李东娴 张晓南 普冰清 王鹏 徐怡 游燕

摘 要 目的：对注射用舒尼铂（冻干）的无菌检查方法进行适用性研究。方法：按《中国药典》2015年版通则1101进行试验，采用薄膜过滤法对注射用舒尼铂（冻干）进行无菌检查。结果：注射用舒尼铂（冻干）经pH 7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液100 ml/膜冲洗后，试验组均生长良好，与阳性对照组一致。结论：薄膜过滤法可用于注射用舒尼铂（冻干）的无菌检查。

关键词 注射用舒尼铂（冻干） 无菌检查 方法适用性

中图分类号：R979.19； R927.1 文献标志码：A 文章编号：1006-1533（2021）07-0076-02

Validation on sterility test method for suniplatin injection

LI Dongxian*， ZHANG Xiaonan， PU Bingqing， WANG Peng， XU Yi， YOU Yan（Yunnan Bai Yao Group Innovation and R&D Center/Yunnan Institute of Materia Medica/ Yunnan Provincial Enterprise Key Laboratory for the New Drug Creation of Traditional Chinese Medicine and Ethnic Drug， Kunming 650111， China）

ABSTRACT Objective： To analyze the applicability of sterility test method for suniplatin injection. Methods： According to the Chinese Pharmacopeia （2015 edition） General rule 1101， the sterility test for suniplatin injection was conducted by membrane filtration. Results： The microbes in the test group grew well after suniplatin injection （lyophilized） was washed with pH 7.0 sterile sodium chloride-peptone buffer at 100 ml/membrane， which was consistent with the results of positive control group. Conclusion： This method can be used for the sterility test for suniplatin injection.

KEy WORDS suniplatin injection； sterility test； validation

铂类抗癌药物属于一类结构独特的无机配合物，目前已批准上市的铂类抗癌药物有顺铂[1]、卡铂等7个品种[2-3]，是目前治疗常见恶性肿瘤的药物，在临床上得到广泛使用，对改善癌症患者的生活质量、延长寿命起到重要的作用。但不良反应和耐药性一直是铂类抗癌药物亟需解决的问题。因此，开发新型铂类化合物是目前抗癌药领域的研究方向之一[4]。

舒尼铂是由对卡铂（carboplatin）和舒铂（heptaplatin）的化学结构进行组合修饰而得。注射用舒尼铂（冻干）为云南省药物研究所以舒尼铂为原料的自研冻干注射用药，为控制产品质量，需对注射用舒尼铂（冻干）进行无菌检查的方法学研究。而中国药典规定，只要供试品性状允许，可采用薄膜过滤法进行无菌检查[5]。据此，拟采用薄膜过滤法对注射用舒尼铂（冻干）的无菌检查进行方法学研究。

1 材料与方法

1.1 样品

舒尼铂（云南省药物研究所生产；共3批：170412，

170711，170727）。

1.2 稀释剂及培养基

pH 7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液、胰酪大豆胨液体培养基、硫乙醇酸盐流体培养基、沙氏葡萄糖液体培养基，均由北京三药科技开发公司提供。

1.3 菌种

金黄色葡萄球菌[CMCC（B）26003 第Ⅲ代]、枯草芽孢杆菌[CMCC（B）63501 第Ⅲ代]、铜绿假单胞菌[CMCC（B）10104 第Ⅲ代]和白色假丝酵母[CMCC（F）98001 第Ⅲ代]、生孢梭菌[CMCC（F）64941第Ⅲ代]均由云南省食品藥品检验所提供；黑曲霉[CMCC（B）98003 第Ⅱ代]，由中国药品生物制品检定研究院提供。

1.4 方法

参照中国药典无菌检查法进行试验[5]。

1.4.1 菌液制备

将金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌的新鲜培养物接种至胰酪大豆胨液体培养基，生孢梭菌的新鲜培养物接种至硫乙醇酸盐流体培养基，30～35 ℃培养18～24 h；白色假丝酵母的新鲜培养物接种至沙氏葡萄糖液体培养基，20～25 ℃培养2～3 d；黑曲霉的新鲜培养物接种至沙氏葡萄糖琼脂培养基，20～25 ℃培养5～7 d。取金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、生孢梭菌、枯草芽孢杆菌、白色假丝酵母的新鲜培养物，用0.9%无菌氯化钠溶液制成适宜浓度的菌悬液备用；取黑曲霉的新鲜培养物，加入3～5 ml含体积分数0.05%聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱后用含体积分数0.05%聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液制成孢子悬液并稀释成适宜浓度备用。

1.4.2 方法摸索与优化

用170412批次的样品，进行无菌检查方法探索。

1）供试品处理 各批次表面灭菌后的样品，去除铝盖，用碘伏棉球擦拭胶塞后，通过一次性全封闭薄膜过滤器注入葡萄糖注射液10～15 ml，振摇使冻干粉全部溶解后将所有液体通过滤筒。

