郑梦莎，王海军

病理诊断是临床疾病诊断中的“金标准”，也是疾病诊断中的最终结果。组织切片质量优良直接影响病理医师对结果的判读，制片的关键步骤是组织处理，其包含组织固定、脱水、透明、浸蜡的过程。本实验对新型组织脱水包埋盒与传统组织脱水包埋盒进行对比，观察单位时间内的固定效果，间接反应单位时间内的试剂交换量，提高组织的脱水效率。

1 材料与方法

1.1 材料猪肝脏和肾脏组织；新型组织脱水包埋盒，由杭州海世嘉公司遵循浙江大学实用新型专利(专利号ZL201620582691.5)生产。传统组织脱水包埋盒为常见组织脱水包埋盒(图1)；脱水机使用赛默飞ES脱水机。新型组织脱水包埋盒在传统组织脱水包埋盒的基础上，其盒身侧壁多了4个开口，开口深度达2 mm，合上盖子后能保留1 mm的试剂交换口(图2)。

图1 传统组织脱水包埋盒 图2 新型组织脱水包埋盒

1.2 方法

1.2.1猪肾、肝脏组织固定 分别取猪肾、肝脏正常大小的组织块[1]，大小1.5 cm×1 cm×0.3 cm，以及过大、过厚的组织块[2]，大于1.5 cm×1 cm，厚度>0.3 cm，分别放入新型组织脱水包埋盒和传统组织脱水包埋盒中，标记为肾脏实验组和肝脏实验组(表1、2)。标本均经10%中性福尔马林固定[3]，推荐固定时间>5 h。本实验固定时间为6 h，分别在2、4、6 h等3个时间点观察对应包埋盒中组织块的状态。

表1 猪肾脏组织实验标记方法

1.2.2新型组织脱水包埋盒切片稳定性实验 将猪肾、肝脏组织进行脱水、浸蜡处理，最后通过包埋制成蜡块，对使用新型组织脱水包埋盒的组织蜡块进行切片，观察蜡块在切片过程中的稳定性。

表2 猪肝脏组织实验标记方法

1.3 结果判读新鲜组织均经10%中性福尔马林渗透浸渍，1 h渗透深度可达0.2～0.3 cm，组织颜色由鲜红色逐渐变为灰白色[4]。经过较长时间的固定液渗透浸渍，醛基与氨基基团形成可逆的羟甲基衍生物和稳定的亚甲基桥，从而使甲醛和组织中的蛋白质发生广泛的交联，使组织变硬[5]。

2 结果

2.1 猪肾、肝脏组织固定实验(1)固定2 h后的组织状态：新型组织脱水包埋盒内组织切面灰白色部分比例明显高于传统组织脱水包埋盒内组织；两种组织脱水包埋盒内组织表面均呈灰白色，无明显差异(图3)。(2)固定4 h后的组织状态：新型组织脱水包埋盒内组织切面灰白色部分比例高于传统组织脱水包埋盒内组织，但差异缩小；触摸新型组织脱水包埋盒内组织硬度明显大于传统组织脱水包埋盒内组织。(3)固定6 h后的组织状态：两种组织脱水包埋盒内组织切面颜色均呈灰白色，无明显差异；触摸新型组织脱水包埋盒内组织比传统组织脱水包埋盒内组织质地稍硬(图4)。肝脏组织实验结果与肾脏组织实验结果一致。

图3 A.肾过大、过厚组织固定2 h：新型组织脱水包埋盒内组织(肾1-1)切面灰白色部分比例明显高于传统组织脱水包埋盒内组织(肾3-1)；B.肾正常大小组织固定2 h：新型组织脱水包埋盒内组织(肾2-1)切面灰白色部分比例明显高于传统组织脱水包埋盒内组织(肾4-1) 图4 A.肾过大、过厚组织固定6 h：两种组织(肾1-3、肾3-3)脱水包埋盒内组织切面颜色均呈灰白色，无明显差异；B.肾正常大小组织固定6 h：两种组织(肾2-3、肾4-3)脱水包埋盒内组织切面颜色均呈灰白色，无明显差异

2.2 新型组织脱水包埋盒切片稳定性实验使用新型组织脱水包埋盒的组织蜡块在切片时未发现跳片、震颤等，切片不稳定现象。

3 讨论

良好的病理组织切片是保证病理诊断质量或准确的基础。在制片流程中，组织脱水处理的效果直接影响组织切片和染色质量及后续的免疫组化检测结果[6-8]。因此，保证良好的脱水流程是临床工作中的关键步骤。

目前，脱水机组织处理缸主要有两种运行方式：(1)以赛默飞公司为代表的组织旋转运动型；(2)以徕卡公司为代表的试剂搅拌旋转运动型。无论何种运动方式，其目的均为促进试剂流动，增加与组织的接触以达到更快渗透和交换的作用[9]。本实验应用新型组织脱水包埋盒，通过在原传统包埋盒的侧壁上增加4个小口，使组织处理时试剂不仅可从原前后壁栅栏状开口进入包埋盒，也可从侧壁开口进入包埋盒以浸渍、渗透组织，特别是在组织块过大、过厚，且在脱水架内紧密排放影响试剂从前后开口进入包埋盒时，能起更好的处理作用。

本实验通过观察猪肾、肝脏组织在固定液中浸泡的过程，发现各组在相同固定时间有不同的固定效果。实验中固定效果存在差异说明固定液进出组织(包埋盒)的量不同，本组新型组织脱水包埋盒的盒身侧壁多了4个开口，使组织在脱水机内进行处理时，试剂不仅可以从包埋盒前后壁进出，还可以从包埋盒侧壁进出，增加单位时间内包埋盒内的试剂交换量，提高单位时间内的组织处理效果或缩短组织处理时间。

日常工作中使用的切片机样本夹是对包埋盒4个角进行固定，保持蜡块在切片时的稳定性。本实验在侧壁上含有4个开口的新型组织脱水包埋盒在切片时与普通组织脱水包埋盒稳定性一致，不存在跳片、震颤等切片不稳定现象。

目前，新型组织脱水包埋盒能提高组织脱水效率，投入日常工作中，单位时间内能获得更好的脱水效果，相同组织处理质量要求下可缩短部分时间。