柳惠荣

(菏泽市中医医院口腔科，山东 菏泽 274035)

口腔扁平苔藓(OLP)是一种多因素诱发的慢性炎症性疾病，其发病机制尚不明确。有研究表明，免疫因素在OLP的发病中发挥重要作用。OLP根据病损基底部黏膜状况可分为糜烂型OLP(EOLP)和非糜烂型OLP(NEOLP)。细胞因子是由免疫细胞(如T细胞、B细胞、单核巨噬细胞、自然杀伤细胞等)和某些非免疫细胞(内皮细胞、表皮细胞、成纤维细胞等)经刺激而合成、分泌的一类具有广泛生物学活性的小分子蛋白质。细胞因子在OLP的发病过程中发挥一定作用[1-3]。本研究应用流式微球分析(CBA)技术，即微量样本多指标流式蛋白定量技术检测OLP患者血清和唾液中Th1/Th2/Th17型细胞因子水平，旨在更深入地了解OLP发病机理。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2017年1月至2019年10月本院口腔科OLP患者26例，并分为NEOLP组(14例)和EOLP组(12例)。纳入标准：(1)经详细询问病史及常规口腔检查，根据临床表现、组织病理学检查诊断为口腔扁平苔藓；(2)全身无系统性疾病，如糖尿病、高血压、肿瘤、贫血等；(3)近3个月内未使用激素类或免疫抑制剂类药物等；(4)无重度牙周病及其他口腔黏膜病；(5)1个月内未使用抗生素类药物，3个月内未使用过免疫制剂者。NEOLP组中男5例，女9例，中位年龄38岁(17～62岁)。EOLP组中男4例，女8例，中位年龄39岁(17～60岁)。同时选取无口腔、皮肤扁平苔藓病史及其他系统性疾病史等健康志愿者25例作为对照组，其中男9例，女16例，中位年龄40岁(17～62岁)。所有研究对象均签署知情同意书。3组一般资料比较，差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。

1.2方法 于清晨采取患者空腹静脉血2 mL，对照组则在体检时抽取，离心15 min后取血清，置于—80 ℃冰箱保存。于上午9：00点左右收集非刺激性全唾液2 mL。在收集样本前2 h内禁食、禁饮或任何口腔卫生措施等。在2 h内转移至实验室，离心10 min后弃沉淀，取上清液置于—80 ℃冰箱保存。测试前室温解冻样本，应用CBA技术，采用流式细胞仪(美国BD公司)测定血清和唾液中Th1/Th2/Th17型细胞因子浓度，包括白细胞介素(IL)-2、IL-4、IL-6、IL-10、IL-17A、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和γ-干扰素(IFN-γ)。操作按照试剂盒(江西诺德医疗器械有限公司)操作说明书进行。每个样本管中加入25 μL捕获微球混合液后离心5 min，吸取上清，加入等体积微球缓冲液，混匀后室温避光30 min；加入待测样本和荧光检测试剂各25 μL，充分混匀后室温避光孵育2.5 h；随后加入1 mL磷酸盐缓冲液(PBS)，离心5 min，吸取上清，再加入0.3 mL PBS上机检测。采用CELLQuest软件获取并分析数据。

2 结 果

2.13组血清Th1/Th2/Th17型细胞因子水平比较 3组血清IL-2、IL-10和IFN-γ水平比较，差异均无统计学意义(P>0.05)。EOLP组和NEOLP组血清IL-4、IL-6、IL-17A和TNF-α水平均高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。EOLP组上述各指标与NEOLP组比较，差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。

表1 3组血清Th1/Th2/Th17型细胞因子水平比较

2.23组唾液中Th1/Th2/Th17型细胞因子水平比较 三组唾液中IL-2、IL-10和IFN-γ水平比较，差异无统计学意义(P>0.05)。EOLP组和NEOLP组唾液中IL-4、IL-6、IL-17A和TNF-α水平均高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。EOLP组上述各指标与NEOLP组比较，差异无统计学意义(P>0.05)。见表2。

表2 3组唾液中Th1/Th2/Th17型细胞因子水平比较

2.3血清和唾液中Th1/Th2/Th17型细胞因子水平相关性分析 血清和唾液中Th1/Th2/Th17型细胞因子水平无相关性(P>0.05)。见表3。

表3 血清和唾液中Th1/Th2/Th17型细胞因子水平相关性分析

3 讨 论

OLP是一种常见的口腔黏膜慢性炎性疾病，表现为患病部位疼痛、粗糙不适。目前，临床认为OLP是一种T细胞介导的自身免疫性疾病[1-3]。CD4+T细胞分可化为Th1、Th2和Th17细胞等，其中Th1细胞主要分泌IFN-γ、IL-2和TNF-α等细胞因子，参与细胞免疫及迟发性超敏反应；Th2细胞分泌IL-4、IL-5、IL-6和IL-10等细胞因子，与体液免疫相关。OLP大致分为糜烂型和非糜烂型(以网纹型为主)，二者发病机理是否存在一定差异，相关研究较少见。CBA技术是一个基于流式细胞检测系统的多重蛋白定量检测方法，能够同时对单个样品中的多个指标进行检测，具有高通量、高特异性、高灵敏性、操作简便、低成本、重复性好、快速检测等优势，缩短了检测时间，提高了检测效率。

