朱亚珍，高炳乾，张帅，胡赢，龚晗，冯雁，林源*

(1.广西医科大学附属肿瘤医院胃肠外科，广西 南宁 530021；2.广西医科大学附属肿瘤医院实验研究部，广西 南宁 530021)

0 引言

结直肠癌(Colorectal Cancer，CRC) 是全球第三大常见的恶性肿瘤[1]，其发病率和死亡率分别排在第三名和第二名[2]。白细胞介素17(IL-17) 是一种促炎细胞因子，主要由活化的CD4+T 辅助细胞(称为Th17 细胞) 产生。IL-17 家族包括6 种细胞因子IL-17A-F，其中IL-17A 是一种重要的炎性细胞因子，在许多炎症性疾病的发生发展中起重要作用，而且在肿瘤微环境中也经常被检测到[3]。有研究表明，IL-17 可通过诱导其他细胞因子的表达影响肿瘤微环境来促进癌症的发展[4,5]。有研究发现在结直肠癌组织中IL-17水平明显升高[6]。然而IL-17 参与结直肠癌肝转移形成与原发性肝癌形成机制是否一致尚未有研究。本研究通过比较IL-17A 在结直肠癌原发灶、肝转移灶和原发性肝癌中的表达差异，来探讨IL-17A 在结直肠癌肝转移形成中的作用机制。

1 临床资料与方法

1.1 病例收集

收集2013 年1 月至2018 年10 月于广西医科大学附属肿瘤医院手术切除的结直肠癌肝转移灶组织35 例，配对结直肠癌原发灶组织27 例，远癌(距原发灶＞5cm)正常肠黏膜组织27 例，原发性肝癌病灶组织35 例；远癌(距肿瘤＞1 cm)正常肝组织35 例。

1.2 实验试剂

兔抗人IL-17A 多克隆抗体购于美国Abcam 公司(货号：ab214588)；即用型快捷免疫组化MaxVisionTM2 检测试剂盒(货号：KIT-5920)购于福州迈新生物技术有限公司。

1.3 免疫组化

组织标本经过10%的福尔马林固定及石蜡包埋，4μm 厚度连续切片，二甲苯脱蜡，梯度酒精水化，采用高温热修复法(EDTA，pH=9.0)进行抗原修复。3%过氧化氢溶液灭活内源性过氧化物酶，IL-17A 抗体(1:200)4℃冰箱孵育过夜。次日室温复温30min，二抗孵育30min，DAB 显色。苏木精复染，梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树脂封片。

1.4 评分标准

IL-17A 的表达主要定位于细胞浆，阳性表达是指细胞浆出现浅棕黄色到棕褐色。阳性细胞百分率＜5%，6%～25%，26%～50%，51%～75%，＞75%分别记为0，1，2，3，4 分；无着色，浅棕黄色，棕黄色，棕褐色记为0 分，1 分，2 分，3 分。免疫组化阳性结果判断标准：阳性细胞百分率分数×着色强度分数；结果≤8 分时为低表达(-)，＞8 分时为高表达(+)。由两位高年资病理医师作出免疫组化结果评定。

1.5 统计学方法

应用SPSS 23.0 软件进行数据分析，计数资料采用百分率(%)表示，组间比较采用χ2检验或Fisher 精确概率法；以P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 结直肠癌原发灶、结直肠癌肝转移灶、原发性肝癌组织中IL-17A 的表达与临床病理信息的关系

IL-17A 在结直肠癌原发灶中的表达在不同分化程度上有统计学意义(P＜0.05)，见表1。IL-17A 在结直肠癌肝转移灶中的表达有在术前CEA 水平上有统计学意义(P＜0.05)，见表2。IL-17A 在原发性肝癌组织中的表达在肿瘤大小、脉管内癌栓、Edmondson 分级以及术前AFP 之间比较，差异均无统计学意义(均P＞0.05)，见表3。

表1 结直肠癌原发灶IL-17A 的表达与临床病理信息的关系

表2 结直肠癌肝转移灶IL-17A 的表达与临床病理信息的关系

2.2 结直肠癌原发灶与肝转移灶中IL-17A 表达的对比

结直肠癌原发灶中IL-17A 的表达率为88.89%，显著高于远癌正常肠黏膜组织(P＜0.05)。结直肠癌肝转移灶组织中IL-17A 的表达率与配对原发灶比较，差异无统计学意义(P＞0.05)，见图1、表4。

图1 IL-17A 在结直肠癌原发灶、远癌正常肠黏膜组织中的表达

表4 结直肠癌原发灶、远癌正常肠黏膜组织和结直肠肝转移灶组织中IL-17A 表达的对比 [ 例(%)]

2.3 结直肠癌肝转移灶、原发性肝癌及远癌正常肝组织中IL-17A 表达的对比

结直肠癌肝转移灶组织、原发性肝癌组织中IL-17A 的表达率均高于远癌正常肝组织(P＜0.05)；在结直肠癌肝转移灶组织中IL-17A 的表达高于原发性肝癌组织(P＜0.05)，见图2，图3，表5。

