丁保锋，刘全成，于秀冰

(佳木斯市中心医院肿，黑龙江 佳木斯 154002)

0 引言

随着对结肠癌发病机制的深入研究，目前普遍认为表观遗传学改变是继遗传学改变之外，与结肠癌的发生发展和治疗具有密切关系的另一重要机制，抑癌基因的异常甲基化通过沉默抗增殖、抗凋亡、抗血管生成和DNA 修复等基因的活性致使其正常生理功能缺失从而在肿瘤的发生中具有重要的作用[1-2]。人类相关转录因子3(RUNX3)属于位于1 号染色体的肿瘤抑制基因，特别是在结肠癌发展过程中更为关键[3-4]。肿瘤血管的生成不仅会受到很多血管生成因子的调节，还会受到抑制因子的影响，血管内皮生长因子(VEGF)[5]属于最强的一种血管生成因子，在血管新生中起着至关重要的作用，RUNX3 与VEGF 二者之间与肿瘤浸润、转移及血管新生可能存在密切的关系，在肿瘤的多步骤演进中起重要作用。

1 资料与方法

1.1 一般资料

随机选取2017 年6 月至2019 年11 月到本医院接受治疗的160 例结肠癌患者为研究对象，其中男性患者为95 例，女65 例，年龄区间：29-90 岁，平均：(63.54±1.19) 岁。所有患者术前未接受任何针对肿瘤的治疗，术后经病例检查为结肠癌。其中乳头状腺癌32 例，管状腺癌104 例，黏液癌、未分化癌、印戒癌各8 例。Dukes 分期，A 期40 例，B 期46 例，C期42 例，D 期32 例。

1.2 方法

所有标本均采用浓度10%的中性福尔马林溶液进行固定，采用石蜡进行包埋，连续切成4 pum 的厚片，采用免疫组化S-P法进行检测[6]。血管内皮生长因子先用高温煮沸法进行处理，之后再采用EDTA 液进行抗原修复；VEGF 属于鼠抗人单克隆浓缩型抗体，按照1:40 的比例进行稀释，均采用由福州迈新生物技术开发有限公司生产所提供的仪器和试剂进行操作。

1.3 结果判断

分析切片中的阳性细胞在所有同类细胞数中的比例，以及阳性细胞的着色强度情况，通过分析结果来判断免疫组化的具体状况：细胞质主线棕黄色的颗粒为阳性细胞，在400 倍下，对5 个视野中所包括的癌细胞总数以及VEGF 阳性的癌细胞数进行计算，计算后取阳性细胞所占百分比的平均数，1分表示为：阳性细胞10%以下(包括10%)，2 分表示为：11%-50%；三分表示为51%-75%；4 分为表示为：76%以上(包括76%)。阳性癌细胞的着色强度可以划分四个标准，分别为0分、1 分、2 分，每个等级的颜色分别为黄色、棕黄色、棕褐色。染色强度与阳性细胞所占的百分比相乘积如果大于3 分，就说明免疫反应呈阳性。微血管密度(MVD)值计数[7]：在40 倍的低倍镜下对癌组织间质微血管密集的部位进行观察并计算，之后再在200 倍的高倍镜下进行观察，每例标本分别计数出5 个视野，在计算过程中需要由2 为经验丰富的医生同时进行计算，最后去计算的平均值作为该例的MVD 值。肿瘤区域只要是染成棕色的单个内皮细胞，或者是内皮细胞簇，都可以直接作为血管计算。

1.4 统计学分析

采用SPSS 20.0 处理器对此次研究中的数据和信息进行分析，计数资料用(%)表示，用χ2检验，计量资料用均数±标准差表示，用t检验，检验结果P＜0.05，说明差异有统计学意义。

2 结果

2.1 RUNX3 与VEGF 在结肠癌中的表达

RUNX3 在正常结肠癌中表达，阳性率分别是阴性组的46.25%，弱阳性组的35.00%，强阳性组的18.75%，阳性表达率呈下降趋势；VEGF 在正常结肠癌中表达，阳性率分别是阴性组的22.50%，弱阳性组30.0%，强阳性组的47.50%，可见，阳性表达有明显升高的迹象。