IL-4主要作用为促进B细胞增殖和分化，刺激B细胞合成免疫球蛋白E。OLP患者血清及唾液中IL-4水平均高于健康人[4]，其外周血CD4+T淋巴细胞的组蛋白H3位乙酰化水平会降低。采用CBA技术测定外周血40种细胞因子发现，乙酰化水平与IL-4和人单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)水平呈负相关，这解释了IL-4增高的原因[5]。IFN-γ主要由活化的T细胞和自然杀伤细胞产生，是一种促炎细胞因子，可增强T细胞对IL-2促增殖反应的敏感度和强度[6]。WANG等[2]研究显示，OLP患者外周血及受损局部组织IFN-γ和IL-4水平均增高，且IFN-γ/IL-4比值增高，提示存在Th1/Th2免疫失衡。陈琼等[7]研究发现，OLP患者血清IFN-γ水平降低和IL-4水平增高导致IFN-γ/IL-4比值降低是OLP的免疫病因学因素之一，且IL-17蛋白表达增高主要与EOLP炎症过程有关。本研究结果显示，OLP患者血清和唾液中IFN-γ水平与健康人比较无显著差异，且EOLP型和NEOLP型之间也无显著差异；IL-4水平增高程度与IL-6、IL-17A和TNF-α比较并不明显。因此，IFN-γ和IL-4水平变化是否在OLP发病过程中起主要作用有待于进一步研究。

IL-10是由单核巨噬细胞分泌的介导免疫抑制的细胞因子，其能够抑制Th1细胞合成IL-2和IFN-γ。有研究显示，OLP患者唾液中IL-4、IL-6、IL-8、TNF-α和IFN-γ水平增高[8]。WEI等[3]采用CBA技术测定OLP患者细胞因子，结果显示，唾液中IL-6、IL-10和IFN-γ水平增高，并且增高程度与疾病严重程度呈一定相关性。ZHOU等[9]研究发现，血清IL-10水平与健康人相比无显著差异。一项荟萃分析显示，OLP患者IL-10水平变化有增高、无变化、降低等不同结果[10]。本研究结果显示，血清和唾液中IL-10和IFN-γ水平并不增高。不同研究结果差异较大的原因可能与患者疾病严重程度、样本来源、测定时机等多种因素有关。

IL-6是由成纤维细胞、单核/巨噬细胞、淋巴细胞及上皮细胞等多种细胞所产生，具有多种生物学作用，如诱导B细胞分化，诱导IL-2和IL-2受体表达等。一项荟萃分析显示，NEOLP组、EOLP组患者血清和唾液中IL-6水平增高但无显著差异，且唾液中IL-6水平增高更加明显，提示测定唾液中IL-6水平有助于OLP的诊断及治疗监测[11-12]。本研究结果显示，NEOLP组、EOLP组唾液中IL-6水平均高于血清IL-6水平。提示可能测定唾液中IL-6水平更加具有临床意义。李新等[13]应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测OLP患者唾液中氧化应激指标和核因子-κB相关炎症因子，用氧化应激损伤的产物来反映氧化应激水平，如脂质过氧化损伤产生的丙二醛(MDA)，DNA氧化损伤产生的8-羟基脱氧鸟苷(8-OHDG)等能间接反映体内的氧化应激状态。结果显示，NEOLP组、EOLP组MDA、8-OHDG、TNF-α、IL-6和IL-8水平增高，提示OLP患者存在高氧化应激状态，氧化应激参与OLP的发生与发展。KAUR等[14]研究显示，OLP患者血清和唾液中IL-6、IL-8和TNF-α水平均增高，且血清和唾液中这些指标存在一定相关性。本研究结果显示，血清和唾液中7种细胞因子水平无相关性。血清与唾液中细胞因子来源是否一致有待于进一步研究。OLP患者血清和唾液中IL-10水平在糜烂组、网纹组及对照组之间无显著差异，而TNF-α水平在糜烂组和网纹组中增高，且糜烂组TNF-α水平高于网纹组[15]。本研究结果显示，血清和唾液中IL-10水平在各组间无显著差异。OLP患者口腔成成纤维细胞在牙龈卟啉单胞菌脂多糖刺激下表达α-平滑肌肌动蛋白，具有肌成纤维细胞的特性，可以分泌IL-6、IL-8和TNF-α[16]。因此，成纤维细胞可能是这些细胞因子的来源之一。

IL-17A是Th17细胞分泌产生的主要细胞因子，与炎症发展、免疫应答、免疫排斥等多种生物学活性有关。OLP患者血清IL-17A水平较健康人增高，但不同疾病类型之间无显著差异，且IL-17A G197A基因多态性与OLP有一定相关性，GA或AA型更加容易发生OLP[17]。KAUR等[14]研究发现，EOLP组唾液中IL-17水平高于网纹组和对照组，且IL-17水平与疾病严重程度呈正相关。毛其芬等[18]采用ELISA测定OLP患者外周血细胞因子水平，EOLP组IL-17水平增高，而NEOLP组IL-4、IL-10水平增高。

综上所述，血清和唾液中IL-4、IL-6、IL-17A和TNF-α水平变化是促进OLP的部分原因。唾液在标本采集方面比血清有优势，运用唾液细胞因子将OLP病情量化可为其后续治疗及随访监测提供依据。各种细胞因子异常变化在不同研究中得到的结果存在一定差异，可能与不同病情严重程度、患者年龄和性别影响、测定方法不同等因素有关。本研究采用CBA技术同时测定7种细胞因子，具有明显优势。针对异常变化细胞因子的治疗，如IL-6和TNF-α的单克隆抗体是否能够成为治疗OLP的新措施需要进一步研究。