证实ADHD患儿主要发病机制与神经递质多巴胺功能缺陷有关，相关解剖学研究也发现患儿脑部结构与正常儿童存在一定差异，近年也有研究证实多巴胺转运、受体基因多态性等也与ADHD发病密切相关[8-12]。因此，本研究对对癫痫及ADHD患儿DAT和DRD2基因表达水平进行调查，发现癫痫和ADHD患儿DRD2基因表达水平明显高于健康儿童；癫痫患儿DAT基因表达水平较高，而ADHD患儿该基因表达相对较低，这与王胜泉等[13]研究结果类似。DRD2作为多巴胺自身受体之一，癫痫和ADHD均会出现不同程度多巴胺系统功能紊乱，进而导致体内DRD2基因表达水平上升[13]。DAT是NA+/CL-依赖性跨膜转运蛋白，其重摄取作用主要是将多巴胺由突出间隙重摄取回释放该多巴胺的突出前神经元，ADHD患儿DAT含量上升则会导致更多多巴胺被重摄取，进而出现中枢多巴胺清除过度，导致突触间隙多巴胺浓度相对较少[14-15]。多巴胺作为脑内兴奋性神经递质，主要对中枢神经系统多种生理功能进行调节，当脑内多巴胺不足则会导致儿童脑部对无关刺激控制能力下降，使其选择性过滤无关刺激，进而无法保证集中注意力，因此引起ADHD。为进一步探讨基因研究价值，本文还对DAT和DRD2基因表达水平与癫痫相关性进行研究，发现其表达水平高低与癫痫发病情况呈正相关；同时本文还对其在ADHD患儿中诊断价值进行分析，研究结果显示该指标对疾病诊断价值相对较高。

随着近年对内分泌学研究不断升入，部分学者发现内分泌激素对ADHD发病机制也存在一定影响，且以性激素影响较为常见[16-17]。为此，本研究对癫痫及ADHD患儿血清性激素水平进行分析，发现癫痫患儿体内性激素与健康儿童无异，而ADHD患儿则在PRL、T、E2含量上与健康儿童间存在一定差异。PRL作为蛋白内激素同时也是多巴胺超敏因子之一，主要是有腺垂体和多种垂体外组织(细胞、大脑等)组织产生，其分泌水平脑内重要神经递质(多巴胺、5-羟色胺、去甲肾上腺素等)影响，因此ADHD血清PRL含量低于健康儿童[18-19]。T和E2分别为生物活性最强的雄性和雌性激素，均具有调节机体代谢的作用，相关动物实验证实，两种激素都对脑内多巴胺神经元具有保护作用，同时影响脑内儿茶酚胺分泌、代谢[22]。近年有学者研究发现[20-21]，ADHD患儿中枢神经递质中存在明显儿茶酚胺不足表现，其临床特征主要表现为无法有效过滤无关刺激，故ADHD血清T、E2含量低于健康儿童。本研究还对血清PRL、T、E2水平对ADHD诊断价值分析，ROC曲线分析结果显示：血清PRL、T、E2诊断ADHD的AUC分别为0.734(95%CI：0.632-0.837)、0.717(95%CI：0.597-0.836)、0.779(95%CI：0.656-0.903)，证明血清PRL、T、E2水平均可在一定程度上诊断ADHD。

综上所述，癫痫患儿DAT、DRD2基因表达水平高于健康儿童，且表达水平与疾病正相关，患儿性激素水平与健康而同相当；ADHD患儿DAT、DRD2基因及性激素中PRL、T、E2含量与健康儿童间存在差异，且各项指标可在一定程度上辅助临床诊断ADHD。