2.2 RUNX3、VEGF 表达MVD 的关系

RUNX3 表达阴性组的MVD 属于为(50.12±9.27)，弱阳性组为(38.22±7.61)，强阳性组(19.41±6.77)，数据对比，显著递减(P＜0.05)；RUNX3 表达与MVD 之间的关系为负相关性(rs=-0.741，P＜0.01)；VEGF 表达阴性组(23.25±6.79)、弱阳性(46.82±7.24)、强阳性(51.32±8.71) 数据对比，显著递增(P＜0.05)；VEGF 表达和MVD 之间的关系为正相关(rs=0.684，P＜0.01)。

3 讨论

结肠癌是常见的一种消化道恶性肿瘤，主要发生在结肠部位，随着人们生活水平的提高，结肠癌的发病率呈现出逐渐上升的趋势，男性的发病率要女性，但对于绝经后的女性，发病率会有明显升高的现象，一旦患有结肠癌，最常见的症状是消化道出血，患者还可能出现贫血或是大便里有脓血；如果肿瘤较大，患者还会出现梗阻或是不完全梗阻的现象，在临床上都是采用手术方式或者是辅助化疗方式进行治疗，结肠癌患者的预后效果较为理想，40%左右的人可以活到五年以上，但是对于晚期的结肠癌患者，通过一些综合治疗，五年生存率也可以到20%以上[8]。结肠癌的发生是一个多因素、多步骤、多基因参与的过程，是环境和遗传共同作用的结果，结肠癌的发生和发展涉及到多种癌基因与抑癌基因的异常改变，是多基因变异导致的结果，不同的基因可能在不同的修复过程中起作用。多种癌基因的活化或失活及多种外源致癌物的刺激因素作用导致了结肠癌的发生[9]。RUNX3 是一个在细胞生长、凋亡以及分化和肿瘤发生过程中起着重要作用的基因，在人类细胞增殖和分化中起着中枢的作用，参与了结肠上皮细胞增殖的抑制、背根神经节的神经发生以及T 细胞的分化，其对胃肠道上皮细胞生长和分化的调控很可能起着重要的作用[10]。在本次研究中，RUNX3、VEGF 在结肠癌中的表达在性别、年龄、病理类型方面无显著差异，但是在分期上充分显示出RUNX3 在结肠癌的发生、发展过程中起着有效的作用，以及VEGF 促进肿瘤生长方面的作用。

表1 RUNX3 与VEGF 在结肠癌中的表达[n(%)]

表2 RUNX3、VEGF 表达MVD 的关系()

表2 RUNX3、VEGF 表达MVD 的关系()

本次研究结果显示，RUNX3 表达与MVD 之间呈负相关性(rs=-0.741，P＜0.01)，而VEGF 表达和MVD 之间存在正相关性(rs=0.684，P＜0.01)。可见，结肠癌RUNX3、VEGF 表达与MVD 之间差异显著。可能在RUNX3 抑癌基因发挥自身作用的同时，对VEGF 于MVD 的抑制作用也起到一定的影响。在本次研究中充分表明在形态学方面，RUNX3 失活和VEGF激活在结肠癌进程和发展过程中都起着至关重要的作用，通过对潜在的机制加强深入性的研究，能够对后期结肠癌的治疗和诊断提供有利的依据。VEGF 通过增加血管的通透性，导致血浆外渗，增加间质内液体量和压力，加快了淋巴回流，从而促进了肿瘤细胞的淋巴转移。因此，我们认为RUNX3，VEGF 与MVD 联合检测能够有效对结肠癌进行监测，同时还可以有效抑制肿瘤血管生成的相关因子，可以基于多个靶点来有效抑制肿瘤血管的形成，能够为临床治疗提供有力的依据，另外，对掌握结肠癌的生物学习行为和改善预后都可以起到决定性的作用。

综上所述，以RUNX3 为靶点，联合VEGF 对结肠癌的抗血管生成治疗，该治疗方案具有广阔的发展前景，通过加强进一步的研究，希望RUNX3 可以为诊断结肠癌提供有利的依据。