2）试验组 取样品40瓶，按供试品处理方法处理后，通过一次性全封闭薄膜过滤器（二联），20瓶/膜，共做12份。其中6份用100 ml pH 7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液冲洗，另外6份用300 ml pH 7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液冲洗。冲洗结束后，分别加入硫乙醇酸盐流体培养基和胰酪大豆胨液体培养基，并加入金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、生孢梭菌、枯草芽孢杆菌、白色假丝酵母菌液或黑曲霉孢子悬液。放入培养箱中培养。

3）供试品对照组 以冲洗液代替菌液，同试验组操作。

4）菌液对照组 以冲洗液代替供试液，同试验组操作。

5）阴性对照组 以冲洗液代替供试液和菌液，同试验组操作。

1.4.3 方法验证

1）试验组 取供试品40瓶，按供试品处理方法处理后，将40瓶供试品全部通过一次性全封闭薄膜过滤器（二联），20瓶/膜。再用pH 7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液200 ml冲洗滤膜，每膜100 ml，向一只滤筒中加入100 ml硫乙醇酸盐流体培养基，向另一只滤筒中加入100 ml胰酪大豆胨液体培养基，取塑料夹片，在内含硫乙醇酸盐流体培养基滤杯的进液口处导管上端约5～6 cm位置将其夹住，取一无菌剪刀，于夹片的上端约3 cm处将导管剪断，并将尾端插入滤杯上端的呼吸器端口。如此分别重复3次，获得含胰酪大豆胨液体培养基和硫乙醇酸盐流体培养基的滤筒各3份。拔出插在呼吸器上端的软管，通过呼吸器注入1 ml含菌量不大于100 cfu的菌液于杯体，重新封闭杯体并置于培养箱培养，用注射器穿刺滤管另一侧。加入硫乙醇酸盐流体培养基的3份滤筒分别加入金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、生孢梭菌的菌液；加入胰酪大豆胨液体培养基的3份滤筒分别加入枯草芽孢杆菌、白色假丝酵母菌液或黑曲霉孢子悬液。加入硫乙醇酸盐流体培养基的滤筒放入30～35 ℃的恒温培养箱中，培养不超过5 d，加入胰酪大豆胨液体培养基的滤筒放入20～25 ℃培养箱中，培养不超过5 d。其余两批样品均用同法操作。

2）供试品处理、供试品对照组、菌液对照组、阴性对照组 分别同“1.4.2”1）、3）、4）、5）。

2 结果

2.1 方法优化

2.2 方法适用性验证

对3批注射用舒尼铂（冻干）进行无菌检查方法适用性验证的结果显示，3个批次试验组各容器中各菌种的生长状况与菌液对照组一致，阴性对照组和供试品对照组各培养物均澄清，无微生物生长。表明注射用舒尼铂（冻干）的检验量在该检验条件下无抑菌作用或其抑菌作用可以忽略不计。

3 讨论

本试验使用薄膜过滤法对注射用舒尼铂（冻干）进行无菌检查，结果表明，舒尼铂对6种试验菌株均无明显抑制作用，这与其他铂类抗癌药无菌检查方法学研究的结果相符[6]。虽然有报道显示，顺铂等铂类药物对大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌等有一定的体外抑菌活性[7]，但相关文献与本试验均表明这些抑菌活性并不影响使用薄膜过滤法对药品进行无菌检查。因此，可以采用薄膜过滤法作为舒尼铂的无菌检查方法。

参考文献

[1] 陈鸿利， 吾麦尔江·艾麦提， 高峻峰， 等. 顺铂类抗肿瘤药物研究进展[J]. 承德医学院学报， 2005， 22（2）： 150-153.

[2] 祝天慧， 李裕鑫， 游松. 铂类抗肿瘤药物的研究进展[J].沈阳药科大学学报， 2016， 33（6）： 512-518.

[3] 王庆琨， 普绍平， 朱泽兵， 等. 抗肿瘤药米铂的合成工艺改进[J]. 中国药物化学杂志， 2012， 22（1）： 36-37； 43.

[4] Wheate NJ， Walker S， Craig GE， et al. The status of platinum anticancer drugs in the clinic and in clinical trials[J]. Dalton Trans， 2010， 39（35）： 8113-8127.

[5] 国家药典委员会. 中华人民共和国药典2015年版（四部）[M]. 北京： 中国医药科技出版社， 2015： 136-140.

[6] 高玉清， 王荣端， 纪敬娟， 等. 注射用奥沙利铂的无菌方法学研究[J]. 河北医药， 2009， 31（11）： 1379-1380.

[7] 袁水斌， 陈江平， 刘敏知， 等. 抗肿瘤化疗藥物对常见致病菌的抑制试验研究[J]. 实验与检验医学， 2009， 27（3）： 237-240； 268.