图2 IL-17A 在结直肠癌肝转移灶、配对正常肝组织中的表达

图3 IL-17A 在肝癌原发灶、远癌正常肝组织中的表达

表5 在结直肠肝转移灶、原发性肝癌病灶与远癌正常肝组织中IL-17A 表达的对比[ 例(%)]

3 讨论

越来越多的研究表明，恶性肿瘤与炎症之间的关系非常密切，IL-17 作为炎症因子之一，通过介导炎症反应参与恶性肿瘤细胞的增殖、生长、分化和凋亡等各个过程。有研究发现[7-9]，IL-17 在肝癌、胃癌、乳腺癌和卵巢癌等恶性肿瘤中的表达水平明显升高。但IL-17A 的高表达在结直肠癌肝转移灶形成中的作用和机制还不清楚。本研究主要通过比较结直肠癌肝转移灶和原发性肝癌中IL-17A 的表达差异，推测IL-17A 在结直肠癌肝转移灶形成中的作用机制。本研究发现IL-17A 在结直肠癌的原发灶和肝转移灶、原发性肝癌中均呈高表达，且明显高于远癌正常肠黏膜组织和肝组织，提示IL-17A 的高表达可能与肿瘤的发生发展有关。并且结直肠癌肝转移灶组织中IL-17A 的表达率明显高于原发性肝癌组织，提示IL-17A 在促进结直肠癌发生肝转移中可能起着重要的作用。

不同的肿瘤转移器官和部位具有不同的靶向性，肝脏往往是结直肠癌转移的首选的靶器官之一。肿瘤微环境中趋化因子及受体可能是促进肿瘤细胞发生靶向转移的重要原因。已有研究表明，IL-17A 可通过多种机制诱导结直肠癌的转移。Xie 等人[10,11]研究发现IL-17A 通过ERK1/2 及JNK1/2 信号通路调控下游信号通路蛋白从而促进结直肠癌细胞侵袭以及转移。IL-17A 通过NF-κB 通路介导MMP-2/9 表达促进结肠癌SW480 细胞迁移和侵袭[12]。此外，有研究发现IL-17A可以通过增加前列腺素E2(PGE2)和VEGF 的分泌而促进肿瘤血管的生成，促进结直肠癌细胞的转移[13-15]。综合相关研究表明IL-17A 可能通过多种机制引发结直肠癌的肝转移。

本研究发现，结直肠癌原发灶中IL-17A 的高表达率高于远癌正常肠黏膜组织(P＜0.05)，这与前人的研究结果是一致的，结直肠肿瘤组织中IL-17A 水平明显升高[6]。结直肠癌患者组织和血清中IL-17A 的高表达提示IL-17A 可作为判断结直肠癌预后的指标[16]。Richter 等人[17]研究发现激活结直肠癌细胞的IL-23/IL-17 信号通路可减少CD8+T 细胞的数量，增加Treg 细胞的免疫抑制活性，从而导致结直肠癌的生长和发展。Molina 等人[18]报道，IL-17A 在原发性肝癌肿瘤组织中显著升高并能够促进肿瘤的生长。并且卢喜等人[19]研究发现IL-17A 在结直肠癌肝转移组织中表达增加，且与肝转移瘤的进展呈正相关。这与我们的实验结果一致，我们发现IL-17A 在结直肠癌的原发灶和肝转移灶、原发性肝癌中均呈高表达，且明显高于远癌正常肠黏膜组织和肝组织，提示IL-17A 的高表达可能与肿瘤的发生发展有关。

本研究进一步研究当结直肠癌细胞转移到肝脏定植后，IL-17A 在结直肠癌肝转移灶中所发挥的作用是否与原发性肝癌有相似之处。有研究[20,21]发现原发性肝癌肿瘤组织中IL-17A 的表达水平明显高于相应的非肿瘤组织，IL-17A 的高表达与原发性肝癌患者的预后不良有关。在原发性肝癌中，IL-17A 通过诱导组织重塑和血管生成促进疾病的进展[22,23]。另一方面，在结直肠癌中，IL-17A 可通过激活STAT3 信号通路增强结直肠癌细胞的增殖和迁移能力，从而促进肝转移的发生[24]。而且本研究中我们发现结直肠癌肝转移灶组织中的IL-17A 的表达显著高于原发性肝癌组织，IL-17A 高表达与结直肠癌易于发生肝转移的临床现象有关。但是IL-17A 在结直肠癌肝转移瘤与原发性肝癌中的作用是否一致还有待更多研究探讨。综上，IL-17A 在结直肠癌的原发灶和肝转移灶、原发性肝癌均呈高表达，且明显高于远癌正常肠黏膜和肝组织，提示IL-17A 的高表达可能与肿瘤的发生发展有关。并且结直肠癌肝转移灶组织中IL-17A 的表达率要高于原发性肝癌组织，提示IL-17A 高表达与结直肠癌易于发生肝转移的临床现象有关。IL-17A 的高表达可能促进结直肠癌发生肝转移，但其具体机制仍需一步探讨。本研究的不足之处在于样本量小，检测方法也比较单一，因此还需要大样本的观察及体内外模型验证。